徐明舉,鄭志新,溫 哲,徐 彤

(1.河北北方學(xué)院動(dòng)物醫(yī)學(xué)系,河北宣化075000;2.河北省張家口市動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所,河北張家口075000)

豬瘟(CSF)是由瘟病毒屬的豬瘟病毒(CSFV)引起的豬的一種熱性高度接觸性傳染病,各年齡階段的豬和不同品種的豬對(duì)其均易感。豬瘟呈世界性分布,由于其危害程度高,對(duì)養(yǎng)豬業(yè)造成經(jīng)濟(jì)損失巨大,所以世界動(dòng)物衛(wèi)生組織(OIE)將其列為A類(lèi)傳染病,并規(guī)定為國(guó)際重點(diǎn)檢疫對(duì)象。1999年2月12日我國(guó)農(nóng)業(yè)部也將豬瘟列為一類(lèi)動(dòng)物疫病。2007年我國(guó)將豬瘟納入國(guó)家強(qiáng)制性免疫范疇,應(yīng)用我國(guó)研制的兔化豬瘟弱毒苗有效控制了豬瘟的大面積流行,但是目前該病在我國(guó)仍時(shí)有發(fā)生,依然是危害我國(guó)養(yǎng)豬業(yè)的主要傳染病之一。近年來(lái)養(yǎng)豬業(yè)在河北省張家口市一直處于穩(wěn)步快速發(fā)展之中,飼養(yǎng)規(guī)模逐年擴(kuò)大。但由于引種過(guò)于頻繁及中小型豬場(chǎng)收購(gòu)豬飼養(yǎng)比例較大等原因,使得豬瘟的流行形式、發(fā)病特點(diǎn)和病理變化都發(fā)生了明顯的變化,主要表現(xiàn)為隱性感染、亞臨床型感染或非典型性感染,單憑經(jīng)驗(yàn)和臨床診斷十分困難,必須依賴(lài)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)技術(shù)。ELISA方法檢測(cè)豬瘟抗原、抗體,操作簡(jiǎn)單、快速[6],適用于群體監(jiān)測(cè),為國(guó)際貿(mào)易檢測(cè)豬瘟指定試驗(yàn)之一。為了掌握本市不同規(guī)模豬場(chǎng)豬瘟疫苗免疫后抗體水平變化規(guī)律,對(duì)張家口地區(qū)38個(gè)規(guī)?；爸行⌒拓i場(chǎng)不同階段豬群進(jìn)行取樣,監(jiān)測(cè)免疫后豬瘟抗體,以了解豬瘟疫苗免疫效果,為開(kāi)展豬瘟的免疫預(yù)防提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 被檢樣品的采集 被檢樣品采自張家口地區(qū)的12個(gè)規(guī)模化豬場(chǎng)和26個(gè)中小型豬場(chǎng)。血清樣品的采集:耳靜脈采血,每頭10 mL,自然凝固析出血清,共采集1 256份血清樣品(其中12個(gè)規(guī)?；i場(chǎng)498份、26個(gè)中小型豬場(chǎng)758份)。扁桃體樣品的采集:用采樣槍采集豬的扁桃體樣品565份(其中12個(gè)規(guī)?；i場(chǎng)230份、26個(gè)中小型豬場(chǎng)335份)。樣品在河北北方學(xué)院動(dòng)物醫(yī)學(xué)系傳染病實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)。

1.2 檢測(cè)試劑 豬瘟間接ELISA診斷試劑盒購(gòu)自武漢科前動(dòng)物生物制品有限責(zé)任公司,批號(hào)為201006213。豬瘟熒光標(biāo)記抗體購(gòu)自中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所。

1.3 豬瘟間接ELISA試驗(yàn)檢測(cè)抗體方法和判定標(biāo)準(zhǔn) 按診斷試劑盒操作說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。試驗(yàn)成立的條件是陽(yáng)性對(duì)照孔平均OD630值大于或等于1.0,陰性對(duì)照孔平均OD630值必須小于0.3。樣品OD630值大于0.35,判為陽(yáng)性;樣品OD630值小于 0.35,判為陰性。ELISA和HIA結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 ELISA和HIA結(jié)果

1.4 直接熒光抗體試驗(yàn)檢測(cè)方法和判定標(biāo)準(zhǔn) 新鮮的扁桃體制作組織切片,然后滴加豬瘟熒光標(biāo)記抗體,充分反應(yīng)后,封片,熒光顯微鏡下鏡檢,在視野里細(xì)胞輪廓清晰,扁桃體隱窩上皮細(xì)胞的胞漿呈現(xiàn)明亮的翠綠色或黃綠色熒光,則可判為豬瘟抗原陽(yáng)性反應(yīng);熒光微弱,細(xì)胞形態(tài)不清或無(wú)熒光判為豬瘟抗原陰性反應(yīng)。

2 結(jié)果

2.1 規(guī)模化及中小型豬場(chǎng)豬瘟抗體效價(jià) 見(jiàn)表2和表3。從表2和表3可以看出,規(guī)?；i場(chǎng)中母豬、育肥豬、斷奶仔豬和哺乳仔豬的免疫合格率分別為89.83%、85.00%、87.12%和 95.31%。從表 3可以看出,中小型豬場(chǎng)中母豬、育肥豬、斷奶仔豬和哺乳仔豬的免疫合格率分別為39.80%、42.30%、23.14%和51.78%。

表2 規(guī)?；i場(chǎng)不同日齡豬血清豬瘟抗體效價(jià)ELISA檢測(cè)結(jié)果

表3 中小型豬場(chǎng)不同日齡豬血清豬瘟抗體效價(jià)ELISA檢測(cè)結(jié)果

2.2 規(guī)模化及中小型豬場(chǎng)免疫狀況 見(jiàn)表4。從表4可以看出,12個(gè)規(guī)?；i場(chǎng)有豬瘟免疫合格率均高于60%,8個(gè)豬場(chǎng)(66.67%)豬瘟免疫合格率高于90%;而在 26個(gè)中小型豬場(chǎng)卻有12個(gè)豬場(chǎng)(46.15%)豬瘟免疫合格率低于60%,僅有1個(gè)豬場(chǎng)(3.85%)豬瘟免疫合格率高于90%。

2.3 直接熒光抗體試驗(yàn)結(jié)果 即豬瘟病毒抗原陽(yáng)性狀況,見(jiàn)表5。

表4 規(guī)?；爸行⌒拓i場(chǎng)免疫狀況

表5 規(guī)?；爸行⌒拓i場(chǎng)豬瘟抗原陽(yáng)性狀況

從表5可知,中小型養(yǎng)豬場(chǎng)豬瘟病毒感染率達(dá)16.4%,遠(yuǎn)高于規(guī)?；i場(chǎng)豬瘟病毒感染率(3.91%)。

3 討論與分析

3.1 本次調(diào)查結(jié)果顯示,規(guī)?；i場(chǎng)母豬、育肥豬、斷奶仔豬和哺乳仔豬的免疫合格率分別為89.83%、85.00%、87.12%和 95.31%,均高于 80%(豬群豬瘟免疫保護(hù)臨界線),免疫狀況理想,豬群較為穩(wěn)定,豬瘟病毒感染率很低,只有3.91%;而中小型豬場(chǎng)免疫合格率則明顯低于規(guī)?；i場(chǎng),分別為39.80%%、42.30%、23.14%和 51.78%,這主要是中小型豬場(chǎng)防疫意識(shí)淡薄,免疫程序制定不合理或免疫操作不當(dāng)所致,或者中小型豬場(chǎng)的豬多購(gòu)自外地或外場(chǎng),無(wú)法準(zhǔn)確掌握其抗體水平,這樣的豬豬瘟病毒感染率較高,往往在購(gòu)入不久后或育肥時(shí)發(fā)生豬瘟。所以必須將疫苗接種和免疫監(jiān)測(cè)有機(jī)結(jié)合起來(lái),以免疫監(jiān)測(cè)決定合理的免疫程序,達(dá)到最佳免疫效果。

3.2 一般認(rèn)為,豬瘟抗體 HI效價(jià)大于 1∶16(ELISA OD630大于0.35)以上才具有保護(hù)力,而對(duì)豬群來(lái)說(shuō),免疫合格率在90%以上才能有效預(yù)防豬瘟的流行。本次調(diào)查結(jié)果表明,張家口市規(guī)模化豬場(chǎng)豬瘟免疫狀況較好,12個(gè)規(guī)?；i場(chǎng)中有8個(gè)豬場(chǎng)免疫合格率達(dá)90%以上,這主要與規(guī)模化豬場(chǎng)比較重視豬瘟疫苗接種,堅(jiān)持做好母豬配種前疫苗接種,種母豬長(zhǎng)期接受免疫有關(guān)。

3.3 中小豬場(chǎng)豬瘟抗體水平較低的原因分析

3.3.1 疫苗質(zhì)量問(wèn)題 根據(jù)我市實(shí)際情況分析,疫苗質(zhì)量問(wèn)題可能是造成各個(gè)縣區(qū)豬瘟抗體滴度及抗體合格率普遍偏低的主要原因。中小豬場(chǎng)貪圖便宜,自購(gòu)疫苗自行注射,使用了過(guò)期或失效疫苗。其次是保存和運(yùn)輸問(wèn)題,有的地方不按規(guī)定運(yùn)輸,造成疫苗失效。

3.3.2 免疫操作中的問(wèn)題 (1)免疫密度偏低,相當(dāng)數(shù)量的豬只未得到有效免疫。(2)免疫接種,不按規(guī)定免疫劑量足量注射。(3)免疫注射技術(shù)水平參差不齊。(4)重復(fù)注射,注射了一次豬瘟疫苗,時(shí)過(guò)不久,又重新注射。(5)不做母源抗體監(jiān)測(cè),過(guò)早注射,干擾破壞母源抗體,影響疫苗免疫效果。(6)為了節(jié)省人力物力,注射不換針頭,造成相互感染。

3.3.3 免疫程序的問(wèn)題 目前張家口市中小豬場(chǎng)基本沒(méi)有進(jìn)行豬瘟抗體水平監(jiān)測(cè)的意識(shí)和能力,無(wú)法根據(jù)抗體的消長(zhǎng)規(guī)律制定科學(xué)合理的免疫程序,結(jié)果造成盲目免疫注射。加上實(shí)際生產(chǎn)中很難實(shí)行“全進(jìn)全出”的管理模式,豬只大范圍頻繁調(diào)運(yùn),造成豬的批次不同,混合飼養(yǎng),容易引起應(yīng)激和發(fā)病。

3.3.4 先天性感染或持續(xù)性感染 是導(dǎo)致豬瘟疫苗免疫后抗體水平不能有效升高的重要原因。因此,通過(guò)直接熒光抗體試驗(yàn)檢出并淘汰豬瘟抗原陽(yáng)性豬,是凈化豬瘟的有效途徑之一。