李 靜，林 曉，高 輝

(1.山東中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，山東 濟(jì)南 250011;2.山東省藥品檢驗(yàn)所，山東 濟(jì)南 250101)

阿膠補(bǔ)血口服液由阿膠、熟地黃 、黨參、黃芪、枸杞子、白術(shù)組成，其功效滋陰補(bǔ)血，補(bǔ)中益氣，健脾潤肺。常用于久病體弱，血虧目眩，虛勞咳嗽［1］，因其療效好而被廣泛應(yīng)用。黃芪功效成分明確，具有扶正強(qiáng)壯、增強(qiáng)機(jī)體抵抗力，其主要成分為黃芪甲苷，因此本文以黃芪甲苷作為含量測定指標(biāo)，采用高效液相色譜法測定方中主藥黃芪中有效成分黃芪甲苷的含量，為該藥質(zhì)量控制提供科學(xué)依據(jù)。

1 儀器與試劑

Agilent1200高效液相色譜儀，Alltech2000 ELSD檢測器，Sartorius CP225D電子天平，KQ－300DE超聲波清洗儀;黃芪甲苷對(duì)照品由中國藥品生物制品檢定所提供(批號(hào)為110781－200512);阿膠補(bǔ)血口服液由藥圣堂(湖南)制藥有限公司(批號(hào):080204、080202、080301、080302)提供;甲醇、乙腈為色譜純，其余為分析純。

2 方法與結(jié)果［1，2］

2.1 色譜條件 色譜柱:Diamonsil C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)，以乙腈－水(34∶66)為流動(dòng)相;蒸發(fā)光散射檢測器;柱溫30℃;流速為1.0 mL·min－1;漂移管溫度為105℃，氣體流量為2.5 L·min－1;理論板數(shù)以黃芪甲苷峰計(jì)算應(yīng)不低于4000。

2.2 溶液的制備 對(duì)照品溶液:精密稱取在五氧化二磷減壓干燥器中干燥12 h的黃芪甲苷對(duì)照品適量，加甲醇制成每1 mL含0.5 mg的溶液。

供試品溶液:精密量取本品50 mL，用水飽和的正丁醇振搖提取4次，每次40 mL，合并正丁醇提取液，用氨水洗滌2次，每次40 mL，棄去氨水溶液，正丁醇液蒸干，殘?jiān)蛹状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至5 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45 μm)濾過，即得。

2.3 線性關(guān)系 精密吸取“2.2”項(xiàng)下黃芪甲苷對(duì)照品溶液5、10、15、20、25、30 μL，分別注入高效液相色譜儀，測得峰面積。以黃芪甲苷進(jìn)樣量的對(duì)數(shù)值為橫坐標(biāo)，峰面積積分值對(duì)數(shù)值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，其回歸方程為Y=1.5462X+5.9448，r=0.9998，結(jié)果表明黃芪甲苷在 2.57～ 15.42 μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.4 精密度試驗(yàn) 精密吸取“2.2”項(xiàng)下黃芪甲苷對(duì)照品溶液10 μL，注入液相色譜儀，連續(xù)進(jìn)樣6次，測定峰面積。以黃芪甲苷的峰面積的自然對(duì)數(shù)值計(jì)算，RSD為0.28%，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明本方法進(jìn)樣精密度良好。

2.5 重復(fù)性試驗(yàn) 按上述條件與方法對(duì)同一批號(hào)樣品重復(fù)分析測定6次，計(jì)算黃芪甲苷平均含量為29 μg·g－1，RSD為1.14%(n=6)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明本方法重現(xiàn)性良好，方法可行。

2.6 加樣回收率試驗(yàn) 精密量取已知含量的樣品(含量為29 μg·mL－1)25 mL，共取6份，分別精密加入黃芪甲苷對(duì)照品溶液(0.0629 mg·mL－1)10 mL，按上述方法與條件進(jìn)行測定，分別計(jì)算回收率，結(jié)果見表1。

表1 回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果

結(jié)果表明:測定方法的回收率良好。

2.7 專屬性試驗(yàn) 按照處方比例，取除去黃芪的其他藥味，按制備工藝方法制得陰性樣品。按上述條件與方法試驗(yàn)，結(jié)果陰性樣品在與對(duì)照品色譜峰相應(yīng)的位置上，無吸收峰。說明處方中其他藥味對(duì)測定結(jié)果無影響，結(jié)果見圖1～3。

圖1 黃芪甲苷對(duì)照品HPLC色譜圖

2.8 樣品測定 取4批樣品各2份，分別制備樣品溶液，進(jìn)行測定，以外標(biāo)法計(jì)算，測定結(jié)果見表2。

圖2 阿膠補(bǔ)血口服液HPLC色譜圖

表2 樣品測定結(jié)果

3 討論

3.1 本實(shí)驗(yàn)采用三種不同型號(hào)的色譜柱，分別是Dikma Kromasil C18(250 mm ×4.6 mm，5μm)、Dikma Diamonsil C18(250 mm ×4.6 mm，5 μm)、依利特 Hypersil BDS C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)對(duì)方法耐用性進(jìn)行了考察。結(jié)果三種色譜柱所測得的對(duì)稱因子、理論板數(shù)等均能符合2005年版藥典對(duì)高效液相色譜分析的有關(guān)要求，表明該方法測定阿膠補(bǔ)血口服液中的黃芪甲苷對(duì)色譜柱選擇性不強(qiáng)，適用范圍廣。

3.2 供試品溶液的制備比較了兩種提取方法:過大孔吸附樹脂提取和直接提取。結(jié)果表明過大孔樹脂柱可去除一部分雜質(zhì)，但同時(shí)黃芪甲苷也會(huì)損失。為保證黃芪甲苷提取完全，采用直接提取方式。

3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明本文測定方法簡便易行，結(jié)果準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好，可有效控制該制劑質(zhì)量。

［1］國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典2005年版(一部)［S］.北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2005:213.

［2］袁紹莉，張金煉，朱小虎.HPLC－ELSD法測定保兒寧顆粒黃芪甲苷的含量［J］.中華實(shí)用醫(yī)藥雜志，2005，3(15):15－18.