蛋白磷酸化/去磷酸化是指蛋白激酶(Protein kinase,PK)催化蛋白質(zhì)的含羥基氨基酸(絲/蘇和酪)的側(cè)鏈羥基形成磷酸酯,和蛋白質(zhì)磷酸酯酶(Protein phosphatase,PPase)催化磷酸蛋白的磷酸酯鍵水解而去磷酸化的過(guò)程。蛋白磷酸化修飾是生物體內(nèi)重要的共價(jià)修飾方式之一,這一可逆過(guò)程受蛋白激酶和磷酸酶的協(xié)同作用控制,細(xì)胞內(nèi)任何一種蛋白質(zhì)的磷酸化狀態(tài)是由蛋白激酶和蛋白磷酸酯酶的兩種酶活性之間的平衡決定的。蛋白磷酸化/去磷酸化是細(xì)胞信號(hào)傳遞過(guò)程中普遍存在的現(xiàn)象,在調(diào)節(jié)信號(hào)傳遞過(guò)程中起重要作用。在剛地弓形蟲(chóng)入侵和寄生于宿主細(xì)胞的過(guò)程中,不但其自身蛋白發(fā)生磷酸化/去磷酸化,而且其所入侵、寄生的宿主細(xì)胞的蛋白也會(huì)廣泛地發(fā)生磷酸化/去磷酸化。被弓形蟲(chóng)感染的宿主細(xì)胞信號(hào)通路出現(xiàn)大規(guī)模的改變,主要表現(xiàn)在以下幾方面：弓形蟲(chóng)分泌蛋白調(diào)控宿主細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo);弓形蟲(chóng)調(diào)節(jié)宿主的天然免疫和保護(hù)性免疫、抗凋亡反應(yīng)、細(xì)胞周期變化、鈣離子等相關(guān)的細(xì)胞信號(hào)通路。以上細(xì)胞信號(hào)通路的變化與弓形蟲(chóng)或宿主細(xì)胞的蛋白發(fā)生磷酸化/去磷酸化密切相關(guān),蛋白磷酸化/去磷酸化是弓形蟲(chóng)與宿主細(xì)胞間相互作用的關(guān)鍵事件。

1 在剛地弓形蟲(chóng)入侵、寄生過(guò)程中蟲(chóng)體蛋白的磷酸化

滑動(dòng)相關(guān)蛋白(gliding-associated protein,GAP)：弓形蟲(chóng)的運(yùn)動(dòng)是肌球蛋白XIV復(fù)合體驅(qū)動(dòng)的,這個(gè)復(fù)合體由肌球蛋白XIV重鏈(XIV heavy chain,MyoA)、輕鏈(myosin light chain,MLC1)、GAP45和GAP50(一種膜錨定復(fù)合物,為剛地弓形蟲(chóng)內(nèi)膜復(fù)合體的必備膜蛋白)組成,肌動(dòng)蛋白聚合是寄生蟲(chóng)活動(dòng)力與入侵宿主細(xì)胞過(guò)程的中心環(huán)節(jié)。MyoA,MLC1,和GAP45首先結(jié)合在一個(gè)可溶性的復(fù)合體中,然后再與GAP50結(jié)合,肌球蛋白XIV復(fù)合體的所有蛋白都是剛地弓形蟲(chóng)存活所必須的。研究證明這個(gè)驅(qū)動(dòng)復(fù)合體的最終組合成功取決于GAP45的磷酸化。這個(gè)蛋白的磷酸化發(fā)生在多個(gè)氨基酸殘基上,如Ser(163)和Ser(167),這兩個(gè)氨基酸的磷酸化控制著肌球蛋白XIV驅(qū)動(dòng)復(fù)合體組合的最終步驟[1]

棒狀體蛋白(Rhoptry proteins,ROPs)：弓形蟲(chóng)的侵襲力與毒力有關(guān),ROP家族被認(rèn)為是決定弓形蟲(chóng)毒力的蛋白,由棒狀體分泌,在弓形蟲(chóng)入侵宿主細(xì)胞時(shí)注入細(xì)胞質(zhì)內(nèi)。成熟、加工過(guò)的跨膜蛋白R(shí)OP4定位于弓形蟲(chóng)棒狀體上,分泌的 ROP4與泡膜有關(guān),且在受感染的細(xì)胞中發(fā)生磷酸化。ROP2也有類(lèi)似的結(jié)果。對(duì) ROP4進(jìn)一步分析表明,它在多個(gè)位點(diǎn)發(fā)生磷酸化,被感染細(xì)胞內(nèi)的 ROP4和ROP2蛋白家族成員被定位和轉(zhuǎn)錄后,在泡膜功能中發(fā)揮重要作用[2]。N-端關(guān)鍵氨基酸殘基的自磷酸化導(dǎo)致ROP18活化,ROP18活化又使 ROP2和ROP8磷酸化,當(dāng)磷酸化的N-端解除自我抑制后,ROP18被最大程度地激活。這種調(diào)節(jié)ROP激酶活性的的方式代表了弓形蟲(chóng)的毒力[3]。弓形蟲(chóng)ROP16在入侵時(shí)被注入宿主細(xì)胞胞質(zhì),然后到達(dá)細(xì)胞核,影響了不同的信號(hào)通路,如在免疫反應(yīng)啟動(dòng)過(guò)程中的關(guān)鍵分子STAT3/6及其下游的宿主細(xì)胞因子IL-12等信號(hào)通路,并與不同毒力株引起的病理變化有關(guān)[4]。

致密顆?？乖?dense granules antigen,GRA)：致密顆粒蛋白是由剛地弓形蟲(chóng)致密顆粒細(xì)胞器分泌的一類(lèi)具有免疫活性的蛋白質(zhì),約有13種包括GRA1-GRA9,三磷酸核苷水解酶的同工酶NTPaseI和NTPaseⅡ,以及兩個(gè)蛋白酶抑制劑。GRA7含有疏水和跨膜結(jié)構(gòu),可直接嵌入納蟲(chóng)泡膜,只有在宿主細(xì)胞中才能被磷酸化,入侵10min之內(nèi),GRA7存在于宿主胞質(zhì)中含有棒狀體蛋白的(包括GRA1和GRA3)繩索狀結(jié)構(gòu)上,和棒狀體蛋白 ROP2和ROP4結(jié)合,參與納蟲(chóng)泡的形成和保護(hù)蟲(chóng)體在細(xì)胞內(nèi)的存活與增殖[5]。

真核起始因子2(eukaryotic initiation factor-2α,eIF2α)：弓形蟲(chóng)eIF2α的磷酸化是對(duì)環(huán)境壓力的保守性反應(yīng),其磷酸化位點(diǎn)的突變導(dǎo)致該蛋白不被磷酸化,而使具有該突變位點(diǎn)的弓形蟲(chóng)不能適應(yīng)細(xì)胞外的生存,存活力大大下降。而且該突變蟲(chóng)體在體內(nèi)引起急性弓形蟲(chóng)病的時(shí)間也顯著延長(zhǎng)。弓形蟲(chóng)在尋找新宿主細(xì)胞的過(guò)程中需要抵抗外環(huán)境的壓力,弓形蟲(chóng)eIF2α被磷酸化,從而改善細(xì)胞外環(huán)境壓力,在細(xì)胞裂解周期中起著重要的作用,在緩殖子體內(nèi),弓形蟲(chóng)IF2α保持磷酸化狀態(tài)[6-7]。

2 在弓形蟲(chóng)入侵、寄生過(guò)程中宿主蛋白的磷酸化

2.1 弓形蟲(chóng)ROPs直接使宿主細(xì)胞蛋白磷酸化細(xì)胞免疫相關(guān)GTP酶(immunity-related GTPase,IRG)磷酸化：弓形蟲(chóng)毒力因子ROP18激酶的靶標(biāo)是一種由IFN誘導(dǎo)的IRG家族蛋白,也是小鼠抵抗弓形蟲(chóng)弱毒株的有效因子。IRG蛋白的GTP結(jié)合位點(diǎn)的活化構(gòu)象Switch I區(qū)域是抗弓形蟲(chóng)的關(guān)鍵位點(diǎn),弓形蟲(chóng)強(qiáng)毒株的ROP18激酶能使IRG蛋白磷酸化(將IRGa6的核苷酸結(jié)合結(jié)構(gòu)域上的兩個(gè)Thr殘基磷酸化),從而使IRG酶失活,抑制其在納蟲(chóng)泡膜上的聚集和降解納蟲(chóng)泡最終清除弓形蟲(chóng)的作用[8]。

信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄因子(signal transducer and activator of transcription,STAT)磷酸化：ROP16是弓形蟲(chóng)關(guān)鍵的毒力因子及宿主細(xì)胞轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子,ROP16具有酪氨酸激酶活性,通過(guò)將STAT6的關(guān)鍵酪氨酸 Tyr(641)磷酸化而誘導(dǎo)STAT6持續(xù)活化和快速活化(1分鐘以?xún)?nèi)),弓形蟲(chóng)感染細(xì)胞免疫共沉淀的實(shí)驗(yàn)證明ROP16與STAT6可相互結(jié)合,而且STAT6是ROP16的直接底物[9]。弓形蟲(chóng)入侵細(xì)胞伴隨著快速和持續(xù)的宿主細(xì)胞STAT3的活化,宿主被弓形蟲(chóng)感染后天然免疫系統(tǒng)依賴(lài)于STAT3產(chǎn)生促炎癥細(xì)胞因子。ROP16缺失的I型弓形蟲(chóng)感染的巨噬細(xì)胞體內(nèi)沒(méi)有發(fā)現(xiàn)野生型弓形蟲(chóng)誘導(dǎo)的STAT3的活化,但是IL6及IL-12 P40的表達(dá)卻顯著升高,II型蟲(chóng)株不能抑制免疫反應(yīng)是因?yàn)镽OP16的功能缺失。在哺乳動(dòng)物細(xì)胞內(nèi)過(guò)表達(dá)的ROP16導(dǎo)致STAT3磷酸化及STAT3-依賴(lài)啟動(dòng)子的強(qiáng)活化,ROP16與STAT3結(jié)合直接誘導(dǎo)這個(gè)轉(zhuǎn)錄因子的磷酸化[10]。

2.2 受弓形蟲(chóng)感染后宿主細(xì)胞蛋白的磷酸化反應(yīng)

2.2.1 調(diào)節(jié)宿主的天然免疫和保護(hù)性免疫 ①促炎癥反應(yīng)細(xì)胞因子的活化：參與免疫反應(yīng)的早期和炎癥反應(yīng)各階段的許多分子都受NF-κ B的調(diào)控,被弓形蟲(chóng)感染的哺乳動(dòng)物細(xì)胞可導(dǎo)致NF-κ B下調(diào)和I-κ B kinase(IKK)活化而使 I-κ Bα磷酸化。NF-κ B級(jí)聯(lián)信號(hào)的終止與p65/RelA磷酸化的減少有關(guān),而且磷酸化的p65/RelA可使NF-κ B進(jìn)入細(xì)胞核與DNA結(jié)合,因此在 NF-κ B級(jí)聯(lián)信號(hào)中,磷酸化的p65/RelA有可能被病原體破壞而導(dǎo)致 NF-κ B下調(diào)。與NF-κ B激活一致的是,弓形蟲(chóng)感染促進(jìn)I-κ B的磷酸化,磷酸化的I-κ B聚集在納蟲(chóng)泡膜上,這個(gè)現(xiàn)象表明有弓形蟲(chóng)本身的成分參與調(diào)節(jié)宿主NF-κ B信號(hào)通路以引起弓形蟲(chóng)感染的免疫反應(yīng)過(guò)程[11]。

胞內(nèi)弓形蟲(chóng)可使小鼠巨噬細(xì)胞(Mphi)中MAPK迅速激活,弓形蟲(chóng)引發(fā)的IL-12的生成依賴(lài)于有絲蛋白原活化蛋白激酶p38(mitogen-activated protein kinase 38,MAPK p38)。合成的p38催化位點(diǎn)抑制劑阻斷了速殖子誘導(dǎo)的p38(MAPK磷酸化,說(shuō)明弓形蟲(chóng)胞內(nèi)感染可觸發(fā)p38 MAPK自體磷酸化[12]。

②Toll樣受體(T oll like receptor,TLR)相關(guān)信號(hào)通路的活化：TLRs是生物的一種模式識(shí)別受體(pattern recognition receptor,PRR),它主要通過(guò)識(shí)別病原相關(guān)分子來(lái)啟動(dòng)免疫反應(yīng),可激活下游一系列銜接蛋白和信號(hào)分子并最終活化核因子NF-κ B,啟動(dòng)炎癥分子、細(xì)胞因子及共刺激分子的表達(dá)。而MyD88是Toll受體信號(hào)通路中的一個(gè)關(guān)鍵接頭分子,是第一個(gè)被鑒定的含 TLR結(jié)構(gòu)域的接頭蛋白分子,在傳遞上游信息和疾病發(fā)生發(fā)展中具有重要的作用。T LR與配體的結(jié)合可加強(qiáng)其本身二聚體化及與MyD88蛋白的結(jié)合。MyD88的N端片段可與絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶(IL-1receptor accessory protein kinase,IRAK)相互作用,促使IRAK的自體磷酸化。TLR與配體結(jié)合后還可通過(guò)MAPK的Jun N端激酶(Jun N-terminal kinase,JNK)激活活化蛋白1(activator protein-1,AP-1)轉(zhuǎn)錄因子家族(Jun和Fos)。核轉(zhuǎn)錄因子NF-kB和AP-1為產(chǎn)生細(xì)胞因子所必需的蛋白[13-14]。

MD-2是一種分泌蛋白,存在于TLR4細(xì)胞外區(qū)域,可以穩(wěn)定 TLR4二聚體并增強(qiáng)其功能。在LPS刺激的反應(yīng)中,CD14和 TLR4/MD-2的聯(lián)合作用可以增強(qiáng)ERK、JNK、p38MAP激酶的磷酸化,促使TNF-α(人外周血單核細(xì)胞腫瘤壞死因子)高度表達(dá)[15]。

2.2.2 調(diào)控宿主細(xì)胞抗凋亡反應(yīng)[16-17]和細(xì)胞周期性[18]：弓形蟲(chóng)在宿主體內(nèi)可引起持續(xù)感染,其在細(xì)胞內(nèi)生存的能力很大程度上取決于自身阻斷宿主細(xì)胞凋亡信號(hào)通路的能力,剛地弓形蟲(chóng)調(diào)控的幾種細(xì)胞信號(hào)通路包括 NF-κ B和 JNK。宿主轉(zhuǎn)錄因子NF-κ B在剛地弓形蟲(chóng)介導(dǎo)的抗凋亡中起著關(guān)鍵的作用,因?yàn)樵谌鄙貼F-κ B亞基p65(RelA)的細(xì)胞中不出現(xiàn)凋亡抑制的現(xiàn)象。在用凋亡刺激因子 UV和TNF-α處理時(shí)出現(xiàn)明顯的JNK活化異常,在Hela細(xì)胞中,弓形蟲(chóng)感染可抑制JNK磷酸化,但并不影響JNK激酶的活性[19]。另外,在弓形蟲(chóng)感染的宿主細(xì)胞中,PI3K(phosphoinositide 3-kinase)信號(hào)通路及其下游的效應(yīng)因子蛋白激酶B(protein kinase B,PKB/Akt)被活化,并在抗凋亡作用方面起著重要角色,PI3K的抑制劑wortmannin和LY294002可以阻斷剛地弓形蟲(chóng)誘導(dǎo)的PKB磷酸化[20]。

絲/蘇氨酸激酶mTOR(mammalian-target-ofrapamycin)是一種調(diào)節(jié)細(xì)胞合成、代謝、生長(zhǎng)及增殖的重要的因子。弓形蟲(chóng)侵入各種細(xì)胞后會(huì)快速誘導(dǎo)mTOR活化,同時(shí)被核糖體蛋白磷酸化所控制。然而與mTOR作用相關(guān)的mTOR底物4E-BP1和S6K1的磷酸化卻檢測(cè)不到,盡管S6K1磷酸化的程度很低,但感染細(xì)胞依然會(huì)在胰島素的誘導(dǎo)下使S6K1和4E-BP1產(chǎn)生磷酸化。宿主細(xì)胞的mTOR位于圍繞剛地弓形蟲(chóng)納蟲(chóng)泡的小泡上,雖然不能使4E-BP1和S6K1磷酸化,但宿主細(xì)胞內(nèi)的剛地弓形蟲(chóng)以一種mTOR-依賴(lài)的方式和速度來(lái)激活宿主細(xì)胞周期程序[18]。

2.2.3 調(diào)控宿主細(xì)胞鈣離子信號(hào)通路,從而調(diào)控弓形蟲(chóng)運(yùn)動(dòng)、入侵、和逸出細(xì)胞及宿主細(xì)胞的免疫等過(guò)程[21-22]鈣離子在剛地弓形蟲(chóng)的生活史中起著重要的作用包括免疫、運(yùn)動(dòng)、入侵、和逸出細(xì)胞等過(guò)程。在弓形蟲(chóng)入侵宿主過(guò)程中自身的滑動(dòng)結(jié)構(gòu)組分(glideosome apparatus components)被磷酸化。弓形蟲(chóng)鈣調(diào)蛋白樣結(jié)構(gòu)域蛋白激酶異構(gòu)體3(T.gondiicalmodulin-like domain protein kinase isoform 3,TgCDPKif3)酶觸反應(yīng)的賴(lài)氨酸殘基被丙氨酸代替后,磷酸化也被消除,TgCDPKif3將組蛋白 II(AS)作為一種代表性的底物以Ca2+-依賴(lài)的方式在高Ca2+濃度下使其磷酸化,在體內(nèi),TgCDPKif3能夠?qū)⒐蜗x(chóng)醛縮酶 1(T gALD1)磷酸化,TgCDPKif3通過(guò)將滑動(dòng)復(fù)合體磷酸化參與弓形蟲(chóng)的運(yùn)動(dòng)[23]。

然而宿主細(xì)胞的鈣離子是弓形蟲(chóng)誘導(dǎo)MAPK、LPS(lipopolysaccharide)及CpG的活化,IL-12合成必需的,用弓形蟲(chóng)處理或LPS誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞內(nèi)的鈣離子增強(qiáng)了MAPK的磷酸化,由弓形蟲(chóng)誘導(dǎo)的并且依賴(lài)鈣離子的PKC?和PKC?的急性活化反應(yīng)是宿主的MAPK活化及IL-12產(chǎn)生所必需的,因而鈣離子和PKC都是剛地弓形蟲(chóng)感染引起宿主細(xì)胞產(chǎn)生天然免疫反應(yīng)的關(guān)鍵因素[21]。

綜上所述,蛋白質(zhì)的磷酸化與去磷酸化這個(gè)可逆的過(guò)程保證了弓形蟲(chóng)與宿主細(xì)胞對(duì)彼此間細(xì)胞信號(hào)的持續(xù)反應(yīng),在剛地弓形蟲(chóng)入侵和寄生于宿主的過(guò)程中,通過(guò)自身蛋白磷酸化和去磷酸化以及誘導(dǎo)宿主細(xì)胞蛋白的磷酸化/去磷酸化,對(duì)宿主細(xì)胞進(jìn)行精細(xì)的整體的調(diào)控,在誘發(fā)及抑制宿主免疫反應(yīng)之間保持一個(gè)精細(xì)的平衡,保證弓形蟲(chóng)在宿主細(xì)胞內(nèi)安全地生存增殖,并有機(jī)會(huì)傳播給終末宿主[24]。在宿主細(xì)胞被感染的過(guò)程中,宿主細(xì)胞信號(hào)傳遞發(fā)生廣泛的變化,包括細(xì)胞信號(hào)蛋白表達(dá)水平的改變及蛋白的磷酸化和去磷酸化。這些細(xì)胞信號(hào)的調(diào)控在弓形蟲(chóng)入侵、寄生及與弓形蟲(chóng)-宿主相互關(guān)系中起著非常重要的作用。

[1]Gilk SD,Gaskins E,Ward GE,et al.GAP45 phosphorylation controls assembly of theToxoplasma myosinXIV complex[J].Eukaryot Cell,2009,8(2)：190-6.

[2]Carey KL,Jongco AM,Kim K,et al.TheToxoplasma gondiirhoptry protein ROP4 is secreted into the parasitophorous vacuole and becomes phosphorylated in infected cells[J].Eukaryot Cell,2004,3(5)：1320-30.

[3]Qiu W,Wernimont A,Tang K,et al.Novel structural and regulatory features of rhoptry secretory kinases inToxoplasmagondii[J].EM BO J,2009,28(7)：969-79.

[4]Saeij JP,Coller S,Boy le JP,et al.Toxoplasma co-opts host gene expression by injection of a polymorphic kinase homologue.Nature,2007,445(7125)：324-7.

[5]Dunn JD,Ravindran S,Kim SK,et al.TheToxoplasma gondiidense granule protein GRA7 is phospho rylated upon invasion and forms an unexpected association with the rhoptry proteins ROP2 and ROP4[J].Infect Immun,2008 Dec,76(12)：5853-61.

[6]Joyce BR,Queener SF,Wek RC,et al.Phosphorylation of eukaryotic initiation facto r-2{alpha}promotes the extracellular survival of obligate intracellular parasite Toxoplasma gondii[J].Proc Natl Acad Sci U S A,2010,107(40)：17200-5.

[7]Narasimhan J,Joyce BR,Naguleswaran A,et al.Translation regulation by eukaryotic initiation factor-2 kinases in the development of latent cysts inToxoplasma gondii[J].J Biol Chem,2008,283(24)：16591-601.

[8]Steinfeldt T,K nen-Waisman S,Tong L,et al.Phosphorylation of mouse immunity-related GT Pase(IRG)resistance proteins is an evasion strategy for virulentToxoplasma gondii[J].PLoS Biol,2010,8(12)：e1000576.

[9]Ong YC,Reese ML,Boothroyd JC.Toxoplasma rhoptry protein 16(ROP16)subverts host function by direct tyrosine phosphorylation ofST AT6[J].J Biol Chem,2010,285(37)：28731-28740.

[10]Yamamoto M,Standley DM,Takashima S,et al.A single polymorphic amino acid onToxoplasma gondiikinase ROP16 determines the direct and strain-specific activation of Stat3[J].J Exp Med,2009,206(12)：2747-60.

[11]Shapira S,Harb OS,Margarit J,et al.Initiation and termination of NF-kappaB signaling by the intracellular protozoan parasiteToxoplasma gondii[J].J Cell Sci,2005,118(Pt 15)：3501-8.

[12]Kim L,Del Rio L,Butcher BA,et al.p38 MAPK autophosphorylation drives macrophage IL-12 production during intracellular infection[J].J Immunol,2005 Apr 1,174(7)：4178-84.

[13]Egan CE,Sukhumavasi W,Butcher BA,et al.Functional aspects of Toll-like receptor/MyD88 signalling during protozoan infection：focus onToxoplasma gondii[J].Clin Exp Immunol,2009,156(1)：17-24

[14]Akashi S,Ogata H,Kirikae F,et al.Regulatory roles for CD14 and phosphatidy linosito in the signaling via T oll-like receptor 4-M D-2[J].Biochem Biophys Res Commun,2000,268：172-2177.

[15]Lang C,G ross U,L der CG.Subversion of innate and adaptive immune responses byToxoplasma gondii[J].Parasitol Res,2007,100(2)：191-203.

[16]Lalibert J,Carruthers VB.Host cell manipulation by the human pathogenToxoplasma gondii[J].Cell M ol Life Sci,2008,65(12)：1900-15.

[17]Hippe D,Ly tovchenko O,Schmitz I,et al.Fas/CD95-mediated apoptosis of ty pe II cells is blocked byToxoplasma gondiiprimarily via interference with the mitochondrial amplification loop[J].Infect Immun,2008,76(7)：2905-12.

[18]Wang Y,Weiss LM,Orlofsky A.Intracellular parasitism withToxoplasma gondiistimulates mammalian-target-of-rapamy cindependent host cell g rowth despite impaired signalling to S6K1 and 4E-BP1[J].Cell Microbiol,2009,11(6)：983-1000.

[19]Carmen JC,Southard RC,Sinai AP.The complexity of signaling in host-pathogen interactions revealed by theToxoplasma gondii-dependent modulation of JNK phosphorylation[J].Ex p Cell Res,2008,314(20)：3724-36.

[20]Kim L,Denkers EY.Toxoplasma gondiitriggers Gi-dependent PI 3-kinase signaling required for inhibition of host cell apoptosis[J].J Cell Sci,2006,119(Pt 10)：2119-26.

[21]Masek KS,Fiore J,Leitges M,et al.Host cell Ca2+and protein kinase C regulate innate recognition ofToxoplasma gondii[J].J Cell Sci,2006,119(Pt 21)：4565-73.

[22]Lourido S,Shuman J,Zhang C,et al.2010.alcium-dependent protein inase 1 is an essential regulator of exocy tosis inToxoplasma[J].Nature,465(7296)：359-62.

[23]Sugi T,Kato K,Kobayashi K,et al.Molecular analy ses ofToxoplasma gondiicalmodulin-like domain protein kinase isoform 3[J].Parasitol Int,2009,58(4)：416-23.

[24]Peng HJ,Chen XG,Lindsay D.Competene,Compromise A nd Concomitance：Reaction Of The Host Cell ToToxoplasma gondiiInfection And Development[J].J Parasitol,2011,11.E-pub.