劉志云，闕國鷹

(中南大學(xué)湘雅醫(yī)院口腔內(nèi)科，湖南 長沙 410008)

唾液粘蛋白由人的頜下腺、舌下腺和小唾液腺的粘液腺泡細(xì)胞分泌，是人唾液中具有重要意義的糖蛋白，根據(jù)其結(jié)構(gòu)和生物學(xué)特性，分為高相對分子質(zhì)量唾液粘蛋白(high－molecular－weight salivary mucin，MG1)和低相對分子質(zhì)量唾液粘蛋白(low molecular－weight salivary mucin，MG2)。MG1 是獲得性膜的主要成分［1－2］，它能保持牙體組織免受機(jī)械、化學(xué)等刺激因素對牙面的磨損和腐蝕，另外對口腔微生物有凝集作用，使其不能附著于宿主組織，從而具抗齲性［3－4］。因此，定量研究不同人群不同唾液粘蛋白含量對探索齲病病因和指導(dǎo)齲病預(yù)防有一定的意義。本研究旨在通過分析不同患齲狀況兒童唾液中MG1的含量，探討其與齲病之間的關(guān)系。

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)對象和分組

按照第三次全國口腔健康流行病學(xué)調(diào)查的要求，隨機(jī)抽取本市兩所幼兒園3～5歲幼兒305名，由一名經(jīng)培訓(xùn)并經(jīng)2次標(biāo)準(zhǔn)一致性檢驗(yàn)，Kappa值分別為0.89、0.91，可靠度優(yōu)的口腔醫(yī)師參照世界衛(wèi)生組織(WHO)《口腔健康調(diào)查的基本方法》［5］規(guī)定的齲病診斷標(biāo)準(zhǔn)，檢查所有兒童的患齲情況，并以齲失補(bǔ)牙數(shù)(dmft)表示。根據(jù)患齲狀況將305名兒童分為3組:①無齲組(dmft=0);②低齲組:(dmft=1～4);③高齲組(dmft≥5)。然后，再從每組中各隨機(jī)抽取性別、年齡相當(dāng)者20名，共60名幼兒參加實(shí)驗(yàn)。其中(男32名，女28名;3歲19名，4歲19名，5歲22名)，均為完整乳牙列，無全身性、遺傳性疾病，無長期使用含氟漱口水、含抗菌藥物漱口水史，近1個(gè)月未服用任何藥物。

1.2 齲活性(CAT)試驗(yàn)

用刃天青紙片(RD)法對抽取的60名不同患齲狀況幼兒進(jìn)行齲活性試驗(yàn)。

1.2.1 刃天青試紙的制作

分別稱取10 g蔗糖、0.2 g 聚乙烯醇、0.0275 g刃天青，溶于100 mL去離子水中，充分溶解后高壓滅菌，冷卻至室溫后用磷酸鹽緩沖液調(diào)pH值為7.0。然后將濾紙片浸泡于上述刃天青液中，2 h后取出置恒溫箱中烘干備用。

1.2.2 檢測方法

用無菌鑷子將刃天青紙片置受試幼兒舌下，待紙片完全濕潤后取出，夾于兩層消毒聚乙烯薄膜中，立即放入37℃恒溫箱。15 min后取出刃天青紙片，由一名無色弱、色盲，且經(jīng)培訓(xùn)合格的口腔醫(yī)師對照標(biāo)準(zhǔn)比色板觀察刃天青紙片的變色程度，并按以下標(biāo)準(zhǔn)判定結(jié)果:紫藍(lán)色(－)，CAT記分為0;紫紅色(+)，記分為1;紅色(++)，記分為2;紅色變?yōu)榘咨?+++)，記分為3。

1.3 高分子質(zhì)量唾液粘蛋白(MG1)檢測

1.3.1 樣本采集

采用吐出法收集所有受試幼兒非刺激性唾液3～5 mL，用于MG1測定。要求所有受試幼兒在唾液收集前2 h不進(jìn)食，用清水漱口后，靜坐低頭，棄去第一口唾液，然后再將唾液吐于容器中。

1.3.2 MG1 測定

將收集的唾液10000 r/min離心10 min，取上清液用pH=7的PBS緩沖液稀釋1000倍后，按照人高相對分子質(zhì)量唾液粘蛋白ELISA試劑盒說明測定各唾液樣本中的MG1濃度。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

用SPSS 17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，兩樣本間均數(shù)比較用t檢驗(yàn)，兩變量之間相關(guān)性分析采用非參數(shù)spearman等級相關(guān)系數(shù)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 患齲狀況

所抽取的60名幼兒總齲均為2.92，其中男2.94，女 2.89;3 歲組 2.89，4 歲組 2.59，5 歲組3.16，經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析，男女之間，3個(gè)年齡段之間齲均差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。

2.2 齲活性試驗(yàn)結(jié)果

2.2.1 不同患齲程度組齲活性(CAT)比較

不同患齲程度組CAT值各不相同，其中高齲組最高，低齲組次之，無齲組最低，各組間兩兩比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)(表1)。

表1 不同患齲程度組CAT值比較()

表1 不同患齲程度組CAT值比較()

不同字母組間P＜0.05

組別 齲均 CAT值無齲組 0 0.45 ±0.31A低齲組 2.00 ±0.79 1.40 ±0.82B高齲組 6.75 ±1.44 2.22 ±0.77C

2.2.2 齲活性(CAT)與dmft的關(guān)系

如表2所示隨CAT值的增高，dmft亦呈增多趨勢，經(jīng)非參數(shù)spearman等級相關(guān)分?jǐn)?shù)分析，r=0.728，雙側(cè)檢驗(yàn) P ＜0.01，CAT 值與 dmft呈正相關(guān)(圖1)。

表2 不同CAT值情況下患齲狀況(dmft)比較

圖1 dmft與CAT的關(guān)系

2.3 MG1 檢測結(jié)果

2.3.1 不同患齲程度組MG1比較

60名幼兒MG1平均含量為13.07 mg/L，其中無齲組為13.63 mg/L;低齲組為12.96 mg/L;高齲組為12.61 mg/L。無齲組與高齲組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，而無齲組與低齲組相比，低齲組與高齲組相比差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＞0.05)(表3)。

表3 不同患齲程度組MG1含量比較(mg/L，)

表3 不同患齲程度組MG1含量比較(mg/L，)

不同字母組間P＜0.05

MG1無齲組 20 0 13.63 ±1.44組別 人數(shù) 齲均A低齲組 20 2.00 ±0.79 12.96 ±1.49AB高齲組 20 6.75 ±1.44 12.61 ±1.18B

2.3.2 不同患齲程度組內(nèi)男、女MG1含量比較

在無齲組以及低齲組中男生與女生MG1平均含量相比差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);而在高齲組中男生MG1平均含量高于女生，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。男、女生總體MG1平均含量相比，差異亦無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P＞0.05)(表4)。

表4 不同性別MG1含量比較(mg/L，)

表4 不同性別MG1含量比較(mg/L，)

* 男女相比P＜0.05

性別 無齲組 低齲組 高齲組 總體男 13.84 ±1.38 13.18 ±1.71 13.14 ±1.23*13.35 ±1.46女 13.45 ±1.54 12.65 ±1.10 11.98 ±1.75 12.75 ±1.33合計(jì) 13.63 ±1.44 12.96 ±1.49 12.61 ±1.18 13.07 ±1.42

2.3.3 不同年齡MG1含量比較(表5)

表5 不同年齡組MG1含量比較(mg/L，)

表5 不同年齡組MG1含量比較(mg/L，)

各組間兩兩比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P＞0.05

組別(歲) 人數(shù) MG1(mg/L)319 12.78 ±1.50419 13.16 ±1.3322 13.21 ±1.445

3 討論

唾液粘蛋白是口腔非免疫性保護(hù)的重要組成成分，其預(yù)防齲病的作用已經(jīng)被證實(shí)［1－4］。但是MG1與患齲狀況之間的關(guān)系以及唾液中MG1的含量是否與齲病的發(fā)生發(fā)展有關(guān)，目前國內(nèi)外尚未見報(bào)道，本研究采用ELISA試劑盒檢測不同齲易感兒童唾液中MG1的含量，以探討其與齲病之間的關(guān)系。

齲活性試驗(yàn)(caries activity test)是檢測個(gè)人或人群可能發(fā)生齲病危險(xiǎn)敏感程度的方法，有物理學(xué)檢測、致齲菌檢測、酸性產(chǎn)物檢測、唾液緩沖能力檢測等多種途徑。刃天青紙片法是檢測致齲菌的一種齲活性試驗(yàn)，具有經(jīng)濟(jì)、快捷、便于篩查的優(yōu)點(diǎn)［5－8］，目前尚未見有關(guān)刃天青毒性的相關(guān)報(bào)道。

對于患齲程度的劃分，目前還沒有明確的界定。無齲組DMFT=0這個(gè)比較明確，但是對于高齲組的劃分卻沒有一個(gè)統(tǒng)一的指標(biāo)。有學(xué)者以DMFS≥8定為高齲組［9］，有學(xué)者以 DMFT≥6定為高齲組［10］，也有以 DMFT≥5 定為高齲組［11］，另外有學(xué)者直接按是否患齲分為無齲組和有齲組［12－13］。本研究分組采用馮靳秋、石四箴等［11］研究兒童唾液富組蛋白含量與患齲狀況分析中的分組方法，按乳牙齲、失補(bǔ)牙數(shù)dmft=0、dmft=1～4、dmft≥5分為無齲組、低齲組和高齲組，并采用刃天青紙片法對各分組的CAT值進(jìn)行檢測，結(jié)果顯示各組之間的齲活性差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，無齲組齲活性低于低齲組，低齲組齲活性低于高齲組，說明按照此方法分組可以區(qū)分出不同齲易感人群，從而也說明該分組方法是可靠的。另外本研究還對齲患狀況進(jìn)行分析，結(jié)果顯示受調(diào)查的60名兒童dmft與性別和年齡之間沒有關(guān)系，從而排除了性別和年齡對DMFT分組的干擾。

本研究刃天青紙片法結(jié)果顯示dmft與CAT值呈線性關(guān)系(P＜0.01)，表明隨著CAT值增高，齲易感性也增加，因此幼兒患齲危險(xiǎn)性高。另外，不同患齲程度組的齲活性比較，結(jié)果顯示dmft≥5的兒童齲活性明顯高于dmft＜5的兒童，說明dmft≥5的兒童發(fā)生齲病的風(fēng)險(xiǎn)性高，提示我們在臨床工作中應(yīng)重點(diǎn)關(guān)注dmft≥5的人群，一方面及時(shí)治療患牙，另一方面要重視他們的口腔衛(wèi)生保健教育，注意口腔衛(wèi)生，合理飲食，定期對他們進(jìn)行齲齒的普查普治工作。

本研究還分析了MG1含量與齲病風(fēng)險(xiǎn)性的關(guān)系，結(jié)果顯示無齲兒童唾液中 MG1的含量為13.63 mg/L，顯著高于高齲組 12.61 mg/L(P＜0.05)。從總體來看，MG1含量無齲組＞低齲組＞高齲組，隨著患齲程度增加，MG1的含量降低，原因在于MG1具有抗齲作用，隨著MG1的含量增高，其齲病易感性降低，因此患齲程度也降低，此結(jié)果反過來也驗(yàn)證了MG1具有一定的抗齲作用，同時(shí)也說明唾液中MG1的含量與齲病的發(fā)生發(fā)展有一定的聯(lián)系。

林琴、白潔等［14］研究顯示3～4歲兒童男女間非刺激性唾液總蛋白含量不同，男生唾液總蛋白含量高于女生，但在本研究所涉及的3～5歲年齡組范圍無齲組、低齲組MG1含量未發(fā)現(xiàn)不同性別間存在差異，高齲組MG1含量雖然男女之間有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，但總體情況看男女MG1含量也無差異，說明不同性別間MG1的含量相同。

Ruhl S、Rayment等［15］研究發(fā)現(xiàn)在嬰兒出生的第一年里，唾液中MG1的含量逐漸增高，而MG2的含量則逐漸減少，這說明在嬰兒的成長過程中唾液的成分是不斷變化的。Sonesson等［16］研究3歲、14歲以及20～25歲年齡組發(fā)現(xiàn)，MG1含量在小唾液腺的分泌各年齡組存在差異，3歲組MG1含量明顯低于成年人。本研究結(jié)果顯示，抽查的3～5歲年齡組范圍兒童不同年齡唾液中MG1含量無差異。

［1］樊明文.口腔生物學(xué)［M］.北京:人民衛(wèi)生出版社，1996:46－55.

［2］劉正.口腔生物學(xué)［M］.2版.北京:人民衛(wèi)生出版社，2004:50.

［3］Kesimer M，Kilic N，Mehrotra R，et al.Identification of salivary mucin MUC7 binding proteins from Streptococcus gordonii［J］.Bmc Microbiol AUG，2009，9:163.

［4］Slomiany BL，Murty VLN，Protrowski J，et al.Salivary mucins in oral mucosal defense［J］.Gen Pharmac，1996，27(5):761 －771.

［5］黎淑芳，何克新，雷月娟，等.刃天青紙片法對齲易感兒童的應(yīng)用評價(jià)［J］.牙體牙髓牙周病學(xué)雜志，2007，17(1):649－651.

［6］何克新，李志輝，朱蓮娜，等.刃天青紙片法預(yù)測齲活性的研究［J］.廣東牙病防治，2005，13(3):214－215.

［7］李文顏，高洪巖，郝愛國.快速齲病活躍性檢測－刃天青藥片的研究［J］.現(xiàn)代口腔醫(yī)學(xué)雜志，2007，21(6):567－569.

［8］Prutz WA，Butler J，Land EJ.Photocatalytic and free radical interactions of the heterocyelie N－oxide resazurin with NADH ，GSH，and Dopa［J］.Arch Biochem Biophys，1996，327(2):239－248.

［9］岳林，邱麗慧，高學(xué)軍，等.唾液及菌斑液中蛋白成分與齲易感性的關(guān)系［J］.中華口腔醫(yī)學(xué)雜志，2002，37(1):39 －42.

［10］周學(xué)東，齊雪，張靜儀，等.乳牙菌斑中蛋白水解酶與乳牙齲關(guān)系的初步研究［J］.華西口腔醫(yī)學(xué)雜志，1999，17(4):367－368.

［11］馮靳秋、石四箴.兒童唾液富組蛋白含量與患齲狀況的分析［J］.實(shí)用口腔醫(yī)學(xué)雜志，2005，21(6):800 －803.

［12］馮林，高學(xué)軍.菌斑PH值、游離鈣和總蛋白水平與根齲易感性的關(guān)系［J］.中華口腔醫(yī)學(xué)雜志，2000，35(2):132 －134.

［13］蒲高成.無齲和患齲兒童唾液中免疫組分的測定及意義［J］.現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生，2007，23(7):958 －959.

［14］林琴，白潔，包振英，等.3～4歲兒童唾液蛋白含量的研究［J］.實(shí)用口腔醫(yī)學(xué)雜志，2007，23(4):568－570.

［15］Ruhl S，Rayment SA，Schmalz G，et al.Proteins in whole saliva during the first year of infancy［J］.J Dent Res，2005，84:29－34.

［16］Sonesson M，Wickstrom C，Kinnby B，et al.Mucins MUC5B and MUC7 in minor salivary gland secretion of children and adults［J］.Arc Oral Biol，2008，53(6):523 － 527.