蘇應(yīng)兵（長(zhǎng)江大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，湖北 荊州434025）

廖詠玲（中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院長(zhǎng)江水產(chǎn)研究所，湖北 荊州434000）

楊代勤，林 洋（長(zhǎng)江大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，湖北 荊州434025）

大鱗副泥鰍 （Paramisgurnusdabryanus）屬鯉形目 （Cypriniformes）鰍科 （Cobitidae）副泥鰍屬（Paramisgurnus），其體型酷似泥鰍，體色多為黃色或黃褐色，鱗片較泥鰍的大。因肉質(zhì)細(xì)嫩、味道鮮美、營(yíng)養(yǎng)豐富、生長(zhǎng)較快，目前在國(guó)內(nèi)外市場(chǎng)廣受歡迎[1]。隨著養(yǎng)殖的發(fā)展，苗種需求量與日劇增，特別是人工繁殖的優(yōu)質(zhì)苗種緊缺，不能滿足市場(chǎng)需求，為此不少學(xué)者對(duì)大鱗副泥鰍的人工繁殖進(jìn)行了研究[2-8]，但至今對(duì)大鱗副泥鰍精子活力的研究報(bào)道較少。在大鱗副泥鰍的人工繁殖中還發(fā)現(xiàn)雄鰍的數(shù)量明顯少于雌鰍，這給批量人工繁殖大鱗副泥鰍苗帶來(lái)不便[2]。本研究探討了3種單糖 （葡萄糖、半乳糖和果糖）對(duì)大鱗泥鰍精子的激活效果，以選出最佳激活劑及最適激活濃度，為規(guī)?；绶N的人工繁殖、人工授精及雜交育種提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

雄性大鱗副泥鰍來(lái)源于長(zhǎng)江大學(xué)水產(chǎn)養(yǎng)殖基地，體長(zhǎng)15～25cm，體重30～60g，體質(zhì)健壯，腹大柔軟，富有彈性，有透明感，膚色微紅。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 試驗(yàn)溶液配制

各試驗(yàn)溶液濃度梯度設(shè)置詳見(jiàn)表1。

表1 試驗(yàn)溶液濃度梯度配置

1.2.2 精子的采集

催產(chǎn)后殺死泥鰍，取其左側(cè)精巢 （左精巢飽滿、易搗碎，同時(shí)在等量的精液中，左精巢精子數(shù)目亦較右精巢多[9]），搗碎后用定性濾紙吸去水分和血液，用冰低溫保存待用，觀察試驗(yàn)應(yīng)在20～30min內(nèi)做完。

1.2.3 精子活力的測(cè)定

取干燥潔凈載玻片，吸取1滴試驗(yàn)液于玻片上，置于10×40倍顯微鏡下，用潔凈探針挑取少量精液均勻涂于試驗(yàn)液中，即刻用秒表計(jì)時(shí)。每個(gè)梯度做3次平行，取平均值作為觀測(cè)數(shù)據(jù)。精子活動(dòng)等級(jí)參考吳清毅等[10]的方法。本研究只觀測(cè)精子快速運(yùn)動(dòng)時(shí)間和壽命時(shí)間。

1.3 數(shù)據(jù)處理

采用Excel 2003和SPSS 12.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。試驗(yàn)所得數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。以Duncan法進(jìn)行多重比較以檢驗(yàn)其差異顯著性，顯著水平為0.05。

2 結(jié)果與分析

2.1 葡萄糖溶液對(duì)大鱗副泥鰍精子活力的影響

由表2可知，葡萄糖溶液濃度從0.1%～0.8%變化時(shí)，大鱗副泥鰍精子快速運(yùn)動(dòng)時(shí)間呈上升趨勢(shì)，在0.8%時(shí)達(dá)到最大，為62s，與其他組差異顯著。濃度高于0.8%時(shí)精子快速運(yùn)動(dòng)時(shí)間隨濃度增大而縮短。當(dāng)葡萄糖濃度在3.0%時(shí)精子快速運(yùn)動(dòng)時(shí)間為0，若滴加不同量的蒸餾水后，一些精子被激活，出現(xiàn)慢速運(yùn)動(dòng)或原地顫動(dòng)，直至死亡。精子壽命的變化趨勢(shì)和精子快速運(yùn)動(dòng)時(shí)間基本一致，在葡萄糖溶液濃度為0.8%時(shí)達(dá)到最大，為95s，以后也隨濃度增大而縮短。

2.2 半乳糖溶液對(duì)大鱗副泥鰍精子活力的影響

由表3可知，當(dāng)半乳糖溶液濃度為0.1%～0.5%時(shí)，精子快速運(yùn)動(dòng)時(shí)間隨濃度增加而上升，濃度為0.5%時(shí)大鱗副泥鰍精子快速運(yùn)動(dòng)時(shí)間達(dá)到最大，為70s，與其它組差異顯著，大于在葡萄糖溶液中的最長(zhǎng)快速運(yùn)動(dòng)時(shí)間62s。當(dāng)葡萄糖濃度在3.0%時(shí)精子快速運(yùn)動(dòng)時(shí)間為0，若滴加不同量的蒸餾水后，一些精子被激活，出現(xiàn)慢速運(yùn)動(dòng)或原地顫動(dòng)，直至死亡。精子壽命的變化趨勢(shì)和精子快速運(yùn)動(dòng)時(shí)間基本一致，在半乳糖溶液濃度為0.5%時(shí)達(dá)到最大，為102s，以后隨濃度增大而縮短。

表2 不同濃度葡萄糖溶液下大鱗副泥鰍的精子活力

表3 不同濃度半乳糖溶液下大鱗副泥鰍的精子活力

2.3 果糖溶液對(duì)大鱗副泥鰍精子活力的影響

由表4可知，果糖溶液濃度由0.1%上升到0.3%時(shí)，精子快速運(yùn)動(dòng)時(shí)間也由37s上升到最大，為51s。當(dāng)濃度繼續(xù)增加，大鱗副泥鰍精子快速運(yùn)動(dòng)時(shí)間表現(xiàn)出緩慢縮短的趨勢(shì)。果糖溶液濃度為0.5%時(shí)，精子快速運(yùn)動(dòng)時(shí)間比0.3%濃度組有所下降，但無(wú)顯著性差異。精子壽命的變化趨勢(shì)和精子快速運(yùn)動(dòng)時(shí)間基本一致，在果糖溶液濃度為0.3%時(shí)達(dá)到最大，為88s，以后也隨濃度增大而下降。當(dāng)濃度在3.0%時(shí)精子活力完全被抑制，若滴加不同量的蒸餾水后，一些精子被激活，出現(xiàn)慢速運(yùn)動(dòng)或原地顫動(dòng)，直至死亡。

3 討論

精漿中的碳水化合物主要是一些單糖，如葡萄糖、果糖、半乳糖等[11]。Gardiner[12]認(rèn)為，體外受精魚(yú)類精子具有三羧酸循環(huán)代謝的能力，可以通過(guò)氧化作用利用細(xì)胞外源性碳水化合物，尤其是葡萄糖、半乳糖和果糖[13]。而且這3種單糖是精子活動(dòng)存活的可選擇和次級(jí)的能源[14]。已有研究發(fā)現(xiàn)適宜濃度的葡萄糖可以明顯地延長(zhǎng)虹鱒 （Oncorhynchusmykiss）[12]、 白斑狗魚(yú) （Esoxlucius）[15]、丁魚(yú)歲 （Tincatinca）[16]、烏原鯉 （Procyprismterus）[10]、 鯉魚(yú)（Cyprinuscarpio）[11]、 團(tuán)頭魴（Megalobramaamblycephala）[11]、彩鯽（Cruciancarp）[17]、泥鰍 （Misgurnusanguillicaudatus）[18]精子活動(dòng)時(shí)間；適宜濃度的葡萄糖和果糖可以明顯地延長(zhǎng)中華鱘 （AcipensersinensisGray）[19]、凹目白鮭 （Coregonusautumnalis）[20]精子運(yùn)動(dòng)時(shí)間。本研究結(jié)果顯示，大鱗副泥鰍精子快速運(yùn)動(dòng)和壽命在3種單糖溶液中均表現(xiàn)出相似的變化趨勢(shì)，即適宜濃度的葡萄糖、半乳糖、果糖可以使精子快速運(yùn)動(dòng)時(shí)間和壽命明顯延長(zhǎng)，說(shuō)明單糖在維持精子活力中的作用非常顯著，這與上述研究結(jié)果一致。本研究結(jié)果還表明，在這3種單糖溶液中，大鱗副泥鰍精子快速運(yùn)動(dòng)和壽命的時(shí)間均以在0.5%半乳糖溶液中為最長(zhǎng)，說(shuō)明大鱗副泥鰍精子對(duì)這3種單糖的吸收、利用存在差別。

表4 不同濃度果糖溶液下大鱗副泥鰍的精子活力

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