李富文 王樹成 馬艷 陳磊

(天津出入境檢驗(yàn)檢疫局 天津 300457)

1 前言

鹵蟲(Artemia)含有豐富的蛋白質(zhì)和動(dòng)物所必須的高級不飽和脂肪酸，是水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的理想餌料［1］。據(jù)報(bào)道，當(dāng)今全球85%以上的水產(chǎn)養(yǎng)殖育苗均在使用鹵蟲。但鮮活鹵蟲不便儲存和運(yùn)輸，而鹵蟲卵作為鹵蟲的休眠卵，容易儲存和流通，可以隨時(shí)隨地孵化，使用極為方便，長期以來鹵蟲卵在國際市場上供不應(yīng)求，我國每年都從國外大量進(jìn)口鹵蟲卵，2010年我國進(jìn)口鹵蟲卵約2000t。

鹵蟲卵作為一種動(dòng)物源性飼料產(chǎn)品［2］，根據(jù)我國有關(guān)進(jìn)出境動(dòng)植物檢疫法律法規(guī)的規(guī)定［3－5］，在進(jìn)境時(shí)應(yīng)當(dāng)實(shí)施檢疫。但是，目前人們對鹵蟲卵檢疫方面的研究剛剛起步，檢疫風(fēng)險(xiǎn)尚不確定，也未形成一套完整的檢疫方法，給進(jìn)境鹵蟲卵檢疫工作帶來一定困難。本文擬對鹵蟲卵的檢疫風(fēng)險(xiǎn)進(jìn)行初步分析，并對進(jìn)境鹵蟲卵檢疫監(jiān)管作一初步探索。

2 概述

2.1 鹵蟲的生物學(xué)特性

鹵蟲，俗稱鹽水豐年蟲或豐年蟲，屬甲殼動(dòng)物亞門(Crustacea)鰓足綱(Branchiopoda)無甲目(Anostaca)鹵蟲科(Artemidae)［6］，是生活在碳酸鹽和硫酸鹽鹽湖、鹽田等高鹽水域中的一種小型低等甲殼類動(dòng)物，雌雄異體，雌大雄小。

鹵蟲的繁殖有兩種方式，春夏季節(jié)水域環(huán)境條件優(yōu)越穩(wěn)定時(shí)行孤雌生殖，產(chǎn)生夏卵，夏卵殼薄，無需受精，就能夠迅速發(fā)育成無節(jié)幼體，成為雌蟲。夏末秋初雨季以后，氣溫下降環(huán)境改變，雄體出現(xiàn)，雌雄交尾產(chǎn)生休眠卵(即鹵蟲卵)。在夏季，如遇環(huán)境條件突變，有時(shí)也會(huì)產(chǎn)生休眠卵。

2.2 鹵蟲資源及其分布

鹵蟲是一種廣溫耐高鹽生物，廣泛分布于鹽田和內(nèi)陸鹽湖?，F(xiàn)在發(fā)現(xiàn)除了南、北極外，亞洲、歐洲、美洲、大洋洲和非洲等地均有分布，全世界已報(bào)道的鹵蟲產(chǎn)地有55個(gè)國家共350多處。目前世界鹵蟲主要生產(chǎn)國有美國、中國、加拿大、阿根廷、哥倫比亞、巴西、澳大利亞、泰國、越南、伊朗和法國等國家和地區(qū)［7］。我國是鹵蟲資源非常豐富的國家［8，9］，但由于水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展，近年來我國大量進(jìn)口鹵蟲卵，主要貿(mào)易國是美國和俄羅斯。

3 檢疫風(fēng)險(xiǎn)識別

近年來，隨著水生動(dòng)物疫病尤其是對蝦疾病的暴發(fā)，國內(nèi)外學(xué)者已開始關(guān)注鹵蟲能否作為水生動(dòng)物病原體的傳播媒介，并開展了許多研究工作。因此，有必要開展鹵蟲攜帶動(dòng)物病原體風(fēng)險(xiǎn)分析，并據(jù)此制定相應(yīng)的檢疫項(xiàng)目，嚴(yán)防相關(guān)疫病傳入，保護(hù)我國水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的可持續(xù)健康發(fā)展。

3.1 病毒

3.1.1 研究進(jìn)展

3.1.1.1 白斑綜合征病毒(white spot syndrome virus，WSSV)

目前，鹵蟲能否傳播WSSV尚有爭議。在對WSSV傳播途徑及宿主調(diào)查中，國內(nèi)資料顯示有鹵蟲WSSV陽性檢測的報(bào)道，也有未檢出的報(bào)道。

黃健等［10］應(yīng)用單克隆抗體ELISA在鹵蟲中檢出WSSV。史成銀等［11］用PCR－核酸探針斑點(diǎn)雜交在鹵蟲無節(jié)幼體和浮游生物樣品中檢測出WSSV。宋曉玲等［12］采用DNA斑點(diǎn)雜交法對對蝦餌料和環(huán)境生物樣品進(jìn)行WSSV的檢測，結(jié)果表明對蝦主要餌料及環(huán)境生物類群包括魚類、蝦類、蟹類、橈足類、端足類、沙蠶、鹵蟲均可檢出WSSV，其中小型蝦類、端足類、橈足類、蟹類樣品的WSSV檢出率均高于20%，鹵蟲檢出率為 13.3%。鄧燈等［13］利用PCR從鹵蟲體內(nèi)擴(kuò)增出WSSV特異性片段，鄧燈認(rèn)為，雖其攜帶量較少，在苗種培育期和養(yǎng)殖期使用攜帶WSSV的鹵蟲，可能導(dǎo)致對蝦感染W(wǎng)SSV。為了進(jìn)一步證明鹵蟲攜帶的WSSV是否有活性且能否傳播給對蝦，鄧燈［14］等對鹵蟲進(jìn)行WSSV投喂(浸泡)感染，然后用攻毒后的鹵蟲投喂中國明對蝦，結(jié)果表明，鹵蟲可以攜帶有活性的WSSV病毒粒子，并可通過攝食導(dǎo)致對蝦間接地?cái)y帶病毒，但病毒感染能力有限。

雷質(zhì)文等［15］用浸浴法感染鹵蟲，原位雜交未在其體內(nèi)檢出WSSV，用核酸探針斑點(diǎn)雜交在鹵蟲無節(jié)幼體和浮游生物樣品中也未檢測出WSSV。

3.1.1.2 傳染性皮下和造血器官壞死病毒(Infectious hypodermal and hematopoietic necrosis virus，IHHNV)

史成銀等［16］應(yīng)用 PCR和 RT－PCR技術(shù)對WSSV和IHHNV等多種對蝦病毒進(jìn)行檢測，在多個(gè)鹵蟲樣品中這些病毒均未能檢出;但史成銀認(rèn)為，不能就此認(rèn)為自然界中鹵蟲不能攜帶、傳播這些病毒，需要更多的調(diào)查和進(jìn)一步研究。

3.1.1.3 魚類病毒性神經(jīng)壞死病病毒(Viral nervous necrosis virus，VNNV)和傳染性胰臟壞死病病毒(Infectious Pancreatic Necrosis virus，IPNV)

Skliris等［17］報(bào)道，作為仔魚餌料的輪蟲和鹵蟲對VNNV不敏感，認(rèn)為餌料不是病毒傳染源;然而Chi等［18］用RT－PCR檢測這兩種餌料時(shí)，其結(jié)果呈陽性。Mortensen等［19］在對養(yǎng)殖挪威大菱鲆 IPNV的相關(guān)性研究中發(fā)現(xiàn)，養(yǎng)殖場周圍的鹵蟲中檢出IPNV。

3.1.2 風(fēng)險(xiǎn)識別

3.1.2.1 WSSV 和 IHHNV

WSSV和IHHNV是OIE規(guī)定甲殼類水生動(dòng)物法定通報(bào)性疾病(OIE listed diseases 2011)。盡管鹵蟲攜帶WSSV和IHHNV還有爭議，但已有檢出報(bào)道。1999年當(dāng)WSSV蔓延到拉丁美洲時(shí)，巴西立即對進(jìn)口鮮活冷凍甲殼類動(dòng)物(包括鹵蟲)和多毛類環(huán)節(jié)動(dòng)物關(guān)閉其邊境，迄今巴西一直沒有發(fā)生WSSV。

鹵蟲與蝦、蟹類同屬甲殼動(dòng)物，《進(jìn)境水生動(dòng)物檢驗(yàn)檢疫管理辦法》［20］中明確了甲殼類動(dòng)物的3個(gè)檢測項(xiàng)目(濤拉綜合征、白斑綜合征、黃頭病);世界動(dòng)物衛(wèi)生組織(OIE)《水生動(dòng)物疾病診斷手冊》［21］中提出了與鹵蟲(卵)相關(guān)的疫病僅有白斑綜合征。

根據(jù)SPS協(xié)議的相關(guān)規(guī)定，可對進(jìn)境鹵蟲卵進(jìn)行WSSV檢測。此外，為防控IHHNV，可對IHHNV實(shí)施監(jiān)測。

3.1.2.2 VNNV 和 IPNV

VNNV和IPNV是魚類重要的傳染病，鹵蟲等生物餌料是否為VNNV和IPNV的天然宿主，或者是受到VNNV和IPNV的污染，這些問題還須進(jìn)一步研究。為了控制傳入風(fēng)險(xiǎn)，建議對進(jìn)境鹵蟲進(jìn)行VNNV和IPNV的監(jiān)測。

3.2 細(xì)菌

3.2.1 研究進(jìn)展

王傳斌等［22］利用進(jìn)口鹵蟲卵進(jìn)行檢測，結(jié)果沙門氏菌、弧菌、真菌和聚縮蟲等均未檢出，分離出5株細(xì)菌，分別為假單胞菌屬和腸桿菌科細(xì)菌，且均為非致病菌。翟銀成等［23］對加工鹵蟲卵和毛料鹵蟲卵中沙門氏病原菌進(jìn)行分離與鑒定，確定鹵蟲卵攜帶沙門氏菌病原菌，并探討了沙門氏菌在不同鹽分和pH值蛋白胨中的增菌效果，以及沙門氏菌在不同鹽分和水分的冷藏鹵蟲卵中的存活規(guī)律。Bergh等［24］已發(fā)現(xiàn)鹵蟲是鰻弧菌(Vibrio anguillarum)的傳播載體。

3.2.2 風(fēng)險(xiǎn)識別

3.2.2.1 沙門氏菌

由于沙門氏菌在自然界廣泛存在，且對動(dòng)物的健康具有很大的威脅，故在衛(wèi)生安全檢測要求中，世界各國普遍規(guī)定食品和飼料中不得檢出沙門氏菌。我國《飼料衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》(GB13078)也規(guī)定，飼料中不得檢出沙門氏菌。

但目前從國外進(jìn)口的鹵蟲卵既有已經(jīng)國外加工廠深加工、可直接投放市場的，也有僅經(jīng)過清洗、去雜等簡單加工、入境后需要在我國進(jìn)行再次加工的，并且簡單加工的鹵蟲卵占進(jìn)口量的絕大多數(shù)。

因此，對已深加工的鹵蟲卵進(jìn)行沙門氏菌的檢測是鹵蟲動(dòng)物性飼料使用安全的重要保障;對簡單加工的需要對國內(nèi)的加工場所加強(qiáng)檢疫監(jiān)管，杜絕沙門氏菌污染。

3.2.2.2 鰻弧菌

有關(guān)魚類弧菌病的記錄最早見于16世紀(jì)的意大利，當(dāng)時(shí)稱其為紅癤病、赤瘟病或海水癤瘡病。迄今為止，已命名的弧菌病原有37種，其中致病性的有10多種，最常見的是鰻弧菌。已有研究表明鹵蟲是鰻弧菌的傳播載體。建議對進(jìn)境鹵蟲卵進(jìn)行鰻弧菌檢測。

3.3 寄生蟲

3.3.1 研究進(jìn)展

長期以來，鹵蟲卵被認(rèn)為是聚縮蟲傳播的重要途徑［25］。眾所周知，鹵蟲卵及其無節(jié)幼體在水產(chǎn)養(yǎng)殖中是很好的開口餌料，由于鹵蟲無節(jié)幼體與鹵蟲卵殼很難分離開，故在投喂鹵蟲無節(jié)幼體時(shí)往往帶有大量鹵蟲卵殼，而鹵蟲卵殼恰好又是聚縮蟲很好的附著基。

3.3.2 風(fēng)險(xiǎn)識別

聚縮蟲是一種寄生蟲，在水產(chǎn)養(yǎng)殖中流行較為普遍，并且傳播途徑較多，對于水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的危害較大。鹵蟲卵是攜帶聚縮蟲的重要媒介物，應(yīng)該把聚縮蟲做為鹵蟲卵的重點(diǎn)檢疫對象，加強(qiáng)和提高對聚縮蟲檢疫的靈敏度，堅(jiān)決杜絕聚縮蟲通過鹵蟲卵而傳入或傳出，防止聚縮蟲病的發(fā)生和流行。

4 檢疫監(jiān)管方式探討

目前，國內(nèi)對于鹵蟲卵的檢驗(yàn)方法已有行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，是國家質(zhì)檢總局頒布的《進(jìn)出口鹵蟲卵檢驗(yàn)方法》(SN/T0476－95)。但是對于鹵蟲卵的檢疫，我國目前無專門的檢疫程序，國外也鮮有鹵蟲檢疫的報(bào)道。鹵蟲卵兼有動(dòng)物和動(dòng)物產(chǎn)品的檢疫屬性，既要按動(dòng)物產(chǎn)品檢疫，又要參照隔離檢疫的方法對其進(jìn)行加工監(jiān)管［26］。結(jié)合我國有關(guān)進(jìn)口動(dòng)物產(chǎn)品及水生動(dòng)物的檢疫規(guī)定，在檢疫中擬提出如下檢疫監(jiān)管方式，以供參考。

4.1 注冊登記

已經(jīng)國外加工廠深加工、可直接投放市場的鹵蟲卵，重點(diǎn)要求鹵蟲卵須來自國外官方主管機(jī)構(gòu)注冊登記的加工廠;僅經(jīng)過清洗、去雜等簡單加工、入境后需要在我國進(jìn)行再次加工的，建議對鹵蟲卵的捕撈區(qū)域進(jìn)行注冊登記。

4.2 檢疫審批

貨主在簽訂進(jìn)口鹵蟲卵合同之前，應(yīng)按規(guī)定辦理檢疫審批手續(xù)。檢驗(yàn)檢疫機(jī)構(gòu)主要審查審查是否來自我國允許進(jìn)口的國家或地區(qū)以及注冊加工廠或捕撈區(qū)域，并提出入境后的檢疫監(jiān)管要求。

4.3 口岸查驗(yàn)

鹵蟲卵進(jìn)境前或進(jìn)境時(shí)，貨主或其代理人應(yīng)向入境口岸檢驗(yàn)檢疫機(jī)關(guān)報(bào)檢。報(bào)檢時(shí)應(yīng)當(dāng)提供原產(chǎn)地證書、貿(mào)易合同、信用證、提單、發(fā)票、《中華人民共和國進(jìn)境動(dòng)植物檢疫許可證》以及輸出國或地區(qū)檢疫證書。檢疫人員實(shí)施現(xiàn)場查驗(yàn)，包括核對單證、外包裝消毒和檢查包裝等。

對進(jìn)口已經(jīng)國外加工廠深加工、可直接投放市場的鹵蟲卵，根據(jù)有關(guān)規(guī)定采取樣品，送實(shí)驗(yàn)室檢測。經(jīng)檢驗(yàn)檢疫合格的，準(zhǔn)予銷售、使用;對進(jìn)口經(jīng)簡單加工的鹵蟲卵，現(xiàn)場查驗(yàn)合格后原包裝運(yùn)抵《中華人民共和國進(jìn)境動(dòng)植物檢疫許可證》規(guī)定的隔離、加工場所。

4.4 實(shí)驗(yàn)室檢測

4.4.1 檢測項(xiàng)目

WSSV、沙門氏菌(已經(jīng)國外深加工的鹵蟲卵)、鰻弧菌和聚縮蟲。

4.4.2 監(jiān)測項(xiàng)目

IHHNV、VNNV和 IPNV。

4.5 后續(xù)監(jiān)管

根據(jù)飼料《關(guān)于發(fā)布進(jìn)出口飼料和飼料添加劑風(fēng)險(xiǎn)級別及檢驗(yàn)檢疫監(jiān)管方式的公告》［26］，鹵蟲卵可歸為餌料用活動(dòng)物，風(fēng)險(xiǎn)等級I級，需要對進(jìn)口后的隔離、加工場所實(shí)施檢疫監(jiān)督。因此，運(yùn)抵《中華人民共和國進(jìn)境動(dòng)植物檢疫許可證》規(guī)定的加工場所的鹵蟲卵，由目的地檢驗(yàn)檢疫局抽取樣品進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室檢測，并負(fù)責(zé)后續(xù)監(jiān)管。

另外，一旦在在鹵蟲卵中檢出聚縮蟲，也應(yīng)做好進(jìn)境鹵蟲卵的后續(xù)監(jiān)管，加強(qiáng)消毒處理［25］，可采用50mg/L的漂白粉溶液浸泡30min至1 h，殺死蟲體后，再進(jìn)行鹵蟲卵的孵化。有人還提出更為徹底的消毒處理方法，就是待無節(jié)幼體孵出后，再加熱到50℃ －60℃，燙死卵殼上的聚縮蟲后，再作為水產(chǎn)養(yǎng)殖的餌料。

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