潘耀東 李勝軍

1)蘇州大學附屬常州市腫瘤醫(yī)院普瘤外科 常州 213001 2)蘇州大學附屬常州市腫瘤醫(yī)院心內(nèi)科 常州 213001

華法林(warfarin)是香豆素類口服抗凝藥，多用于人工瓣膜置換、靜脈血栓形成(肺栓塞)、房顫等的口服抗凝治療。近年的許多研究顯示，某些基因的遺傳變異可能是造成個體間華法林維持劑量差異的主要原因［1］。大量研究表明，CYP2C9基因具有遺傳多態(tài)性且與華法林抗凝劑量有關［2］，目前研究最多也是最主要的有 3種，即野生型CYP2C9*1，突變型CYP2C9*2(416C/T)和突變型CYP2C9*3(1061A/C)?，F(xiàn)有的文獻已證實CYP2C9*2型在亞洲和我國漢族人群中罕見［3］，故本文旨在常州地區(qū)漢族人群中探討CYP2C9基因多態(tài)性對瓣膜置換術后華法林應用劑量的影響。

1 材料與方法

1.1 實驗對象 73例病例來自2009－08～2010－04在蘇

州大學附屬常州腫瘤醫(yī)院胸外科、心內(nèi)科門診及住院的患者，其中男41 例，女32 例;平均年齡(54.98 ±14.10)歲。病例入選標準為:漢族人、18歲以上、服用華法林至少2個月、INR控制在1.5～3.0;正常組來自同期在我院門診體檢且性別、年齡均與病例組匹配的正常人68例，男48例，女20例;平均(50.25±12.76)歲。所有入選對象均來自江蘇常州市及其周邊區(qū)域居住的漢族居民，相互間無血緣關系及異族通婚史。

1.2 實驗方法 在受試者知情同意前提下，采集其空腹12 h后的外周靜脈血2 mL(枸櫞酸鈉抗凝)，采用PCRRFLP方法進行PCR擴增，然后加入特定的體系進行酶切反應。

2 結果

2.1 CYP2C9*3(－1061A/C)基因多態(tài)性檢測電泳結果

CYP2C9*3(－1061A/C)擴增產(chǎn)物長度為152 bp。根據(jù)單核苷酸突變位點(SNP)A/C的不同，經(jīng)KpnⅠ酶切檢驗，可以判斷3種基因型:1061A→C后可由KpnⅠ識別，純合變異型(CC型)的PCR產(chǎn)物經(jīng)酶切后產(chǎn)生134 bp和18 bp 2個片段，雜合子(AC 型)產(chǎn)生 152 bp、134 bp、18 bp 3 個片段，而野生純合型(AA型)不能被酶切，只有1個152 bp片段。由于18 bp片段太小，且與134 bp片段距離太遠，不易被凝膠分辨，故只能看到134 bp 1個片段。電泳結果見圖1。

圖1 CYP2C9－1061A/C基因多態(tài)擴增產(chǎn)物RFLP電泳圖M:Marker;1、4、6:AA 型;2、5:AC 型;3、7:CC 型

2.2 CYP2C9*3(－1061A/C)多態(tài)性與華法林應用劑量的關系 將73例患者按不同基因型比較華法林劑量需求(見圖2)，圖2描述了兩個基因不同基因型與華法林每周平均需求劑量的關系，從圖2可看出，CYP2C9*3(－1061A/C)三種不同基因型平均周華法林劑量明顯不同，純合變異型CC型的需求劑量最低(13.57±7.10)mg/周，雜合變異型AC型需求劑量為(17.38±7.20)mg/周，野生純合型AA型需求劑量最高(26.25±11.36)mg/周，變異型(AC 型和 CC 型)與野生純合型AA型比較，華法林需求劑量減少，差異均具有統(tǒng)計學意義(P＜0.005)。

圖2 CYP2C9－1061A/C不同基因型與華法林每周平均需求劑量相關統(tǒng)計圖注:*P＜0.005，與野生型AA型相比

3 討論

由以上統(tǒng)計結果可看出，CYP2C91061A→C變異均顯著減少病人的華法林用量，CYP2C91061A→C變異型的個體華法林用量AC要比AA型的下降37.5%，而CC型要比AA型下降達40%以上。本研究在常州地區(qū)漢族人中報道了基因因素對瓣膜置換術后華法林需求劑量的影響，CYP2C9*3(－1061A/C)基因變異顯著影響瓣膜置換術后華法林劑量需求。若能對臨床需口服華法林的瓣膜置換術后患者進行基因型檢測，并根據(jù)基因分型指導華法林初始劑量的選擇，必將減少患者反復抽血化驗的痛苦、降低人工瓣膜置換患者抗凝出血的風險。

［1］楊劍，繆麗燕.華法林的基因組學研究進展［J］.中國臨床藥理學與治療學，2006，11(12):1 326-1 331.

［2］ Gaedigk A，Casley WL，Tyndale RF，et al.cytochrome P450(CYP2C9)allele frequencies in Canadian native Indian and inuit populations［J］.Canadian J physiology and pharmacology，2001，79(10):841 － 847.

［3］ Wang S L，Huang J D，Lai M D，et al.Detection of CYP2C9 polymorphism based on the polymerase chain reaction in Chinese［J］.Pharmacogenetics，1995，5:37 －42.