張桂芬 ，孟祥欽 ，萬(wàn)方浩中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所，植物病蟲(chóng)害生物學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京100193;農(nóng)業(yè)部外來(lái)入侵生物預(yù)防與控制研究中心，北京100081

西花薊馬Frankliniella occidentalis(Pergande)是纓翅目(Thysanoptera)薊馬科(Thripidae)花薊馬屬的一種昆蟲(chóng)，為美國(guó)和加拿大西部洛基山脈常見(jiàn)的一種重要害蟲(chóng)，最早記載于1895年(Beshear，1983)。近30年來(lái)，隨著全球經(jīng)濟(jì)一體化進(jìn)程的加快和國(guó)際貿(mào)易活動(dòng)的日趨頻繁，西花薊馬迅速傳播擴(kuò)散，已經(jīng)在北美、歐洲、亞洲、南美、非洲和大洋洲的許多國(guó)家建立種群，并暴發(fā)成災(zāi)(Kirk＆Terry，2003)。為此，我國(guó)農(nóng)業(yè)部于1996年將西花薊馬列為進(jìn)境植物檢疫潛在的危險(xiǎn)性害蟲(chóng)。目前已命名的薊馬種類有5500余種(Mound＆Morris，2004)，其中，我國(guó)的薊馬種類約300種，分屬104屬(韓運(yùn)發(fā)，1997;張友軍等，2003;魏書(shū)軍等，2010)。其入侵我國(guó)的歷史較短，2000年在昆明國(guó)際花卉節(jié)參展的緬甸盆景上被首次截獲(蔣小龍等，2001);2003年在北京溫室的辣椒上被發(fā)現(xiàn)(張友軍等，2003);之后在云南(徐家菊和韋麗莉，2005)、山東(鄭長(zhǎng)英等，2007)等地陸續(xù)發(fā)生危害。

西花薊馬為多食性害蟲(chóng)，可以在包括菊科、葫蘆科、茄科、豆科、十字花科等在內(nèi)的60多個(gè)科500多種植物上取食為害(Yudin et al.，1986;Moritz，2002)。西花薊馬的危害方式主要有2種:(1)產(chǎn)卵為害或以銼吸式口器取食為害，不僅降低產(chǎn)量，使花卉喪失觀賞價(jià)值，而且嚴(yán)重影響果實(shí)的品質(zhì)(Robb ＆ Parrella，1989;Cockfield et al.，2007);(2)傳播植物病毒，如番茄斑萎病毒(tomato spotted wilt virus，TSWV)(Gardener et al.，1935)、鳳仙斑點(diǎn)壞死病毒(impatiens necrotic spot virus，INSV)(Deangelis et al.，1993;Wijkamp ＆ Peters，1993)、花生環(huán)斑病毒(groundnut ringspot virus，GRSV)、番茄褪綠斑點(diǎn)病毒(tomato chlorotic spot virus，TCSV)(Wijkamp et al.，1995)以及菊花莖壞死病毒(chrysanthemum stem necrosis virus，CSNV)(Bezzara et al.，1999)等，使病毒病大流行，造成植物嚴(yán)重減產(chǎn)甚至絕收(Jones，2005)。西花薊馬適生區(qū)廣泛(程俊峰等，2006;陳洪俊等，2007年)，易造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。目前僅在我國(guó)局部地區(qū)發(fā)生危害(張友軍等，2003、2004;徐家菊和韋麗莉，2005;鄭長(zhǎng)英等，2007)，但具有進(jìn)一步擴(kuò)散蔓延的趨勢(shì)，快速準(zhǔn)確的檢測(cè)鑒定技術(shù)是有效遏制其進(jìn)一步發(fā)生危害的首要條件。因此，本文概述了西花薊馬檢測(cè)鑒定技術(shù)研究進(jìn)展。

1 傳統(tǒng)的形態(tài)學(xué)鑒定法

傳統(tǒng)的形態(tài)學(xué)鑒定法直觀且成本低，因此在西花薊馬的識(shí)別中發(fā)揮了巨大作用。如雷仲仁等(2004)根據(jù)單眼鬃和復(fù)眼后最長(zhǎng)鬃的長(zhǎng)度比較、后胸盾片感覺(jué)器的有無(wú)、腹部第8節(jié)背板后緣梳毛是否完整和寄主植物范圍等，將西花薊馬與其近緣種花薊馬F.intonsa(Trybom)和禾花薊馬F.tenuicornis(Uzel)進(jìn)行了區(qū)分。張維球和曾玲(2004)編制了鑒定檢索表，用于區(qū)分我國(guó)報(bào)道的棉花薊馬F.gossypii(Shirak)、花薊馬、百合花薊馬F.lilivora Kurosawa、柳花薊馬 F.saliscis Moulton、禾花薊馬、威廉斯花薊馬F.williamsi Hood、茭筍花薊馬 F.zizaniophila Han et Zhang，其中，棉花薊馬、百合花薊馬、柳花薊馬、威廉斯花薊馬僅記錄于臺(tái)灣。劉寧等(2005)采用鑒定檢索表區(qū)分西花薊馬和3種溫室薊馬［煙薊馬Thrips tabaci L.、花薊馬、佛羅里達(dá)花薊馬 F.bispinosa(Morgan)］。

西花薊馬個(gè)體微小，與其他種類的薊馬形態(tài)相似，在鑒別時(shí)需要專業(yè)人員將成蟲(chóng)制成玻片標(biāo)本，并借助顯微鏡方可明確其種類(Fedor et al.，2008)。然而，形態(tài)學(xué)特征的掌握與熟練應(yīng)用，即使對(duì)專門從事薊馬分類的人員而言亦非易事(Gaston＆May，1992)，加之形態(tài)學(xué)鑒定方法對(duì)成蟲(chóng)前的蟲(chóng)態(tài)(包括卵、若蟲(chóng)、前蛹、蛹)以及殘缺的標(biāo)本無(wú)能為力，因此限制了該方法的廣泛應(yīng)用。但是，與分子生物技術(shù)的結(jié)合與應(yīng)用，促進(jìn)了傳統(tǒng)分類學(xué)的快速發(fā)展(Charles ＆ Godfray，2002)。

2 分子檢測(cè)鑒定技術(shù)

西花薊馬的分子檢測(cè)鑒定技術(shù)主要是根據(jù)西花薊馬和其他種類薊馬的靶標(biāo)DNA序列或蛋白質(zhì)的差異進(jìn)行區(qū)分(表1)。該技術(shù)不受蟲(chóng)態(tài)或齡期的限制，且對(duì)于殘缺的標(biāo)本也可進(jìn)行鑒別。與傳統(tǒng)的形態(tài)學(xué)鑒定法相比，分子檢測(cè)技術(shù)結(jié)果穩(wěn)定、靈敏度高、重現(xiàn)性好且簡(jiǎn)便易行，只需對(duì)相關(guān)人員進(jìn)行簡(jiǎn)單的培訓(xùn)即可完成操作(Darling＆Blum，2007)。目前已有多種分子標(biāo)記技術(shù)用于薊馬的鑒定，主要包括隨機(jī)多態(tài)性 DNA(random amplified polymorphic DNA，RAPD)標(biāo)記技術(shù)、DNA序列分析法(DNA sequencing)、限制片段長(zhǎng)度多態(tài)性(restriction fragment length polymorphism，RFLP)標(biāo)記技術(shù)、特征序列擴(kuò)增區(qū)域(sequence characterized amplified regions，SCAR)標(biāo)記技術(shù)和實(shí)時(shí)熒光定量PCR(realtime fluorescent qauantitative PCR，qPCR)檢測(cè)技術(shù)以及蛋白質(zhì)分析技術(shù)［包括單克隆抗體—酶聯(lián)免疫吸附劑(monoclonal antibodies enzyme-linked immunosorbent assay，Mab-ELISA)檢測(cè)法和十二烷基磺酸鈉—聚丙烯酰胺凝膠電泳(sodium dodecylsulphate-polyacrylamide gel electrophoresis，SDS-PAGE)法］等。

表1 用于薊馬鑒別的分子檢測(cè)技術(shù)Table 1 Molecular techniques for identification of thrips species

2.1 RAPD 標(biāo)記技術(shù)

RAPD技術(shù)以基因組DNA為靶標(biāo)，通過(guò)選用一系列的簡(jiǎn)并引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增及電泳檢測(cè)得到豐富的帶型，然后在比較不同物種帶型間差異的基礎(chǔ)上進(jìn)行種類識(shí)別。如Bayar et al.(2002)針對(duì)6種薊馬以15條RAPD引物獲得了103條片段。其中，引物OPB06可用于鑒別花薊馬、豌豆薊馬Kakothrips robustus(Uzel)、間紋薊馬Aeolothrips intermedius Bagnall、Odontothrips confuses Priesner、煙薊馬和Thrips dilatatus Uzel;引物OPD05可區(qū)分豌豆薊馬、間紋薊馬、O.confusus和煙薊馬;引物 NO11和OPQ14可有效地區(qū)分間紋薊馬和花薊馬;而引物OPA08可用于鑒別間紋薊馬的雌性和雄性。RAPD檢測(cè)技術(shù)簡(jiǎn)便易行，成本低;但穩(wěn)定性差，檢測(cè)結(jié)果易受DNA質(zhì)量、PCR試劑、儀器等因素的影響，因此已逐漸被SCAR標(biāo)記技術(shù)取代(Chakrabarti et al.，2006)。

2.2 DNA序列分析法

昆蟲(chóng)的線粒體基因組 DNA分子比較小，為15.4 ～16.3 kb，含有3 個(gè)細(xì)胞色素氧化酶亞基基因Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ(mitochondria cytochrome oxidase subunitsⅠ，Ⅱ，Ⅲ;mtDNA COⅠ，mtDNA COⅡ，mtDNA COⅢ)(Flook et al.，1995)，為多拷貝，結(jié)構(gòu)和組織簡(jiǎn)單且高度保守，母系遺傳，缺乏重組，DNA突變率高，進(jìn)化速率比核DNA快，檢測(cè)靈敏度高(Hoelzel，1991;Hoy，1994)。因此，在薊馬類昆蟲(chóng)的分子檢測(cè)鑒定中得到了廣泛應(yīng)用(Brunner et al.，2002;Kox et al.，2005;游中華等，2007;Mainali et al.，2008;Timm et al.，2008)。如游中華等(2007)利用Brunner et al.(2002)設(shè)計(jì)的簡(jiǎn)并引物 mtD-7.2F 和mtD-9.2R擴(kuò)增出包括西花薊馬在內(nèi)的9種薊馬的COI基因片段(433 bp)，然后通過(guò)對(duì)PCR產(chǎn)物的直接測(cè)序及序列分析，準(zhǔn)確地鑒別不同蟲(chóng)態(tài)的西花薊馬。此外，線粒體DNA序列分析法所獲得的大量的序列信息和一系列的通用引物(Timm et al.，2008)，可用于以后的研究。如 Brunner et al.(2002)根據(jù)所選薊馬mtDNA COI基因的堿基序列設(shè)計(jì)的1對(duì)簡(jiǎn)并引物(mtD-7.2F 和 mtD-9.2R)，曾被許多研究人員采用(Asokan et al.，2007;游中華等，2007;周力兵等，2007)。盡管mtDNA序列分析法需要對(duì)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序及序列分析，但鑒定人員只需具有基本的分子生物學(xué)知識(shí)和技能，接受簡(jiǎn)單的培訓(xùn)后便可熟練應(yīng)用。

2.3 PCR-RFLP 標(biāo)記技術(shù)

PCR-RFLP技術(shù)將PCR技術(shù)與RFLP技術(shù)相結(jié)合，通過(guò)選取一對(duì)引物擴(kuò)增靶標(biāo)序列，然后篩選合適的限制性內(nèi)切酶對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行酶切，根據(jù)酶切圖譜計(jì)算類群之間的遺傳距離，并構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)，或者直接根據(jù)酶切圖譜判斷是否為靶標(biāo)類群。RFLP技術(shù)可用于鑒別分類地位十分相近的物種，具有快速、靈敏、簡(jiǎn)便、穩(wěn)定等特性(Mainali et al.，2008)。PCR-RFLP技術(shù)選用的靶標(biāo)序列通常為核糖體DNA的內(nèi)轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)(internal transcribed spacer，ITS) 和線粒體 DNA(mitochondrial DNA，mtDNA)。其中，ITS以高拷貝的串聯(lián)形式存在，進(jìn)化程度適中(Tautz et al.，1988);而昆蟲(chóng)的 mtDNA較小，基因結(jié)構(gòu)較清楚，用限制性內(nèi)切酶切割后可直接進(jìn)行分析(Flook et al.，1995)。如 Mainali et al.(2008)針對(duì)西花薊馬和花薊馬細(xì)胞色素b基因(cytb)的434 bp片段，選用限制性內(nèi)切酶Dde I進(jìn)行酶切，然后通過(guò)電泳圖譜上的不同帶型區(qū)分2種薊馬。Rugman et al.(2006)以ITS-1和 ITS-2為靶標(biāo)，用限制性內(nèi)切酶Sac II或PspOM I進(jìn)行酶切，有效地區(qū)分 7種硬薊馬屬的薊馬。Moritz et al.(2000)以5種內(nèi)切酶消化西花薊馬和美棘薊馬Echinothrips americanus Motgan的ITS-1和ITS-2片段，通過(guò)所產(chǎn)生的不同帶型，成功地將2種薊馬區(qū)分開(kāi)。Toda＆Komazaki(2002)通過(guò)對(duì)包括西花薊馬在內(nèi)的9種薊馬的ITS-2序列分析，得到適于擴(kuò)增薊馬ITS片段的特異性引物，并從82種限制性內(nèi)切酶中篩選出2種內(nèi)切酶用于鑒別日本果樹(shù)上常見(jiàn)的 9種薊馬的成蟲(chóng)和若蟲(chóng)。Brunner et al.(2002)根據(jù)mtDNA COI擴(kuò)增產(chǎn)物(433 bp)，結(jié)合測(cè)序和擴(kuò)增產(chǎn)物RFLP分析，從12種限制性內(nèi)切酶中篩選出2種內(nèi)切酶，構(gòu)建了系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)，有效區(qū)分了西花薊馬、煙薊馬和棕櫚薊馬等。

PCR-RFLP技術(shù)需要篩選合適的限制性內(nèi)切酶，且酶切條件要求嚴(yán)格，因此，尋找合適的酶將西花薊馬與其他眾多常見(jiàn)種類的薊馬區(qū)分開(kāi)，存在一定的難度;此外，PCR-RFLP后期的酶切反應(yīng)及凝膠電泳，增加了 PCR產(chǎn)物被污染的機(jī)會(huì)(Walsh et al.，2005)。DNA序列分析法與PCR-RFLP技術(shù)往往聯(lián)合使用，在得到序列信息的基礎(chǔ)上根據(jù)軟件預(yù)測(cè)限制內(nèi)切酶的酶切位點(diǎn)，進(jìn)而篩選合適的酶，以減少篩選酶的工作量(Brunner et al.，2002;Toda＆Komazaki，2002)。

2.4 SCAR 標(biāo)記技術(shù)

SCAR分子標(biāo)記檢測(cè)技術(shù)，是在RAPD-PCR基礎(chǔ)上擴(kuò)增特異性產(chǎn)物的技術(shù)。SCAR標(biāo)記技術(shù)包括3個(gè)步驟:(1)在對(duì)靶標(biāo)昆蟲(chóng)DNA序列信息未知的情況下，通過(guò)合適的簡(jiǎn)并引物進(jìn)行RAPD-PCR擴(kuò)增與分析，得到靶標(biāo)昆蟲(chóng)區(qū)別于其他昆蟲(chóng)的特異性條帶;(2)對(duì)該特異性條帶進(jìn)行回收、克隆、測(cè)序，并根據(jù)片段兩端的堿基序列設(shè)計(jì)特異性引物;(3)通過(guò)PCR擴(kuò)增及電泳檢測(cè)，鑒別靶標(biāo)昆蟲(chóng)(黎裕等，1999)。該方法的優(yōu)點(diǎn)是省卻了大量的測(cè)序工作且無(wú)需對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行RFLP分析，工作周期短，檢測(cè)成本低，一旦獲得特異引物就可用于大量的檢測(cè)樣本，因此在檢測(cè)鑒定領(lǐng)域已有廣泛應(yīng)用。如孟祥欽等(2010)采用SCAR技術(shù)設(shè)計(jì)了1對(duì)引物FOMF/FOMR，該對(duì)引物只對(duì)西花薊馬具有擴(kuò)增能力，對(duì)田間常見(jiàn)的其他41種薊馬不具有擴(kuò)增效果;該對(duì)引物不僅對(duì)不同蟲(chóng)態(tài)的西花薊馬具有擴(kuò)增能力，而且還可檢測(cè)寄主植物組織中是否有西花薊馬卵的存在。

此外，亦有一些研究與此技術(shù)相仿，即針對(duì)序列信息已知的DNA片段設(shè)計(jì)種特異性引物，然后通過(guò)種特異性 PCR(species-specific PCR，SSP)擴(kuò)增，進(jìn)而鑒定薊馬種類。如Asokan et al.(2007)以棕櫚薊馬和煙薊馬為對(duì)象，根據(jù) Brunner et al.(2002)設(shè)計(jì)的針對(duì)mtDNA的引物擴(kuò)增出約500 bp的片段，然后分別將2個(gè)片段進(jìn)行克隆和再次測(cè)序，根據(jù)測(cè)序結(jié)果及其序列差異設(shè)計(jì)種特異性引物各1對(duì)(2RAf/5RAr和1RAf/5RAr)，分別對(duì)煙薊馬(298 bp)和棕櫚薊馬(390 bp)進(jìn)行擴(kuò)增，進(jìn)而達(dá)到種類鑒別的目的。周力兵等(2007)利用Brunner et al.(2002)設(shè)計(jì)的簡(jiǎn)并引物擴(kuò)增出6種薊馬的mtDNA COI基因片段(450 bp)，然后針對(duì)西花薊馬片段設(shè)計(jì)種特異性引物 F.OL1/F.OR和 F.OL2/F.OR，快速簡(jiǎn)便地將西花薊馬的成蟲(chóng)、若蟲(chóng)、蛹與其他5種薊馬區(qū)分開(kāi)。SSP技術(shù)是有選擇地針對(duì)在遺傳進(jìn)化中易于區(qū)分的靶標(biāo)基因設(shè)計(jì)特異性引物，進(jìn)而達(dá)到檢測(cè)鑒定物種的目的。該技術(shù)的關(guān)鍵在于靶標(biāo)種特異性引物的設(shè)計(jì);同時(shí)，為了避免所設(shè)計(jì)的引物與同域發(fā)生的近緣種產(chǎn)生交叉擴(kuò)增，種內(nèi)與種間核酸的差異亦應(yīng)一并考慮(Darling＆Blum，2007;周力兵等，2007)。

2.5 qPCR 檢測(cè)技術(shù)

qPCR技術(shù)是在常規(guī)PCR體系中加入熒光染料或帶有熒光染料標(biāo)記的探針，熒光信號(hào)隨靶標(biāo)DNA的擴(kuò)增而增強(qiáng)，通過(guò)檢測(cè)熒光信號(hào)判斷目的DNA的數(shù)量，進(jìn)而鑒定標(biāo)本是否為靶標(biāo)物種(Kox et al.，2005;Walsh et al.，2005;Huang et al.，2010)。與普通PCR相比，qPCR檢測(cè)采用獨(dú)特的全封閉反應(yīng)管及光電傳導(dǎo)系統(tǒng)，無(wú)需對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行后處理，通過(guò)光電傳導(dǎo)直接檢測(cè)PCR擴(kuò)增過(guò)程中熒光信號(hào)的變化并據(jù)此獲得定量結(jié)果，實(shí)現(xiàn)了實(shí)時(shí)、在線定量檢測(cè)的目的;同時(shí)，qPCR技術(shù)靈敏度更高，可以更加快捷、高通量地檢測(cè)樣品(Heid et al.，2009)。如 Walsh et al.(2005) 通過(guò)對(duì)棕櫚薊馬、煙薊馬和西花薊馬基因組DNA進(jìn)行RAPDPCR擴(kuò)增和產(chǎn)物克隆，以含有插入序列的質(zhì)粒合成DIG標(biāo)記探針，然后將每個(gè)探針與棕櫚薊馬及其他21種薊馬基因組DNA進(jìn)行多重置換擴(kuò)增反應(yīng)(multiple displacement amplification reactions)和分子雜交，根據(jù)篩選到的棕櫚薊馬特異性引物和相應(yīng)的克隆設(shè)計(jì)TaqMan探針，并建立了qPCR檢測(cè)體系。Huang et al.(2010)根據(jù)西花薊馬、花薊馬和梳缺花薊馬F.schultzei(Trybom)已知的RNA基因序列設(shè)計(jì)了2套西花薊馬特異性引物和探針，建立了西花薊馬qPCR檢測(cè)體系，有效地將西花薊馬與其他常見(jiàn)的6種薊馬(花薊馬、梳缺花薊馬、煙薊馬、茶黃硬薊馬Scirtothrips dorsalis、Caliothrips fasciapennis、Tubulifera)區(qū)分開(kāi)，并對(duì)若蟲(chóng)具有同樣的檢測(cè)效果，完全可用于口岸檢疫。

2.6 蛋白質(zhì)分析技術(shù)

2.6.1 Mab-ELISA檢測(cè)法 ELISA是以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ)，將抗原、抗體的特異性反應(yīng)與酶對(duì)底物的高效催化作用相結(jié)合的一種靈敏性很高的檢測(cè)技術(shù)。通常，抗原、抗體反應(yīng)在固相載體-96孔酶標(biāo)板孔中進(jìn)行，每加入一種試劑孵育后，可通過(guò)洗滌的方法去除多余的反應(yīng)物，從而保證試驗(yàn)結(jié)果的特異性與穩(wěn)定性。單克隆抗體由免疫細(xì)胞與癌細(xì)胞融合后的雜交細(xì)胞(亦稱雜種瘤)產(chǎn)生，只與特定的抗原決定簇結(jié)合，因此與其他近緣物種產(chǎn)生交叉反應(yīng)的機(jī)率很低(Symondson，2002)，完全可用于物種識(shí)別。如Banks et al.(1998)以棕櫚薊馬、煙薊馬、西花薊馬、桃蚜 Myzus persicae(Sulzer)、線斑潛蠅Liriomyza strigata(Meigen)、番茄斑潛蠅 L.bryoniae(Kaltenbach)等6種昆蟲(chóng)為對(duì)象，篩選出了可以準(zhǔn)確鑒定棕櫚薊馬的單克隆抗體及檢測(cè)方法。然而，Mab制備周期長(zhǎng)，條件要求苛刻，生產(chǎn)成本昂貴;ELISA檢測(cè)方法需時(shí)較長(zhǎng)，即使技術(shù)嫻熟，完成整個(gè)檢測(cè)過(guò)程至少也需要1.5 d。

2.6.2 SDS-PAGE檢測(cè)法 SDS-PAGE法也是一種以蛋白質(zhì)為靶標(biāo)的檢測(cè)技術(shù)。通常，在對(duì)靶標(biāo)生物蛋白質(zhì)進(jìn)行電泳，得到蛋白電泳圖譜的基礎(chǔ)上，根據(jù)其差異條帶鑒定靶標(biāo)生物。該技術(shù)具有靈敏度高、電泳圖譜清晰、種內(nèi)差異小的優(yōu)點(diǎn)。如Reboredo et al.(2003)以溫室薊馬 Heliothrips haemorrhoidalis(Bouché)、西花薊馬和煙薊馬為靶標(biāo)進(jìn)行SDSPAGE檢測(cè)，得到了可用于鑒定溫室薊馬的特異性帶型。然而，該技術(shù)穩(wěn)定性較差，易受操作過(guò)程中諸多因素的影響，且當(dāng)檢測(cè)的物種較多時(shí)帶型復(fù)雜。因此，目前已很少單獨(dú)用于物種鑒定研究。

3 基于計(jì)算機(jī)軟件的鑒定方法

隨著信息技術(shù)的快速發(fā)展，電腦輔助的分類學(xué)技術(shù)應(yīng)運(yùn)而生。目前，電腦輔助的分類學(xué)應(yīng)用主要有2類。(1)交互多路存儲(chǔ)分類軟件。為分布式，在CD-ROM(compact disc read-only memory)上幾乎為完全自動(dòng)的識(shí)別系統(tǒng)。如Moritz et al.(2000)根據(jù)形態(tài)學(xué)特征編制了一套可以鑒別纓翅目昆蟲(chóng)的軟件——Thrips ID，該軟件將纓翅目昆蟲(chóng)的形態(tài)學(xué)特征與分子信息相結(jié)合，并以數(shù)據(jù)庫(kù)的形式進(jìn)行儲(chǔ)存。對(duì)于薊馬成蟲(chóng)，查詢者只需根據(jù)標(biāo)本的形態(tài)特征回答軟件中的問(wèn)題，即可確定其種類;對(duì)于成蟲(chóng)前的各個(gè)蟲(chóng)態(tài)，可以采用RFLP技術(shù)并根據(jù)所提供的ITS-RFLP酶切圖譜進(jìn)行種類鑒別。此方法不僅降低了錯(cuò)誤鑒定的可能性，而且不受標(biāo)本蟲(chóng)態(tài)和完整性的限制。(2)人工智能神經(jīng)系統(tǒng)(artificial neural networks，ANN)。類似于人類大腦結(jié)構(gòu)，能夠根據(jù)樣品的特征進(jìn)行學(xué)習(xí)并概括出觀測(cè)到的樣品模型。與許多傳統(tǒng)的統(tǒng)計(jì)模型相比，ANN為非線性，且未對(duì)模型或數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)分布式做前提假設(shè)，因此可用于所有多元數(shù)據(jù)集轉(zhuǎn)換的電子圖片的模式識(shí)別(Do et al.，1999)。如 Fedor et al.(2008)研究出了可半自動(dòng)化識(shí)別4屬18種薊馬的ANN，通過(guò)輸入形態(tài)學(xué)特征不僅可以識(shí)別不同的種類，而且可以同時(shí)識(shí)別成蟲(chóng)的雌雄性，準(zhǔn)確率達(dá)97%。

基于計(jì)算機(jī)軟件的鑒定方法將形態(tài)學(xué)特征與分子生物學(xué)技術(shù)和數(shù)學(xué)模型進(jìn)行有機(jī)地結(jié)合，有助于非薊馬分類人員快速準(zhǔn)確地鑒定西花薊馬。然而，該方法仍然要求操作人員掌握薊馬類昆蟲(chóng)的形態(tài)學(xué)特征，且需要借助分子生物學(xué)技術(shù)才能識(shí)別幼體和殘缺標(biāo)本。

4 展望

步入21世紀(jì)以來(lái)，國(guó)際交流和經(jīng)濟(jì)活動(dòng)日趨頻繁，越來(lái)越多的外來(lái)物種進(jìn)入我國(guó)，其傳入數(shù)量之大、傳播速度之快、經(jīng)濟(jì)危害之嚴(yán)重已遠(yuǎn)遠(yuǎn)超出了人們的想象(楊瑞等，2009)，顯然，常規(guī)的分子檢測(cè)技術(shù)已無(wú)法滿足高通量檢測(cè)的需求。DNA條形碼(DNA barcoding)是一種以mtDNA COI基因前部長(zhǎng)度約650 bp的序列作為物種內(nèi)在標(biāo)簽，進(jìn)而實(shí)現(xiàn)快速、準(zhǔn)確和自動(dòng)化地對(duì)物種進(jìn)行鑒定和分類的新型系統(tǒng)(Hebert＆Gregory，2005)。由于其操作快速、簡(jiǎn)便，近幾年已受到廣泛關(guān)注并成為一項(xiàng)輔助物種鑒定的新手段。COI基因相對(duì)容易擴(kuò)增，較少發(fā)生插入、缺失現(xiàn)象(Waugh，2007)，具有種內(nèi)變異速率相對(duì)較小、種間相對(duì)較大(Hebert et al.，2003a、2003b)等優(yōu)勢(shì)。因此，目前已成為動(dòng)物界常用的分子標(biāo)記技術(shù)，并已顯示出其在物種鑒定方面的巨大作用(Ekrem，2007;Frézal＆ Leblois，2008)。

基因芯片是新近崛起的生物技術(shù)，具有可以同時(shí)識(shí)別數(shù)以萬(wàn)計(jì)靶標(biāo)的潛力(Naeole＆Haymer，2003)，目前已用于醫(yī)學(xué)診斷中病毒和細(xì)菌(Striebel et al.，2003;朱曉光等，2007)、致病真菌(黃愛(ài)華等，2007)、人體寄生蟲(chóng)(張媛等，2007)的檢測(cè)以及水產(chǎn)食品中常見(jiàn)病原微生物的鑒定(高爽等，2007)和植物病原真菌及其他病原物的識(shí)別研究(Lievens et al.，2005;Szemes et al.，2005)。 李 文 芬 等(2008)以雙翅目實(shí)蠅科昆蟲(chóng)為靶標(biāo)，針對(duì)mtDNA COI基因建立了我國(guó)進(jìn)境植物檢疫害蟲(chóng)地中海實(shí)蠅Ceratitis capitata(Wiedemann)、芒果小條實(shí)蠅C.cosyra(Walker)和納塔爾小條實(shí)蠅C.rosa Karsch的生物芯片檢測(cè)方法，為我國(guó)進(jìn)口果蔬中檢疫性實(shí)蠅的快速篩查和種類鑒定提供了技術(shù)保障。馮毅等(2009)以西花薊馬、花薊馬、禾花薊馬等3種花薊馬屬昆蟲(chóng)的9個(gè)樣本的COI基因片段序列為材料，以12種motif基因序列為靶標(biāo)，制作虛擬基因芯片。檢測(cè)結(jié)果顯示，所設(shè)計(jì)的虛擬基因芯片能準(zhǔn)確鑒定3種花薊馬，為實(shí)體基因芯片制作奠定了基礎(chǔ)。

與傳統(tǒng)的形態(tài)學(xué)鑒定技術(shù)相比，目前得以廣泛應(yīng)用的分子檢測(cè)技術(shù)結(jié)果更加穩(wěn)定可靠，但難以滿足高通量檢測(cè)的需求?；蛐酒虳NA條形編碼技術(shù)作為新興的物種鑒定手段，在分子檢測(cè)領(lǐng)域具有廣闊的應(yīng)用前景，且必將在有害生物檢驗(yàn)檢疫中發(fā)揮巨大作用。

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