安麗媛 徐友宣

1 北京體育大學（北京 100084） 2 國家體育總局反興奮劑中心

世 界 反 興 奮 劑 組 織（World Anti-Doping Agency）規(guī)定興奮劑檢測的生物樣本是尿樣和血樣。尿樣和血樣存在尿樣收集的隱私性、易被稀釋或替換、檢測時限短、不易保存、外源與內源物質難區(qū)分和損傷性等問題，因此一些研究者采用汗液、唾液、毛發(fā)、指甲等生物樣本進行代替檢測。毛發(fā)由于具有性質穩(wěn)定、易取材、易保存、檢出時限長、無創(chuàng)性和反映用藥史等優(yōu)點而越來越多地被采用。

有關頭發(fā)中藥物檢測的研究報道很多，主要集中在法醫(yī)毒物學、臨床毒物學、職業(yè)醫(yī)學以及興奮劑控制領域。頭發(fā)中興奮劑的檢測仍處于發(fā)展階段，對于頭發(fā)中所常見的刺激劑、麻醉劑、大麻（酚）類的檢測，代謝物的氣相色譜-質譜（GC/MS）分析方法研究及吸收和代謝機理研究已經成熟，但對于其它興奮劑的研究尚處于起步階段。近幾年，一些研究者［1-3］利用牛、馬和豚鼠等動物進行實驗，探討選擇性好、靈敏度高的檢測方法和回收率高的預處理方法，同時還分析了藥物的代謝規(guī)律，劑量與頭發(fā)中濃度關系，尿、血、頭發(fā)結果之間的關系［4］。本文對頭發(fā)中興奮劑檢測的幾種方法做一評述。

1 頭發(fā)中興奮劑的吸收和代謝機制

目前對興奮劑進入頭發(fā)的確切機制尚不清楚，一般研究［5］認為，興奮劑及其主要代謝物進入頭發(fā)有3個途徑：（1）主要通過毛細血管被動擴散進入；（2）頭發(fā)附近的汗腺、皮脂腺和皮膚分泌的興奮劑及其代謝物通過表層進入；（3）外界環(huán)境污染。因為頭發(fā)主要成分為黑色素、角蛋白和脂質，所以興奮劑進入頭發(fā)受黑色素含量、興奮劑本身親脂性和堿性這3個主要因素影響。一般來說，中性親脂性的興奮劑容易穿過膜并擴散到基質細胞中，堿性興奮劑與黑色素有親和性而易進入頭發(fā)，因此黑色素的含量只對堿性興奮劑吸收有影響，對于中性興奮劑的吸收沒有影響。堿性和中性的興奮劑更易進入頭發(fā)，相反，酸性物質如水楊酸、2-丙基戊酸和四氫大麻酚等不易進入頭發(fā)。Nakahara等［6-9］利用黑灰系大鼠系統(tǒng)地研究了藥物結構對藥物進入頭發(fā)的影響，這些研究利用吸收率（IRC，同一時間頭發(fā)興奮劑含量與血漿興奮劑含量的比）定量描述了藥物在頭發(fā)中的堆積速率，證實了以上結論。

興奮劑在頭發(fā)中的穩(wěn)定性受該興奮劑化學結構和極性的影響。興奮劑一般在頭發(fā)中的穩(wěn)定性很好。隨著時間推移，頭發(fā)中的興奮劑或其代謝物會減少，減少速率取決于興奮劑與頭發(fā)基質的結合性。在外部環(huán)境中暴露時間越長，頭發(fā)基質的極性越大，一般情況下，極性大的代謝物比極性小的母體興奮劑更易在頭發(fā)中保留，所以代謝物比母體存留時間長。

2 分析方法研究

頭發(fā)中興奮劑的分析方法一般包括取樣和保存、洗滌、預處理、檢測方法等步驟，下面從這些方面進行討論。

2.1 取樣和保存

研究顯示［10］，頭頂后部頭發(fā)生長速率的變異系數為15.6%，比頭部其他區(qū)域的變異系數（30.5 %）小，所以選用頭頂后部為取發(fā)的區(qū)域?？紤]到受外部污染少的因素，剪取的頭發(fā)越靠近頭皮越好，但不能帶上毛囊，因為毛囊可以在促腎上腺皮質激素的刺激下產生皮質醇。一般用干凈的剪刀從頭上剪取50～100 mg 頭發(fā)，然后裝于信封中密封，在常溫下保存。

2.2 洗滌

頭發(fā)檢測協(xié)會（the Society of Hair Testing）規(guī)定檢測的頭發(fā)需用熱水、二氯甲烷和甲醇沖洗去污。Kintz等［11-13］采用室溫下二氯甲烷沖洗，Gambelunghe等［14］對兩次的沖洗液用氣相色譜-串聯(lián)質譜（GC-MS/MS）檢測來確保外源性污染除盡。Rambaud等［15］考察了二氯甲烷洗滌對頭發(fā)分析結果的影響，發(fā)現在給藥后10天內，對頭發(fā)的完整洗滌除去了50% ～ 70%的甲基睪酮，這是因為部分藥物存在于頭發(fā)的淺表層中而易被洗掉。很多研究采用磷酸緩沖液（pH = 7.4）、0.1% 十二烷基硫酸鈉、己烷、乙酸乙酯、丙酮、10 % 吐溫80等，一般都需幾種溶劑反復洗滌，從而達到去除極性和非極性污染物的目的。Aqai等［16］進行了洗、剪、粉碎這3個步驟對頭發(fā)中類固醇類影響的研究，比較了非有機相水、1% 十二烷基磷酸鈉和不同濃度的甲醇溶液這3類洗滌液的效果，發(fā)現1% 十二烷基磷酸鈉和甲醇溶液（< 20%）的效果比水好，剪過的比沒有剪的回收率高20%，粉碎的樣品更容易得到好的結果。對于洗滌步驟各研究不盡相同，并沒有統(tǒng)一的標準，筆者認為只要確保洗除外部污染并盡量減少內部藥物損失即可。

2.3 預處理

2.3.1 頭發(fā)的消解

頭發(fā)消解是指通過酸解或堿解等其它方法使待檢測藥物從頭發(fā)基質中游離出來，從而達到檢測目的的過程。以下介紹毛發(fā)中興奮劑檢測的一些消解方法。

表1 毛發(fā)中興奮劑消解方法的比較

合成類固醇的現有水解方法有酸水解［35］、堿水解、甲醇提取法［34］等，但是絕大多數研究者對檢測類固醇都采用堿解法［11-13，18］，檢測類固醇酯類采用甲醇超聲法，同時檢測酯和非酯時才用先甲醇萃取后堿解法［15，17，19］，這是由于頭發(fā)中合成類固醇類濃度為pg/mg的水平，為了獲得較高的回收率，絕大部分研究者摒棄了酸水解法，而選擇釋放藥物更為完全的堿消化法。此外，Nielen等［1］在分析17β-睪酮酯和17β-寶丹酮十一烷酸酯時用2 ml 25 mmol/L的三（2-羰基乙基）磷鹽酸鹽（還原劑）消解1 小時，大部分酯類的最低檢測限均在2～5 ng/g。

糖皮質激素的水解有緩沖溶液消解［30，36］、酶解［21］、甲醇提取法［26，33］等。Raul等［30］用2 ml瑟倫森緩沖液（38.8 ml 9.07 g/L磷酸二氫鉀和61.2 ml 11.87 g/L磷酸氫二鈉，pH =7.6）在40℃下消解糖皮質激素16小時，發(fā)現回收率低，推測可能是其在緩沖液中不太穩(wěn)定。Van den hauwea等［21］探討了從頭發(fā)中提取糖皮質激素的甲醇超聲提取、酸消解、堿消解和酶消解這幾種方法的優(yōu)劣，得出堿消解無檢測物（因為有些糖皮質激素在堿條件下不穩(wěn)定），酸消解和醇超聲有信號但是其信噪比（S/N）分別是酶消解的27%和40%，最后選用酶消解。

β-阻斷劑和β2-激動劑的水解有堿消解［20，22-24］、酸消解［27］等，由于β-阻斷劑和β2-激動劑在堿性和酸性條件下都穩(wěn)定，堿消解比酸消解節(jié)省時間和消解得更徹底，所以大多數研究者采用堿解的方法。

刺激劑類、麻醉劑類和大麻類的水解有甲醇超聲消解［25］、酸解［28］、堿解［25］、緩沖液解［29］和酶解［31］等方法，對于一些含酯基如可卡因、6-單乙酰嗎啡等的藥物最好避免堿解。Skender等［25］鑒于可卡因、6-單乙酰嗎啡在堿中不穩(wěn)定，故對嗎啡、可卡因、6-單乙酰嗎啡等采用2 ml 甲醇在40 ℃ 消解18 h，而對安非他明類則采用1 mol/L氫氧化鈉堿解；此外，Kronstrand等［37］用0.5 ml流動相A（10:10:80，乙腈:甲醇: 20 mM甲酸緩沖液）在超聲水浴振蕩條件下于37℃消解18小時。

2.3.2 頭發(fā)中興奮劑的純化

2.3.2.1 合成類固醇的純化

類固醇的純化采用液液萃?。?8，19］、固相萃取或固液萃取相結合［15，17］的方法。Deshmukh 等［18］進行堿消解后，用1 ml鹽酸和2 ml磷酸緩沖（pH=7.0）中和，然后用戊烷液液萃取，震蕩后離心，有機相透過PTFE膜（0.45 μm），吹干加入100 μl乙腈進行LC-MS/MS檢測。Kintz等［11-13］從頭發(fā)中檢測諾龍、美替諾龍、大力補時首先堿解頭發(fā)，接著用1 ml 1 mol/L鹽酸和2 ml 1 mol/L磷酸緩沖溶液（pH = 7.0）中和，中和后用Isolute C18柱萃取，用1 ml去離子水洗兩次，洗去離子型雜質，再用3份0.5 ml 甲醇把分析物洗脫掉，蒸發(fā)掉溶劑后加入1 ml 0.2 mol/L磷酸緩沖液（pH=7），接著加入100 mg 碳酸鈉：碳酸氫鈉（1:10， w:w）（加堿為了進一步去除酸性物質）和2 ml 戊烷液液萃取。Rambaud等［15，17］采用先甲醇超聲后堿解的水解方法檢測類固醇及其酯，首先是液液萃取，酯類的甲醇萃取液中加入2 ml 去離子水和100 μl 0.1 mol/L氫氧化鈉去除酸性雜質（酯能在此條件下穩(wěn)定，1個小時內消解少于2%），然后2 ml乙酸乙酯萃取，類固醇的消解物同樣用2 ml乙酸乙酯萃取，兩者混合進行固相萃取。首先氨基柱萃取去除離子化雜質，接著二氧化硅柱進一步固相萃取純化，睪酮和諾龍的酯類用1 ml氯仿洗脫，非酯類用兩次1 ml氯仿和乙酸乙酯混合物（3:1，v/v）洗脫，除去了其他的更多的極性雜質。

類固醇的酯的純化采用液液萃取、固相萃取和固液萃取相結合［15，17］等方法。Nielen等［1］在消解液中加入4 ml甲醇提取，再加入4 ml水用C18柱固相萃取，用2 ml乙腈和2 ml乙酸乙酯洗脫。嚴慧等［19］將頭發(fā)用甲醇消解后，采用乙酸乙酯萃取酯類，并在研究中比較了液液萃取和固相萃取，得出液萃比固萃回收率高。

對于純化步驟，頭發(fā)中含有大量的蛋白質和少量脂質，從以往的實驗結果分析，筆者認為固液萃取比液液萃取更有利于去除蛋白質和脂質，而且也適用于低濃度藥物檢測。

2.3.2.2 糖皮質激素的純化

糖皮質激素的純化采用液液萃?。?3］、固相萃?。?1，26，36］和固液萃?。?0］相結合等方式。Raul等［30］用緩沖液消解后離心，上清液用Isolute C18柱萃取，用1 ml 丙酮/去離子水（2:8，v/v），1 ml去離子水和1 ml己烷沖洗，最后用3份0.5 ml乙醇洗脫。吹干乙醇后，加入0.5 ml 0.2 mol/L氫氧化鈉，用3 ml乙醚液液萃取。Van den hauwea等［21］進行酶解后，用2 ml甲醇萃取2次，且吹干后用1 ml乙醇超聲10分鐘，加入6 ml水，用C18柱固相萃取，用5 ml丙酮/水（20:80，v/v）、5 ml水和5 ml己烷沖洗，用6 ml乙醚洗脫，吹干加入流動相。Gaillard等［33］用1 ml甲醇在60℃下消解2小時，乙醇萃取物用4 ml水稀釋，離心5分鐘轉移進Toxi-Tube A進一步純化，離心后有機相蒸發(fā)后加入80 μl乙腈和水混合液（50:50），震蕩混合之后離心3分鐘，取60 μl澄清層注入分析。對于糖皮質純化過程，大多都采用固相萃取，筆者認為由于糖皮質激素的親油性，易與頭發(fā)中的油脂結合，固相萃取可以去除油脂，提高糖皮質激素回收率。

2.3.2.3 β-阻斷劑和β2-激動劑的純化

β-阻斷劑和β2-激動劑的純化采用液液萃?。?3］、固相萃?。?2，27］和固液萃?。?4］等方法。Kintz等［27］進行酸消解后加入0.1 mol/L氫氧化鈉和2 ml碳酸氫鹽的緩沖液（pH = 8.6）中和，用Isolute C18柱固相萃取后用三甲基硼氧六環(huán)－乙酸乙酯的混和物衍生成甲基硼酸衍生物檢測，這些檢測物的最低檢測限（LOD）為2～10 pg/mg，回收率為37～100%。Pelander等［22］利用液相色譜-時間飛行質譜（LC-TOFMS）檢測頭發(fā)中的β-阻斷劑，堿解冷卻后用鹽酸調到pH=7加入水，取1ml溶液加入內標和2 ml磷酸緩沖液，用Isolute HCX-5 （130 mg）柱固相萃取，用1 ml磷酸緩沖液和3 ml 甲醇洗，最后堿性部分用3 ml新配制的乙酸乙酯-氨水（98:2，v/v）洗脫，蒸干加入150 μl乙腈-0.1%甲酸（1:9，v/v）分析。Fente等［23］用GC-MS檢測牛毛中的克倫特羅，堿解后用檸檬酸鈉緩沖液（pH = 4.8）把pH值調到12，25 ml二氯甲烷在37℃下萃取4小時，濃縮有機相后加入100 μl雙（三甲基甲硅烷基）三氟乙酰胺（BSFTA）和乙酸乙酯（1:1，v/v）衍生化，用25 μl乙酸乙酯溶解。Machnik等［24］用GC–HRMS檢測克倫特羅，5 mg 頭發(fā)堿解后加入3 ml水，后用5 ml叔丁甲基醚萃取，蒸發(fā)后用0.1 ml甲醇溶解和5 ml磷酸緩沖液稀釋，用免疫親和性柱子分離克倫特羅，先用水和15%甲醇溶液洗雜質，再用3 ml乙醇/冰醋酸（80:20）洗脫，干燥后衍生化。以上可以看出大多數β-阻斷劑和β2-激動劑都采用堿消解，并且對于大量的堿性藥物用固相萃取柱較好。

2.3.2.4 刺激劑類、麻醉劑類和大麻類的純化

刺激劑類、麻醉劑類和大麻類的純化采用液液萃?。?5］和固相萃?。?5，28，31］等方法。Cordero等［28］將10～30 mg頭發(fā)酸解冷卻后加入2 ml 0.1 mol/ L的磷酸緩沖液和200 μl 1 mol/LKCl調節(jié)pH=7.0 ± 0.4，用Bakerbond Narc-2混合模式固相萃取柱進一步純化，最后用氯仿:異丙醇（80:20，2 ml）洗脫酸性和中性藥物，接著用氯仿:異丙醇:氫氧化銨（80:20:3，2 ml）洗脫堿性藥物，吹干用甲基雙本氟醋酰胺（MBTFA）和甲基三甲基甲硅烷基三氟乙酰胺（MSTFA）+1%TCMS（30 μl）進行兩次衍生化后用GC-MS檢測。該實驗檢測了鴉片制劑、安非他明類、大麻類、安定類和去甲西泮等藥物的回收率為73 ～ 100%。Moeller等［31］對10～30 mg頭發(fā)用酶消解后，將上清液加入2 ml磷酸緩沖液，振蕩離心上清液后用Chromabond C18柱萃取，用3×500 μl的丙酮/二氯甲烷（1:3）洗脫，揮干后用100 μl五氟丙酸酐（PFPA）和70 μl 五氟丙醇（PFPOH）在60℃衍生化30 min后用GC-MS檢測。Skender等［25］對嗎啡、可卡因、6-單乙酰嗎啡等采用甲醇消解后固相萃取，用丙酸酐/嘧啶衍生化，最后用GC/MS檢測，而對安非他明類則采用堿解，后乙酸乙酯液萃，七氟丁酸酐衍生化，最后用GC/MS檢測。此外Kronstrand等［37］對10～50 mg 頭發(fā)和0.5 ml 流動相A（10:10:80，乙腈:甲醇:20 mM甲酸緩沖液）在超聲水浴振蕩條件下于37℃消解18 h，離心后有機相進行LC–MS–MS檢測，該實驗主要檢測了嗎啡、6-單乙酰嗎啡、安非他明等藥物，回收率77～100%。這幾種方法相比最后一種方法更簡便且回收率較高，并且嗎啡、6-單乙酰嗎啡、安非他明等藥物可以同時檢測。

2.4 檢測方法

研究者們以往采用的檢測方法是GC-MS、GC-MS/MS、LC-MS、LC-MS/MS、LC-TOFMS和GC-HRMS等。對目標物濃度低的頭發(fā)而言，GC-MS和LC-MS的靈敏度和分辨率與GC-MS/ MS、LC-MS/MS相比都有所欠缺。GC- HRMS是選擇離子的精確質量進行測定，其質量可精確到小數點后4位，降低了背景干擾聲，提高了測量的信噪比。GC-MS/MS兩個分析器也提高了信噪比，以往的GC-HRMS和GC-MS/MS檢測合成類固醇的靈敏度沒有明顯區(qū)別，但GC-MS/MS測定睪酮酯類的靈敏度稍低于高分辨率質譜［19］。GC-MS/MS和GC-HRMS與LC-MS/MS和LC-TOFMS相比，后者可以適用不同極性的目標物，預處理簡單，無需衍生化，分析時間短。LC-TOFMS和LC/MS/MS相比，前者定性能力強，后者定量能力強。筆者認為，可以對幾種檢測方法進行對比分析，探討其不同優(yōu)勢。

3 存在問題

確定頭發(fā)中興奮劑的檢測閾值十分重要。目前頭發(fā)中藥物的興奮劑檢測還不具有明確的閾值，藥物濫用和精神健康服務管理局（Substance Abuse and Mental Health Services Administration）和頭發(fā)檢測協(xié)會（the Society of Hair Testing）對頭發(fā)中的大麻類、可卡因、鴉片類、安非他明類等規(guī)定了界限。一些研究者對興奮劑中內源性藥物的閾值檢測進行研究，測定正常人群頭發(fā)中內源性類固醇激素的水平，為內源性類固醇興奮劑濫用的判斷提供了方法和依據，如有研究［39］通過GC-MS的方法檢測雄烯二醇濃度為9～19 pg/mg，睪酮為13～24 pg/ mg，雄烯二酮為5 ～ 15 pg/mg，普拉雄酮（DHEA）為21～56 pg/mg，雙氫睪酮為2～8 pg/mg，17α-羥基孕酮為1～7 pg/mg。Kintz等［40］和沈敏等［41］也檢測了頭發(fā)中內源性類固醇的含量，沈敏研究證明，睪酮和DHEA的濃度差值與血液中的差值相一致。Raul等［42］得出內源性皮質醇的濃度范圍為5～91 pg/mg （平均18 pg/mg），可的松的濃度范圍為12～163 pg/mg（平均70 pg/mg），同時還得出頭發(fā)中可的松比皮質醇的濃度高（與血液相反）是由于在進入頭發(fā)之前，皮質醇就被II型11 HSD（H-hydroxysteroid-dehydrogenase）轉變成可的松。頭發(fā)的顏色對其濃度沒有影響，性別的影響存在，但未被統(tǒng)計，年齡對其有一定影響，例如20歲以前人頭發(fā)中可的松的濃度明顯較高。

單次攝藥是否能夠被檢測對于頭發(fā)中賽內興奮劑檢測具有重要意義。Segura等［35］對豚鼠腹腔注射類固醇藥物，由于檢測方法不靈敏、注射劑量太少和檢測時間設置問題等，得出了單次注射不能在毛發(fā)中檢測到的結論。Shen等［3］研究顯示，單次攝藥后對毛發(fā)進行檢測（因美替諾龍的結構原因，其不易被頭發(fā)吸收，使用多次才有可能被檢測到），最高濃度大部分出現在注射后2 ～ 4天，司坦唑醇在第10天。這就為采取樣品提供了最佳的時間依據，也為對于一次性服用藥物的毛發(fā)檢測提供了可能性。

頭發(fā)采集中可能會遇到染發(fā)、禿頭和剃光等情況。為了找到頭發(fā)的替代品，Kintz等［43］對頭發(fā)、陰毛、腋毛中DHEA和睪酮的生理濃度進行了比較，除了腋毛中DHEA的濃度特別高，總體上藥物濃度在頭發(fā)和非頭發(fā)中都是類似的。Thieme等［4］對身體不同部位毛發(fā)濃度研究得出不同的結論：陰毛、手臂、腿毛藥物濃度明顯高于頭發(fā)，他認為不同部位毛發(fā)藥物濃度的不同與生長動力學、藥物結合率以及生物轉化有關。

關于頭發(fā)檢測是否存在種族差異問題，沈敏等［41］對比外國其他一些研究者關于內源性固醇類的研究數據表明，中國人與外國人并沒有明顯區(qū)別，但是易與黑色素結合的藥物還是容易受頭發(fā)顏色的影響。

藥物的用藥量與頭發(fā)中藥物及其代謝物濃度的關系也有待進一步研究，Pe′pin等［44］根據大量的濫用可卡因用量多少的描述，把其分成低、中、高3個水平，并檢測其相應的濃度，如低濃度濫用者的可卡因濃度低于4 ng/mg。Pascal Kintz等［43］通過檢測5年中陽性尿樣的運動員頭發(fā)中可卡因的濃度，發(fā)現約38%的陽性運動員頭發(fā)中可卡因濃度為5～20 ng/mg，約25%的陽性運動員頭發(fā)中可卡因濃度為1～5 ng/mg。

4 展望

1999年，頭發(fā)檢測協(xié)會（the Society of Hair Testing）表示頭發(fā)檢測不能代替?zhèn)鹘y(tǒng)尿樣檢測，只能作為補充。尿樣檢測結果陽性不能被頭發(fā)檢測陰性否決，而在尿樣陰性情況下，頭發(fā)檢測陽性表明在采樣前的一段時間里接觸過藥物。在反興奮劑領域頭發(fā)檢測對于賽外禁止的藥物具有重要意義，但是對于有含量界限的藥物尚需研究并確定頭發(fā)中藥物的檢測閾值。

總之，由于頭發(fā)樣品具有性質穩(wěn)定、易取材、易保存、檢出時限長、無創(chuàng)性，反映用藥史等優(yōu)點，因此其用于尿樣檢測補充有廣闊的前景：當尿檢陽性時，頭發(fā)檢測可區(qū)分是單次攝藥還是長期攝藥；頭發(fā)分析的長檢測時限和反映用藥史的特點使其可用于賽外抽檢，替代“飛行藥檢”；頭發(fā)中母體大于代謝物的規(guī)律有助于鑒別進入體內藥物分子的形式（酯類或衍生物），有望區(qū)分外源性和內源性物質；頭發(fā)易收集、易保存，可進行二次采樣。同時，頭發(fā)樣品的興奮劑檢測還存在許多問題：頭發(fā)興奮劑的檢測閾值尚不清楚；頭發(fā)中興奮劑的分析方法有待建立；頭發(fā)中興奮劑的吸收和代謝情況尚不清楚；尿樣、血樣和頭發(fā)中興奮劑濃度關系尚未確立；不同區(qū)域、種族之間是否存在差異等問題，尚待進一步研究。

［1］Nielen MW，Lasaroms JJ，Mulder PP，et al. Multi residue screening of intact testosterone esters and boldenone undecylenate in bovine hair using liquid chromatography electrospray tandem mass spectrometry. J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci，2006，830（1）：126-134.

［2］Anielski P. Hair analysis of anabolic steroids in connection with doping control – results from horse samples. J Mass Spectrom，2008，43：1001-1008.

［3］Shen Min，Xiang Ping，Yan Hui，et al. Analysis of anabolic steroids in hair： Time courses in guinea pigs. Steroids，2009，74（9）：773-778.

［4］Thieme D，Anielski P，Grosse J，et al. Identif cation of anabolic steroids in serum，urine，sweat and hair comparison of metabolic patterns. Anal Chim Acta，2003，483（1-2）：299-306.

［5］ 沈敏，向平.毛發(fā)分析基礎及應用.北京：科學出版社，2010. 86-92.

［6］Nakahara Y，Takahashi K，Kikura R. Hair analysis for drugs of abuse：X. Effect of physicochemical properties of drugs on the incorporation rates into hair. Biol Pharm Bull，1995，18（9）：1223-1227.

［7］Nakahara Y，Kikura R. Hair analysis for drugs of abuse：XIII. Effect of structural factors on incorporation of drugs into hair： the incorporation rates of amphetamine analogs. Arch Toxicol，1996，70（12）：841-849.

［8］Kikura R，Nakahara Y，Mieczkowski T，et al. Hair analysis for drug abuse： XV. Disposition of 3，4-methylenedioxy methamphetamine（ MDMA） and its related compounds into rat hair and application to hair analysis for MDMA abuse. Forensic Sci Int，1997，84（1-3）：165-177.

［9］Scott KS，Nakahara Y. A study into the rate of incorporation of eight benzodiazepines into rat hair. Forensic Sci Int，2003，133（1-2）：47-56.

［10］Gowa R，Thomson S，Rieder M，et al. An assessment of cortisol analysis in hair and its clinical applications. Forensic Sci Int，2010，196：32-37.

［11］Kintz P，Cirimel V，Dumestre-Toulet V，et al.Doping control for nandrolone using hair analysis. J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci，2001，24（5-6）：1125-1130.

［12］ BressonM，Cirimele V，Villain M，et al. Doping control for metandienone using hair analyzed by gas chromatography–tandem mass spectrometry. J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci，2006，836（1-2）：124-128.

［13］Kintz P，Cirimele V，Dumestre-Toulet V，et al.Doping control for methenolone using hair analysis by gas chromatography–tandem mass spectrometry. J Chromatogr B Analyti Technol Biomed Life Sci，2002，766（1）：161-167.

［14］Gambelunghe C，Rossi R，Ferranti C，et al.Hair analysis by GC/MS/MS to verify abuse of drugs. J Appl Toxicol，2005，25：205-211.

［15］Rambaud L，Bichon E，Cesbron N，et al. Study of 17β-estradiol-3-benzoate，17α-methyltestosterone and medroxyprogesterone acetate f xation in bovine hair. Analytica Chimica Acta，2005，532（2）：165-176.

［16］Aqai P，Stolker AAM，Lasaroms JJP. Effect of sample pre-treatment on the determination of steroid esters in hair of bovine calves. J Chromatogr A，2009，1216（46）：8233-8239.

［17］Gaillard Y，Vayssette F，Balland A，et al. Gas chromatographic–tandem mass spectrometric determination of anabolic steroids and their esters in hair Application in doping control and meat quality control. J Chromatogr B Biomed Sci Appl，1999，735（2）：189-205.

［18］Deshmukh N，Hussain I，Barker J，et al.Analysis of anabolic steroids in human hair using LC–MS/MS. Steroids，2010，75（10）：710-714.

［19］嚴慧，沈敏，向平，等.毛發(fā)中外源性蛋白同化雄性類固醇的檢測及評價研究.上海：復旦大學碩士研究生學位論文，2008. 6-72.

［20］ Kintz P，Mangin P. Hair analysis for detection of betablockers in hypertensive patients. Eur J Clin Pharmacol，1992，42（3）：351-352.

［21］ Van den hauweO，Dumoulin F，Elliott C，et al. Detection of synthetic glucocorticoid residues in cattle tissue and hair samples after a single dose administration using LC–MS/MS. J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci，2005，817（2）：215-223.

［22］ PelanderA，Ristimaa J，Rasanen I，et al. Screening for basic drugs in hair of drug addicts by liquid chromatography/time-of-flight mass spectrometry.Ther Drug Monit，2008，30（6）：717-724.

［23］ Fente C A，Vázquez BI，Franco C，et al. Determination of clenbuterol residues in bovine hair by using diphasic dialysis and gas chromatography-mass spectrometry. J Chromatogr B Biomed Sci Appl，1999，726（1-2）：133-139.

［24］ Machnik M，Geyer H，Horning S，et al.Long-term detection of clenbuterol in human scalp hair by gas chromatography–high-resolution mass spectrometry. J Chromatogr B Biomed Sci Appl，1999，723（1-2）：147-155.

［25］ SkenderL，Karaci? V，Brci? I，et al.Quantitative determination of amphetamines，cocaine，and opiates in human hair by gas chromatography/mass spectrometry. Forensic Sci Int，2002，125（2-3）：120-126.

［26］Bévalot F，Gaillard Y，Lhermitt MA，et al.Analysis of corticosteroids in hair by liquid chromatography–electrospray ionization mass spectrometry. J Chromatogr B Biomed Sci App，2000，740（2）：227-236.

［27］ KintzP，Dumestre-Toulet V，Jamey C，et al. Doping control for beta-adrenergic compounds through hair analysis. J Forensic Sci，2000，45（1）：170-174.

［28］ CorderoR，Paterson S. Simultaneous quantification of opiates，amphetamines，cocaine and metabolites and diazepam and metabolite in a single hair sample using GC–MS. J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci，2007，850（1-2）：423-431.

［29］ Villain M，Concheiro M，Cirimele V，et al.Screening method for benzodiazepines and hypnotics in hair at pg/ mg level by liquid chromatography–mass spectrometry/ mass spectrometry. J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci，2005，825（1）：72-78.

［30］ Raul J S，Cirimele V，Ludes B，et al.Detection of physiological concentrations of cortisol and cortisone in human hair. Clin Biochem，2004，37（12）：1105-1111.

［31］ Moeller MR，Fey P，Wennig R.Simultaneous determi-nation of drugs of abuse（opiates，cocaine and amphetamine） in human hair by GC-MS and its application to a methadone treatment program. Forensic Sci Int，1993，63（1-3）：185-206.

［32］ H?ld KM，Wilkins DG，Rollins DE，et al. Simultaneous quantitation of cocaine，opiates，and their metabolites in human hair by positive ion chemical ionization gas chromatography-mass spectrometry. J Chromatogr Sci，1998，36：125-130.

［33］Gaillard Y，Vayssette F，Pépìn G. Compared interest between hair analysis and urinalysis in doping controls results for amphetamines，corticosteroids and anabolic steroids in racing cyclists. Forensic Sci Int，2000，107（1-3）：361-379.

［34］ Thieme D，Grosse J，Sachs H，et al.Analytical strategy for detecting doping agents in hair. Forensic Sci Int，2000，107（1-3）：335-345.

［35］Segura J，Pichini S，Peng SH，et al. Hair analysis and detectability of single dose administration of androgenic steroid esters. Forensic Sci Int，2000，107：347-359.

［36］Cirimele V，Kintz P，Dumestre V，et al. Identif cation of ten corticosteroids in human hair by liquid chromatography–ionspray mass spectrometry. Forensic Sci Int，2000，107（1-3）：381-388.

［37］ KronstrandR，Nystr?m I，Strandberg J，et al. Screening for drugs of abuse in hair with ion spray LC–MS–MS. Forensic Sci Int，2004，145（2-3）：183-190.

［38］ GalloP，Brambilla G，Neri B，et al. Purification of clenbuterol-like β2-agonist drugs of new generation from bovine urine and hair by α1-acid glycoprotein affinity chromatography and determination by gas chromatography–mass spectrometry. Anal Chim Acta，2007，587（1）：67-74.

［39］Kintz P. Testing for anabolic steroids in hair： a review. Legal Medicine，2003，5：29-33.

［40］ KintzP，Cirimele V，Jeanneau T，et al. Identif cation of testosterone and testosterone esters in human hair. J Anal Toxicol，1999，23（5）：352-356.

［41］ 沈敏，向平，沈保華，等. 頭發(fā)中內源性類固醇激素的氣相色譜-串聯(lián)質譜分析.色譜，2008，26（4）：454-459.

［42］ Raul J S，Cirimele V，Ludes B，et al. Detection of physiological concentrations of cortisol and cortisone in human hair. Clin Biochem，2004，37（12）：1105-1111.

［43］Kintz P，Cirimele V，Ludes B. Pharmacological criteria that can affect the detection of doping agents in hair. Forensic Sci Int，2000，107（1-3）：325-334.

［44］ Pépìn G，Gaillard Y. Concordance between self-reported drug use and f ndings in hair about cocaine and heroin，Forensic Sci Int，1997，84：37-41.