李英霞， 韓 莉， 藏 曄， 武玉婷

(1.山東省中醫(yī)藥研究院，山東 濟(jì)南250014;2.淄博市中心醫(yī)院，山東淄博25500)

香附異名莎草根、香附子，是中醫(yī)常用的中藥之一，尤其在婦科用藥中使用廣泛，《本草綱目》稱之為“氣病之總司，女科之主帥”［1］。其植物來源為莎草科植物莎草Cyperus rotundus L.的干燥根莖，味辛、微苦、性甘、平。能理氣解郁，調(diào)經(jīng)止痛。治療肝郁氣滯，胸肋脹痛，消化不良，月經(jīng)不調(diào)，經(jīng)閉育經(jīng)之癥［2］。香附歷代炮制方法甚多，目前臨床常用的炮制飲片多為醋炙香附，2010版《中國藥典》只收載了醋香附一種炮制規(guī)格［3］。香附中主要化學(xué)成分有揮發(fā)油類、三萜類、生物堿類、黃酮類、甾醇類等［4-5］。以往香附炮制方面的研究多側(cè)重于揮發(fā)性成分，如炮制對揮發(fā)油及α-香附酮含量的影響等［6-10］，對其它化學(xué)成分影響研究尚未見報(bào)道。近年來，對香附非揮發(fā)性成分的研究逐漸得到重視，國外報(bào)道香附總黃酮和乙酸乙酯提取物或水醇提取物均具有較強(qiáng)的藥理活性［11-12］。本研究采用紫外分光光度法，對醋炙前后香附飲片中總黃酮的含量進(jìn)行了測定，旨在全面探討香附炮制的目的，為揭示香附炮制的科學(xué)內(nèi)涵提供理論依據(jù)。

1 儀器與材料

UV-265FW紫外可見分光光度計(jì)(日本島津)，XS205DU電子天平(上海梅特勒—托里多儀器有限公司)。蘆丁對照品(購于中國藥品生物制品檢定所，批號(hào)10008-200306，供含量測定用)。香附藥材購于山東泰安、濰坊及浙江、河南等7個(gè)產(chǎn)地，經(jīng)山東省中醫(yī)藥研究院李英霞副研究員鑒定為莎草科植物莎草Cyperus rotundus L.的干燥根莖。龍門米醋(北京王致和味滋康食品有限公司)，總酸≥3.95 g/100 mL。其余試劑均為分析純。

2 炮制方法

生品香附:取香附藥材，除去雜質(zhì)，以水浸潤后，切片，干燥。

醋炙香附:取香附切片適量，加米醋拌勻，潤悶1 h至吸盡，置鍋中文火炒至微帶焦斑，取出，攤晾。

3 含量測定

采用紫外分光光度法對香附醋炙前后總黃酮含量進(jìn)行了測定。

3.1 對照品溶液的制備 精密稱取蘆丁對照品適量，置100 mL量瓶中，加95%的乙醇溶解，并稀釋至刻度，搖勻，制成每1 mL含0.100 mg的對照品溶液。

3.2 供試品溶液的制備 取香附粉末1 g，精密稱定，置三角瓶中，加70%乙醇25 mL，80℃水浴回流提取2次，每次2 h，放冷，過濾，濾液合并，減壓回收乙醇，分別以石油醚(30℃ ～60℃)萃取以除去揮發(fā)油，再以乙酸乙酯萃取6次(15、15、15、15、10、10 mL)，減壓回收乙酸乙酯，殘?jiān)?70% 乙醇溶解，定容于10 mL量瓶中，作為供試品溶液。

3.3 波長的選擇 取對照品溶液2 mL，供試品溶液2 mL，在5%亞硝酸鈉溶液0.3 mL存在的堿性條件下，經(jīng)硝酸鋁顯色后，以試劑為空白參比液，在400～600 nm波長范圍內(nèi)掃描，結(jié)果對照品與樣品均在507 nm左右有最大吸收，故確定測定波長為507 nm。

3.4 線性關(guān)系考察 精密量取蘆丁對照液(質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.100 mg/mL)0.3、0.5、3、6、9、12、15 mL 分別置于 10 mL 量瓶中，分別加5%亞硝酸鈉0.3 mL，搖勻，靜置6 min，再加10%的硝酸鋁0.3 mL，搖勻，靜置6 min，再加4%的氫氧化鈉4 mL，用水稀釋至刻度，搖勻，靜置12 min。以試劑作為空白參比液，于507 nm波長處測吸光度。以濃度(C)為橫坐標(biāo)，以吸光度(A)為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并進(jìn)行回歸分析，得回歸方程為:A=0.084 7C-0.004 8，相關(guān)系數(shù)r=0.999 8。結(jié)果表明，蘆丁在3.0 μg/mL ～150.0 μg/mL 范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

3.5 精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性試驗(yàn)及回收率試驗(yàn) 詳見有關(guān)文獻(xiàn)［13］。

3.6 樣品測定 取香附粉末1 g，精密稱定，按3.2項(xiàng)下方法制備樣品溶液，按3.1項(xiàng)下方法制備對照品溶液，精密吸取0.5 mL供試品溶液于10 mL量瓶中，加顯色劑顯色，以試劑為空白參比液，于507 nm處測定吸光度，計(jì)算含量。結(jié)果見表1。

表1 不同地區(qū)生品香附與醋炙香附總黃酮含量測定結(jié)果(n=3)

(續(xù)表1)

4 討論

4.1 在測定香附總黃酮過程中，發(fā)現(xiàn)揮發(fā)油對測定有一定影響，未去除揮發(fā)油的溶液加亞硝酸鈉、硝酸鋁和氫氧化鈉顯色時(shí)，會(huì)產(chǎn)生紅色絮狀沉淀，影響吸光度的測定。作者對比了兩種去除揮發(fā)油方法的顯色效果，即先以石油醚索式提取脫除和以石油醚萃取去除，結(jié)果兩種方法效果基本一致，故選取了后一種去除方法。

4.2 不同產(chǎn)地香附生品和醋炙品中總黃酮含量均較高，其中河南社旗的最高，生品為2.33%，醋炙品為2.64%。大多數(shù)地區(qū)含量在1.00%以上。

4.3 各地香附經(jīng)醋炙后總黃酮含量均明顯升高，按炮制后收率計(jì)算，多數(shù)升高率在12.45% ～19.84%，說明醋炙能增加香附有效部位總黃酮的溶出。本研究從非揮發(fā)性成分方面為探討香附醋炙的目的提供了一定參考。

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