高海燕 陳軍麗 丁恩峰

（1. 石藥集團(tuán)恩必普藥業(yè)有限公司，石家莊 050031；2. 石家莊市第三醫(yī)院制劑科，石家莊 050031；3. 英國施達(dá)化學(xué)集團(tuán)公司中國代表處，石家莊 050031）

在歐美藥政法規(guī)體系里面，如果無菌制劑采用無菌原料藥（API）來制備，那么，無菌原料藥的無菌性質(zhì)對(duì)于制劑來說是至關(guān)重要的。無菌原料藥一般采用兩種方法來制造：滅菌工藝和無菌工藝。當(dāng)原料藥采用無菌工藝制造時(shí)，因?yàn)檫@種工藝無菌保證水平（SAL）較低，因此，需要采用模擬驗(yàn)證來評(píng)估無菌工藝的保證能力。在目前制藥行業(yè)，通常采用無菌工藝模擬驗(yàn)證（也稱為培養(yǎng)基灌裝）方式評(píng)估工藝無菌保證能力。

目前制藥行業(yè)對(duì)于無菌制劑的工藝模擬驗(yàn)證研究較多，而對(duì)于無菌原料藥的工藝模擬驗(yàn)證研究較少。例如，工藝模擬驗(yàn)證實(shí)施細(xì)節(jié)問題、最后判定標(biāo)準(zhǔn)選擇問題等，都存在很多模糊或者錯(cuò)誤的認(rèn)識(shí)。

1 各國GMP法規(guī)指南對(duì)無菌工藝驗(yàn)證的要求

對(duì)于原料藥的管理，中國藥政法規(guī)和歐美藥政法規(guī)是不同的。在歐美國家，原料藥不被作為藥品來管理，而是作為活性物質(zhì)（API）來管理。因?yàn)闅W美藥政法規(guī)對(duì)于原料藥的無菌工藝模擬驗(yàn)證沒有很明確的要求，目前法規(guī)和指南中可以找到關(guān)于無菌工藝模擬驗(yàn)證的要求，主要適用于無菌制劑的工藝模擬驗(yàn)證。中國藥政法規(guī)由于建設(shè)較晚，還沒有很完善的體系，對(duì)于無菌原料藥工藝模擬驗(yàn)證，也沒有針對(duì)性的要求。下面列表給出了各國對(duì)于無菌工藝模擬藥政的要求。

表1 各國GMP法規(guī)指南對(duì)無菌工藝驗(yàn)證的要求

2 無菌原料藥工藝模擬驗(yàn)證介紹

2.1 無菌原料藥工藝模擬驗(yàn)證方法學(xué)問題

在進(jìn)行無菌原料藥工藝模擬驗(yàn)證之前，驗(yàn)證人員必須全面深刻地評(píng)估無菌原料藥制造工藝，并確定無菌工藝模擬驗(yàn)證的范圍，這是無菌工藝模擬驗(yàn)證成功的關(guān)鍵。

由于無菌原料藥生產(chǎn)工藝一般包括多個(gè)步驟，模擬驗(yàn)證可以采取2種方式：第一種方式：分別評(píng)估每部操作的無菌保證能力；第二種方式：綜合評(píng)估無菌操作步驟組合的無菌保證能力。下面介紹這2種方式。

2.1.1 一次性全部工藝模擬方法（Total Process Simulation）

分析比較，可以得到第一種方式的優(yōu)點(diǎn)和缺點(diǎn)如下：

優(yōu)點(diǎn)：

— 這種組合模擬方法比那些分段模擬方法更接近實(shí)際工藝；

— 比逐個(gè)單元模擬節(jié)省驗(yàn)證時(shí)間；

缺點(diǎn)：

— 如果發(fā)現(xiàn)污染樣品，監(jiān)測和確定污染來源很困難；

— 如果試驗(yàn)失敗，在糾正措施制定以后，必須進(jìn)行全部步驟的再次模擬驗(yàn)證，成本很高；

— 在整個(gè)模擬過程中，一般要求使用單一的測試物料（全是液體物料或者全是固體物料），這可能引入和實(shí)際工藝顯著不同的操作步驟。并且污染如何產(chǎn)生的情況，也可能和實(shí)際工藝差距甚大。

2.1.2 單元操作模擬方法(Unit Operation Simulations)

通過分析和比較，可以得到第二種方式的優(yōu)點(diǎn)和缺點(diǎn)如下：

優(yōu)點(diǎn)：

— 如果發(fā)現(xiàn)污染樣品，可以把來源限制在更小的范圍來調(diào)查；

— 對(duì)特定步驟變更效果的評(píng)估可以限制在較小的范圍；

— 如果某個(gè)環(huán)節(jié)失敗，在確定糾正措施以后，只需要重復(fù)那個(gè)失敗的環(huán)節(jié)，這樣做較節(jié)約成本；

— 在某些工藝中，這些單元操作的組合，可能更接近實(shí)際工藝；

— 在不同的步驟可以使用不同的物料（固體或者液體），這可能更接近實(shí)際情況。

缺點(diǎn)：

— 比一次性模擬驗(yàn)證浪費(fèi)時(shí)間；

— 可能要求不同程度的重復(fù)工作來評(píng)估全部工藝；

— 評(píng)估單個(gè)單元操作的方法可能要求對(duì)無菌物料更多的處理來滿足一個(gè)單獨(dú)工藝模擬測試；

— 在每個(gè)單元模擬試驗(yàn)中產(chǎn)生大量的環(huán)境監(jiān)控樣品，需要處理，增加驗(yàn)證成本。

2.2 無菌工藝模擬驗(yàn)證的介質(zhì)選擇問題

2.2.1 模擬驗(yàn)證介質(zhì)選擇原則

根據(jù)PDA技術(shù)報(bào)告 No.28《Process Simulation Testing for Sterile Bulk Pharmaceutical Chemicals》，模擬介質(zhì)選擇原則有兩個(gè)。第一個(gè)原則是，應(yīng)該選擇促微生物生長培養(yǎng)基、或者安慰劑、或者實(shí)際產(chǎn)品（一般選擇輔料）、或者不使用任何介質(zhì)。另外，還要確定選用液體介質(zhì)還是固體介質(zhì)，例如：在結(jié)晶工藝中，前段工藝需要選擇液體介質(zhì)模擬，后段工藝需要選擇固體介質(zhì)來模擬驗(yàn)證。第二個(gè)原則是，要考慮模擬介質(zhì)的安全性問題；所選用模擬介質(zhì)不能造成不可消除的潛在污染。

下面列表介紹4種模擬介質(zhì)選擇方式和優(yōu)缺點(diǎn)。

表2 4種模擬介質(zhì)選擇方式及優(yōu)缺點(diǎn)

2.2.2 模擬介質(zhì)選擇的具體經(jīng)驗(yàn)

— 直接選用無菌的安慰劑可能會(huì)節(jié)約時(shí)間；

— 選擇的模擬物料不能影響無菌檢測；

— 根據(jù)設(shè)備和操作工藝特點(diǎn)，可能選擇液體物料或者固體物料；

— 可以選擇促微生物生長物料或者惰性物料；

— 在某些工藝模擬中，可能會(huì)使用多種物料；

— 不論什么模擬物料，最后包裝要接近真實(shí)產(chǎn)品。

2.2.3 選擇粉末狀介質(zhì)的經(jīng)驗(yàn)

— 無菌干粉促生長培養(yǎng)很少被選擇，因?yàn)?，流?dòng)性很差，通過無菌處理設(shè)備很難；

— 根據(jù)制藥行業(yè)經(jīng)驗(yàn)，主要選用lactose, mannitol和polyethylene glycol；

— 干粉培養(yǎng)基最常用dry Soybean-Casein Digest Medium (SCDM)大豆消化酪素瓊脂培養(yǎng)基 ；

— 被選擇物料必須容易滅菌、溶解和分散，不抑制微生物的生長，而且容易在設(shè)備里面被處理。

2.2.4 選擇液體模擬介質(zhì)的經(jīng)驗(yàn)

— 促生長培養(yǎng)基容易溶解，可以被選用；但是使用后的清潔問題需要關(guān)注；

— 可以選用的液體培養(yǎng)基：SCDM（TSB）和peptone broth（蛋白胨肉湯培養(yǎng)基）；— 如果不影響促生長能力，培養(yǎng)基可以被稀釋；— WFI和其他溶媒可以作為模擬流體，但是溶媒不能具有抗微生物活性；

— 液體物料一般通過0.22 μm無菌過濾系統(tǒng)來獲得無菌性質(zhì)。

2.3 無菌工藝模擬驗(yàn)證的前提條件

2.3.1 生產(chǎn)設(shè)施和設(shè)備驗(yàn)證情況

盡管無菌工藝模擬驗(yàn)證不是正式的工藝驗(yàn)證，但是，模擬驗(yàn)證也是針對(duì)無菌工藝本身的一次較全面的評(píng)估和核實(shí)。因此，在進(jìn)行無菌工藝模擬驗(yàn)證之前，用于生產(chǎn)無菌原料藥的各種設(shè)備和系統(tǒng)，應(yīng)該先驗(yàn)證并符合相關(guān)要求。

2.3.2 公用系統(tǒng)驗(yàn)證情況

用于生產(chǎn)無菌原料藥的公用系統(tǒng)，例如：HVAC系統(tǒng)、注射用水系統(tǒng)、純化水系統(tǒng)、壓縮空氣系統(tǒng)、真空系統(tǒng)、蒸汽滅菌系統(tǒng)，以及用于空間消毒的臭氧消毒系統(tǒng)等，都應(yīng)該在無菌工藝模擬驗(yàn)證之前，先進(jìn)行驗(yàn)證并符合要求。

2.3.3 無菌檢驗(yàn)方法驗(yàn)證情況

為了準(zhǔn)確評(píng)估無菌工藝的保證能力，正確檢測和評(píng)估樣品的無菌性質(zhì)，用于無菌檢驗(yàn)的方法應(yīng)該先經(jīng)過驗(yàn)證并符合相關(guān)要求。

2.3.4 無菌過濾工藝驗(yàn)證情況

采用無菌工藝制備的無菌原料藥，多是對(duì)熱敏感的物料，不能耐受熱力滅菌方法。在這種情況，無菌過濾系統(tǒng)是將非無菌物料轉(zhuǎn)換為無菌物料的關(guān)鍵系統(tǒng)，應(yīng)該在無菌工藝模擬驗(yàn)證之前先進(jìn)行驗(yàn)證。無菌過濾系統(tǒng)的驗(yàn)證，除了需要進(jìn)行濾芯和過濾藥液相容性研究以外，還應(yīng)該研究不同過濾時(shí)間的影響、完整性測試項(xiàng)目和挑戰(zhàn)性試驗(yàn)。

2.3.5 相關(guān)支持滅菌工藝驗(yàn)證情況

一種無菌原料藥生產(chǎn)過程中，會(huì)使用結(jié)晶罐、溶媒罐、各種流體管道和氣體管道、還可能會(huì)用到各種器具以及操作人員穿戴的潔凈服。這些設(shè)備和器具在生產(chǎn)前都應(yīng)該進(jìn)行滅菌，并應(yīng)該保存在規(guī)定條件下。這些支持系統(tǒng)，在無菌工藝模擬驗(yàn)證之前，都應(yīng)該先驗(yàn)證完畢并符合要求。

例如：潔凈服的滅菌，需要考察滅菌條件的有效性，還需要考察保留時(shí)間（holding time）的長短。保留時(shí)間是無菌工藝模擬驗(yàn)證中涉及的一個(gè)干擾項(xiàng)目，應(yīng)該給與重視。

2.3.6 清潔規(guī)程驗(yàn)證情況

無菌工藝模擬驗(yàn)證中，很多情況下不是使用真實(shí)物料進(jìn)行工藝模擬，而是使用促微生物生長培養(yǎng)基或者安慰劑進(jìn)行工藝模擬。在這種情況下，原來起草的設(shè)備或者器具的清潔規(guī)程就失去了針對(duì)性，應(yīng)該根據(jù)新的情況起草有針對(duì)性的清潔規(guī)程。

這些專門為無菌工藝模擬驗(yàn)證起草的清潔規(guī)程的驗(yàn)證安排是一個(gè)問題：如果提前進(jìn)行清潔驗(yàn)證，會(huì)浪費(fèi)很多物料；如果和無菌工藝模擬驗(yàn)證同時(shí)進(jìn)行，一旦出現(xiàn)驗(yàn)證失敗情況，會(huì)很難確定具體原因。因此，在清潔驗(yàn)證和無菌工藝模擬驗(yàn)證的安排中，應(yīng)該基于實(shí)際情況和風(fēng)險(xiǎn)分析結(jié)果，做出更具有針對(duì)性的安排。

2.3.7 人員培訓(xùn)和人員健康情況

所有參加無菌工藝模擬驗(yàn)證的人員，除了要接受相應(yīng)崗位規(guī)程和知識(shí)的培訓(xùn)，都要統(tǒng)一參加無菌工藝模擬驗(yàn)證方案的培訓(xùn)。培訓(xùn)完畢，需要進(jìn)行考核；符合要求者可以參加無菌工藝模擬驗(yàn)證工作。

另外，針對(duì)參加驗(yàn)證人員的健康檢查，也應(yīng)該根據(jù)驗(yàn)證情況來核實(shí)最近一次人員的體檢情況。

2.3.8 驗(yàn)證文件準(zhǔn)備情況

除了按照下面第4部分準(zhǔn)備驗(yàn)證方案和驗(yàn)證報(bào)告以外，無菌工藝模擬驗(yàn)證需要的各種表格、記錄和臺(tái)帳都應(yīng)該準(zhǔn)備完善，和正式工藝驗(yàn)證沒有很大區(qū)別。

2.3.9 模擬生產(chǎn)批記錄準(zhǔn)備情況

模擬生產(chǎn)批記錄是無菌工藝模擬驗(yàn)證的關(guān)鍵性文件，需要由生產(chǎn)部門技術(shù)人員單獨(dú)起草。在模擬驗(yàn)證過程中，由于模擬物料的引入，導(dǎo)致很多例行的工藝環(huán)節(jié)被改變或者被省略，另外，一些新的工藝環(huán)節(jié)被加入，因此，需要起草一份新的專門針對(duì)模擬生產(chǎn)的批記錄。

由于模擬生產(chǎn)的產(chǎn)品都是用于培養(yǎng)，不會(huì)被包裝和銷售，因此，包裝記錄一般不需要準(zhǔn)備。

模擬生產(chǎn)樣品的檢驗(yàn)記錄需要根據(jù)實(shí)際情況專門準(zhǔn)備。

2.4 無菌工藝模擬驗(yàn)證的文件管理問題

2.4.1 驗(yàn)證方案包含的信息

在無菌原料藥工藝模擬驗(yàn)證之前，需要起草和審核并批準(zhǔn)工藝驗(yàn)證方案。工藝驗(yàn)證方案應(yīng)該包括如下信息：模擬驗(yàn)證的工藝描述、生產(chǎn)進(jìn)行的區(qū)域描述、需要評(píng)估的灌裝線和設(shè)備介紹、容器和密封件類型、灌裝速度選擇原因、灌裝樣品數(shù)量、模擬驗(yàn)證中要包括的干擾和中斷的數(shù)目和類型、參加人員數(shù)目、需要使用的培養(yǎng)基或者其他模擬介質(zhì)、灌裝體積、培養(yǎng)條件（例如：培養(yǎng)時(shí)間和溫度等）、需要進(jìn)行的環(huán)境監(jiān)測計(jì)劃和規(guī)程、批生產(chǎn)記錄的復(fù)印件一份、各個(gè)測試項(xiàng)目的接受標(biāo)準(zhǔn)、選擇最差條件的原理和考慮點(diǎn)、陽性樣品所處位置描述、促生長試驗(yàn)結(jié)果、其他要素等。

2.4.2 驗(yàn)證報(bào)告包含信息

在驗(yàn)證結(jié)束后，應(yīng)該由驗(yàn)證小組負(fù)責(zé)人或者指定人員撰寫驗(yàn)證報(bào)告，內(nèi)容應(yīng)該包括如下信息：批生產(chǎn)記錄是驗(yàn)證報(bào)告的重要組成部分，要如實(shí)、及時(shí)記錄各項(xiàng)操作，例如：清潔情況、滅菌情況、樣品傳遞和培養(yǎng)等；對(duì)于采用的干擾條件，要詳細(xì)記錄干擾的數(shù)量和類型；灌裝數(shù)量、培養(yǎng)數(shù)量、陽性樣品數(shù)量、拒絕的樣品數(shù)量（破損容器等）、促生長試驗(yàn)結(jié)果、工藝無菌保證能力評(píng)估的結(jié)論。

2.5 無菌工藝模擬驗(yàn)證的實(shí)施細(xì)節(jié)問題

2.5.1 干預(yù)情況

為了更好的評(píng)估無菌工藝保證能力，在無菌工藝模擬驗(yàn)證過程中，可以設(shè)定一些干預(yù)措施，更好的評(píng)估和研究無菌工藝。建議如下：

— 模擬驗(yàn)證必須包括日常操作活動(dòng)，例如：設(shè)備調(diào)整、容器密封件輸送供應(yīng)和取樣等活動(dòng)；

— 非日?；顒?dòng)（突發(fā)干預(yù)行為）可以加入模擬驗(yàn)證；

— 在模擬驗(yàn)證中，非預(yù)期的干預(yù)活動(dòng)是可以加入的，例如：液體泄漏、設(shè)備停止再啟動(dòng)等；

— 如果最后模擬驗(yàn)證順利通過，這些非預(yù)期干預(yù)可以作為日?；顒?dòng)的一部分。

2.5.2 持續(xù)時(shí)間

根據(jù)制藥企業(yè)的經(jīng)驗(yàn)，產(chǎn)品暴露時(shí)間和無菌合格率具有一定的關(guān)系。在設(shè)計(jì)無菌工藝模擬驗(yàn)證方案時(shí)，應(yīng)該考慮如下要求：

— 必須保證足夠工藝持續(xù)時(shí)間來展示無菌工藝的保證能力；

— 最初的準(zhǔn)備活動(dòng)、設(shè)備調(diào)整、手動(dòng)維護(hù)等應(yīng)該加入模擬驗(yàn)證中；

— 模擬驗(yàn)證還應(yīng)該包括日常的，或者非典型的干預(yù)活動(dòng)；

— 作為正常操作的一部分，更衣、中間休息和換班都應(yīng)該包括在模擬驗(yàn)證中；

— 原料藥生產(chǎn)中和污染相關(guān)性最大的環(huán)節(jié)是磨粉和過篩，這些重復(fù)工作長期進(jìn)行，人員對(duì)于產(chǎn)品污染影響最大，應(yīng)該給與考慮。

2.5.3 批量選擇

批量的選擇和最后合格標(biāo)準(zhǔn)具有一定關(guān)系。如果模擬驗(yàn)證用于支持研發(fā)申報(bào)工作，模擬驗(yàn)證批量可以減小，保持和研發(fā)階段生產(chǎn)批量一致即可。如果模擬驗(yàn)證工藝屬于商業(yè)化生產(chǎn)工藝，需要考慮如下要求：

— 模擬驗(yàn)證應(yīng)該使用足夠的物料，確保接觸所有可能影響無菌的設(shè)備表面；

— 批量選擇要滿足可以最大程度的模擬實(shí)際工藝操作；

— 模擬驗(yàn)證批量和實(shí)際批量不必相同。

2.5.4 培養(yǎng)條件

根據(jù)PDA TR No.28和其他相關(guān)指南，樣品的培養(yǎng)一般采取如下條件：

— 最少培養(yǎng)14天，這是最低要求；

— 培養(yǎng)溫度每個(gè)公司可以采取不同的策略；

— 培養(yǎng)溫度應(yīng)該有利于微生物的復(fù)活和恢復(fù)；這些微生物應(yīng)該主要來自環(huán)境監(jiān)控和產(chǎn)品微生物檢驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)的微生物；

— 一般選擇20 ～ 35℃來培養(yǎng)；更合適的建議是分段培養(yǎng)，就是在20 ～ 25℃范圍培養(yǎng)7天，然后在30 ～ 35℃范圍培養(yǎng)7天；

— 培養(yǎng)期間溫度應(yīng)該持續(xù)監(jiān)控。

2.5.5 操作規(guī)程

無菌藥品的生產(chǎn)，要非常關(guān)注細(xì)節(jié)和人員的熟練程度。為了確保將失誤降低到最低水平，應(yīng)該給操作人員提供高質(zhì)量的SOP。

2.5.6 人員影響

因?yàn)樵纤幧a(chǎn)中，人工操作環(huán)節(jié)較多，影響較大；應(yīng)該確保每個(gè)員工在一定周期內(nèi)至少參加一次成功的無菌工藝模擬驗(yàn)證。如果因?yàn)檐囬g人員和班次較多，應(yīng)該至少保證再驗(yàn)證時(shí)，要將未參加模擬驗(yàn)證的人員包括進(jìn)來。

2.5.7 生產(chǎn)周期

因?yàn)樵纤幧a(chǎn)的特殊性，一些特殊情況需要采用特殊辦法來處理。例如：某些公司在密閉系統(tǒng)里面，連續(xù)生產(chǎn)多批次原料藥而不進(jìn)行中間的清潔狀態(tài)，對(duì)于這種模式，模擬驗(yàn)證應(yīng)該證實(shí)這種模式在開放系統(tǒng)里面的接受可能。這樣做的原因是，任何一種產(chǎn)品生產(chǎn)不能一直處于密閉系統(tǒng)中，在一定周期結(jié)束后，會(huì)進(jìn)行一個(gè)密閉系統(tǒng)到開放系統(tǒng)的轉(zhuǎn)換，這也是容易染菌的環(huán)節(jié)，因此，需要關(guān)注這個(gè)環(huán)節(jié)。

2.6 無菌工藝模擬驗(yàn)證的判斷標(biāo)準(zhǔn)和結(jié)果解釋

毫無疑問，任何無菌藥品的生產(chǎn)都是追求0污染率。但是在實(shí)際情況下，由于多種客觀條件的限制，這個(gè)目標(biāo)要達(dá)到是有難度的。對(duì)于原料藥，在很多環(huán)節(jié)不可避免的要引入很多人員操作活動(dòng)，這些污染幾率不可避免。鑒于此，對(duì)于無菌原料藥工藝模擬驗(yàn)證接受標(biāo)準(zhǔn)是有不同看法的。

PDA TR No.28提供了兩種選擇，供大家參考選用。

2.6.1 定性接受標(biāo)準(zhǔn)

如果原料藥制藥企業(yè)采用了高度自動(dòng)化的生產(chǎn)線，而且無菌取樣和無菌檢驗(yàn)環(huán)節(jié)的質(zhì)量保證水平很高，可以將0污染率作為無菌工藝模擬驗(yàn)證的接受標(biāo)準(zhǔn)。在這種情況下，驗(yàn)證結(jié)果就是2種：通過或者失敗。

2.6.2 定量接受標(biāo)準(zhǔn)

因?yàn)橛绊懽罱K產(chǎn)品無菌性質(zhì)的環(huán)節(jié)甚多，所以，大部分制藥企業(yè)不會(huì)選擇定性接受標(biāo)準(zhǔn)，而會(huì)選擇定量接受標(biāo)準(zhǔn)。

定量接受標(biāo)準(zhǔn)建立的基礎(chǔ)是：無菌制劑的無菌性質(zhì)來自無菌原料藥的無差別傳遞。在這種情況下，可以將法規(guī)方對(duì)于無菌制劑的驗(yàn)證標(biāo)準(zhǔn)折算到無菌原料藥的工藝模擬驗(yàn)證中。

根據(jù)FDA《sterile drug products produced by aseptic process-current GMP》2004版指南，無菌制劑工藝模擬驗(yàn)證合格標(biāo)準(zhǔn)為1/10000，即：無菌制劑模擬灌裝10000個(gè)單位，最多允許出現(xiàn)一個(gè)陽性樣品。我們將這個(gè)驗(yàn)證標(biāo)準(zhǔn)折算到無菌原料藥工藝模擬驗(yàn)證中，參見下面例子。

例子：假設(shè)某原料藥最小生產(chǎn)批量是200 kg，用這種原料藥生產(chǎn)的無菌制劑最大裝量是10 g，模擬驗(yàn)證中使用安慰劑60 kg，所有的模擬驗(yàn)證樣品檢測后發(fā)現(xiàn)2CFU。計(jì)算和推論如下：

— 每批次污染水平就是2CFU，表明生產(chǎn)批次也是這個(gè)污染水平；

— 用這批原料藥生產(chǎn)制劑最小單位數(shù)量計(jì)算：200000 g / 10 g = 20 000 units/batch；

— 計(jì)算CFU/unit最大值：2/20000 = 0.0001 CFU / unit。

結(jié)論：因?yàn)?.0001CFU/unit和FDA指南推薦的接受標(biāo)準(zhǔn)相同，因此，這種無菌原料藥工藝模擬驗(yàn)證符合要求，通過評(píng)估。

2.6.3 陽性樣品的調(diào)查

無菌工藝模擬驗(yàn)證結(jié)束后，不管驗(yàn)證最后是否通過，任何污染樣品都要進(jìn)行調(diào)查。調(diào)查要遵循如下原則和方法：

— 詳盡的取樣規(guī)程和菌種鑒別規(guī)程，是調(diào)查成功的基礎(chǔ)；

— 如果工藝模擬驗(yàn)證顯示了污染的可能來源，必須調(diào)查；

— 調(diào)查記錄應(yīng)該保留；

— 基于調(diào)查結(jié)果，污染來源可能是明確的或者是不明確的；

— 污染來源可能是單一來源，也可能是多來源組合；

— 如果來源是明確的，應(yīng)該建立糾正預(yù)防措施并形成書面規(guī)程；

— 糾正預(yù)防措施可能包括重復(fù)進(jìn)行工藝模擬驗(yàn)證；

— 如果原因沒有發(fā)現(xiàn)，應(yīng)該像驗(yàn)證新的無菌工藝那樣來再驗(yàn)證一遍。

2.7 無菌工藝模擬驗(yàn)證的再驗(yàn)證問題

為了定期評(píng)估無菌工藝的保證能力，需要針對(duì)工藝或者設(shè)備、設(shè)施和人員的變化情況，進(jìn)行定期或者改變后的再驗(yàn)證。

2.7.1 再驗(yàn)證的頻率問題

如果發(fā)生影響無菌工藝保證能力的因素變化，應(yīng)該在變更以后盡快進(jìn)行無菌工藝模擬再驗(yàn)證。例如：原料藥分裝崗位人員明顯變化后，應(yīng)該進(jìn)行無菌工藝模擬再驗(yàn)證。如果初次驗(yàn)證結(jié)束后，在一段時(shí)間內(nèi)，沒有發(fā)生影響無菌工藝保證能力的因素變化情況，需要定期進(jìn)行再驗(yàn)證。再驗(yàn)證頻率根據(jù)PDA TR No.28的建議，可以每年進(jìn)行一次。根據(jù)歐美官方的期望和經(jīng)驗(yàn)，每年至少進(jìn)行2次無菌工藝模擬驗(yàn)證。

2.7.2 再驗(yàn)證的批次問題

如果再驗(yàn)證情況屬于沒有變更發(fā)生的定期再驗(yàn)證，再驗(yàn)證只需要進(jìn)行一批次模擬生產(chǎn)驗(yàn)證。如果再驗(yàn)證屬于變更性再驗(yàn)證，根據(jù)變更對(duì)象和變更程度，需要進(jìn)行1-3批次的模擬生產(chǎn)驗(yàn)證。

2.7.3 再驗(yàn)證的批量問題

如果批量在上一次驗(yàn)證結(jié)束后沒有發(fā)生變化，再驗(yàn)證批量可以和上一次驗(yàn)證時(shí)的模擬生產(chǎn)批量相同。

2.8 頭孢菌素A無菌工藝模擬驗(yàn)證案例介紹

河北省石家莊某制藥公司生產(chǎn)無菌原料藥-頭孢哌酮鈉。本文以此品種為案例，介紹逐步實(shí)施無菌工藝模擬驗(yàn)證的方法學(xué)和流程。

2.8.1 生產(chǎn)工藝分析

河北某制藥公司生產(chǎn)的無菌頭孢哌酮鈉原料藥，屬于采用無菌工藝制造的典型無菌原料藥。主要工藝步驟包括：合成、配液、無菌過濾、結(jié)晶、三合一處理、干燥、分裝和外包裝工序。

在進(jìn)行原料藥無菌工藝模擬驗(yàn)證前，公司組織質(zhì)量部、生產(chǎn)部、研發(fā)部和工程部對(duì)工藝進(jìn)行無菌關(guān)鍵性分析。分析結(jié)果見表3：

表3 對(duì)工藝的無菌關(guān)鍵性分析結(jié)果

通過上述工藝分析，確定配液、無菌過濾、結(jié)晶、三合一處理、干燥、分裝等工序?yàn)闊o菌原料藥工藝模擬驗(yàn)證范圍，需要在模擬測試中評(píng)價(jià)相關(guān)工序無菌保證能力。

2.8.2 驗(yàn)證準(zhǔn)備工作

根據(jù)公司關(guān)于驗(yàn)證的管理制度，布置相關(guān)工作給質(zhì)量部、生產(chǎn)部、QA、QC、工程部和物料部。這些工作涉及無菌車間HVAC系統(tǒng)和工藝用水驗(yàn)證狀態(tài)核實(shí)、驗(yàn)證包材和培養(yǎng)基選擇采購、驗(yàn)證檢驗(yàn)試劑的采購等。

2.8.3 文件起草和人員培訓(xùn)工作

由公司生產(chǎn)部負(fù)責(zé)無菌工藝模擬驗(yàn)證方案的起草，同時(shí)，負(fù)責(zé)模擬驗(yàn)證批記錄的起草工作。待草案確定后，按照文件審核規(guī)程，由質(zhì)量部牽頭，組成驗(yàn)證小組，專門開會(huì)審核驗(yàn)證方案和相關(guān)記錄。

在驗(yàn)證方案審核結(jié)束后，安排要參加模擬驗(yàn)證的人員參加了驗(yàn)證方案和批記錄的培訓(xùn)工作。

2.8.4 模擬物料的選擇

因?yàn)轭^孢哌酮鈉在生產(chǎn)過程中，物料狀態(tài)存在一個(gè)轉(zhuǎn)換過程：固體-液體-固體；因此在配液、結(jié)晶和三合一工序采用蛋白胨肉湯培養(yǎng)基作為模擬物料，而在后續(xù)的干燥、分裝工序采用流動(dòng)性和密度都和頭孢哌酮鈉性質(zhì)接近的PEG6000來作為模擬物料。

2.8.5 無菌工藝模擬驗(yàn)證實(shí)施過程

在無菌工藝模擬驗(yàn)證方案確定和培訓(xùn)之后，根據(jù)生產(chǎn)計(jì)劃，選擇生產(chǎn)間隙，安排了無菌工藝模擬驗(yàn)證，連續(xù)進(jìn)行了3個(gè)批次模擬驗(yàn)證，批量比真實(shí)產(chǎn)品正常批量減少，為150kg。驗(yàn)證結(jié)束后，對(duì)相關(guān)設(shè)備進(jìn)行了徹底清潔并滅菌。

2.8.6 樣品培養(yǎng)

因?yàn)樵纤幑に嚹M驗(yàn)證后，需要培養(yǎng)的樣品很多，一般的培養(yǎng)箱不能滿足要求；因此，公司專門建設(shè)了具有溫濕度控制功能的培養(yǎng)室。培養(yǎng)室在啟用之前經(jīng)過驗(yàn)證而且結(jié)果合格，在培養(yǎng)樣品期間，一直有溫濕度記錄裝置在線監(jiān)控溫濕度。

根據(jù)指南，選擇分段培養(yǎng)條件：在20 ～ 25℃范圍培養(yǎng)7天，然后在30 ～ 35℃范圍培養(yǎng)7天。

樣品培養(yǎng)后，在干燥工序和分裝工序樣品各發(fā)現(xiàn)一個(gè)陽性樣品。

2.8.7 驗(yàn)證結(jié)果分析和評(píng)價(jià)

驗(yàn)證結(jié)果計(jì)算比較如下：頭孢哌酮鈉生產(chǎn)批量是350kg，在SFDA數(shù)據(jù)庫查詢用頭孢哌酮鈉生產(chǎn)的無菌制劑最大裝量是3g，模擬驗(yàn)證中使用安慰劑150kg，所有的模擬驗(yàn)證樣品檢測后發(fā)現(xiàn)2CFU。

— 每批次污染水平就是2CFU，表明實(shí)際生產(chǎn)批次也是這個(gè)污染水平；

— 用這批原料藥生產(chǎn)制劑最小單位數(shù)量計(jì)算：350000 g/3 g = 116667 units/batch；

— 計(jì)算CFU/unit最大值：2/116667 = 0.000017 CFU/unit。

結(jié)論：因?yàn)轵?yàn)證結(jié)果（0.000017 CFU/unit）比FDA指南推薦接受標(biāo)準(zhǔn)（0.0001 CFU/unit）低，因此，頭孢哌酮鈉無菌工藝模擬驗(yàn)證符合要求，通過驗(yàn)證。

2.8.8 驗(yàn)證過程中的偏差分析

經(jīng)過詳細(xì)調(diào)查和收集數(shù)據(jù)，在連續(xù)3批的無菌工藝模擬驗(yàn)證中，沒有發(fā)生偏差情況，因此，沒有涉及偏差處理問題。

盡管驗(yàn)證過程中沒有發(fā)生操作偏差，但是最后樣品培養(yǎng)結(jié)果顯示有2個(gè)陽性樣品，因此，公司按照MDD調(diào)查程序進(jìn)行了調(diào)查，并針對(duì)調(diào)查后的原因進(jìn)行了制度完善工作。

[1] FDA guidance for industry：sterile drug products produced by aseptic process-current GMP. September 2004.

[2] PIC validation of aseptic process. 2010.

[3] EU GMP annex 1：manufacture of sterile medicinal products，2008.

[4] PDA TR No.22 process simulation testing for aseptically filled products.

[5] PDA TR No.28 Process Simulation Testing for Sterile Bulk Pharmaceutical Chemicals.

[6] SFDA 《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》草案（2010年修訂）.