朱偉峰

（廣東省惠東縣人民醫(yī)院，廣東 惠州 516300）

IgA腎病是以血尿和彌漫性腎小球系膜區(qū)IgA沉積為特征的腎小球疾病，是兒童腎小球疾病中最常見類型，也是導(dǎo)致慢性腎衰的重要原因之一[1]。腎小球內(nèi)皮細(xì)胞作用是維護(hù)腎小球血管壁的完整性。腎小球內(nèi)皮細(xì)胞的損傷與腎小球的硬化密切相關(guān)[2]。血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）通過(guò)與內(nèi)皮細(xì)胞上特異性受體VEGF2R2結(jié)合發(fā)揮效應(yīng)，其作用為增強(qiáng)內(nèi)皮細(xì)胞的通透性同時(shí)促進(jìn)其增生和遷移。本研究采用免疫組織化學(xué)法觀察IgA腎病患兒腎組織中的VEGF和flk21的表達(dá)，來(lái)說(shuō)明VEGF和VEGF2R2（flk21）在IgA腎病的病理機(jī)制中發(fā)揮的作用。

1 資料與方法

1.1 對(duì)象

IgA腎病患兒21例，男童12例，女童9例，年齡3～15歲，平均年齡7.8歲。所有患兒均行腎活檢術(shù)，腎組織病理報(bào)告符合IgA腎病診斷標(biāo)準(zhǔn)。根據(jù)腎組織病理改變的程度分為輕、中、重3組。每組7例。

1.2 免疫組織化學(xué)染色

所有腎活檢組織行VEGF和flk21染色，步驟如下：將組織蠟塊切為厚度2μm的切片，脫蠟后用3%的過(guò)氧化氫阻斷過(guò)氧化物酶5min。經(jīng)抗原修復(fù)10min后血清封閉20min。再加入兔抗人VEGF多抗和小鼠抗人flk21單抗，在4℃下孵育過(guò)夜。然后經(jīng)PBS漂洗完成后加入由生物素標(biāo)記的山羊抗兔、山羊抗小鼠IgG抗體，室溫孵育20min。PBS漂洗后，加入辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的鏈霉卵白素，室溫孵育20min。再經(jīng)PBS漂洗后DAB2H2O2顯色，蘇木素復(fù)染，最后脫水、透明、中性樹膠封片?？瞻讓?duì)照組不加入一抗，其他步驟同上。

1.3 觀察指標(biāo)

每個(gè)切片在400倍視野下隨機(jī)選取10個(gè)腎小球，計(jì)算VEGF和flk21陽(yáng)性面積所占腎小球面積百分比，取其均值為結(jié)果指標(biāo)。然后計(jì)算每個(gè)腎小球內(nèi)flk21陽(yáng)性血管袢數(shù)，也取其均值為衡量腎小球微血管密度的結(jié)果指標(biāo)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

應(yīng)用SPSS13.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，采用單因素方差分析和直線相關(guān)分析方法，數(shù)值以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。

2 結(jié) 果

2.1 小兒IgA腎病VEGF、flk21的表達(dá)分布及相關(guān)分析

中度病變組腎小球內(nèi)VEGF和flk21在表達(dá)最多，在重度病變組表達(dá)最少，兩組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。重度病變組腎小球微血管密度最少（P＜0.05），腎小球內(nèi)VEGF表達(dá)隨腎小球微血管密度減少而降低（P＜0.05），見表1。

2.2 免疫組織化學(xué)結(jié)果與臨床指標(biāo)的相關(guān)分析

輕、中度病變組VEGF、flk21的表達(dá)與患者24h尿蛋白定量呈正相關(guān)（r=0.431，P＜0.05）；重度病變組與患兒24h尿蛋白定量無(wú)相關(guān)性。3組VEGF、flk21的表達(dá)與患兒的血壓、血肌酐水平無(wú)相關(guān)性。

3 討 論

表1 21例IgA腎病患兒免疫組織化學(xué)結(jié)果分析（±s）

表1 21例IgA腎病患兒免疫組織化學(xué)結(jié)果分析（±s）

注：*與其他兩組相比P＜0.05

組別 VEGF （%） flk21 （%） 微血管密度/每腎小球輕度 13.71 ±1.8 23.64±5.1 27.32±2.1中度 16.93 ±2.4 26.17±4.3 36.54±3.2重度 9.85 ±2.16* 16.82±2.6* 14.77±2.3*

IgA腎病的特征是免疫球蛋白A沉積在腎小球內(nèi)。其病理表現(xiàn)多樣，幾乎表現(xiàn)所有原發(fā)性腎小球腎病的病理變化[3]。研究顯示，VEG可減少腎小球基底膜陰離子數(shù)，并誘導(dǎo)腎小球內(nèi)皮細(xì)胞小窗形成，其通過(guò)受體flk21發(fā)揮作用[4]。本研究結(jié)果顯示，中度病變組腎小球內(nèi)VEGF和flk21在表達(dá)最多，在重度病變組表達(dá)最少，兩組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。FOSTER等[5]發(fā)現(xiàn)，正常情況下，VEGF通過(guò)自分泌方式調(diào)節(jié)足細(xì)胞內(nèi)鈣離子平衡，提高腎小球足細(xì)胞的存活率。病理情況下，VEGF介導(dǎo)單核吞噬細(xì)胞活化，大量毒性物質(zhì)造成足細(xì)胞的損傷和死亡[6]。本研究結(jié)果顯示，在輕、中度病變，IgA腎病患兒24h尿蛋白定量與腎小球VEGF和flk21的表達(dá)呈正相關(guān)（r=0.497，P＜0.05），表明VEGF增加腎小球基底膜對(duì)血漿蛋白通透性，促使蛋白尿的形成。而在重度病變，24h尿蛋白定量與VEGF和flk21的表達(dá)無(wú)明顯相關(guān)性，分析其原因可能是隨著病情發(fā)展，膜屏障被破壞。本研究結(jié)果表明重度病變時(shí)腎小球內(nèi)VEGF表達(dá)最少并且微血管密度也最少，提示VEGF減少導(dǎo)致的腎小球內(nèi)皮細(xì)胞增殖修復(fù)能力降低。綜上所述，本研究表明VEGF在小兒IgA腎病的發(fā)病進(jìn)展過(guò)程中起關(guān)鍵作用，其作用機(jī)制可能包括內(nèi)皮細(xì)胞通透性增強(qiáng)、血管生成障礙、細(xì)胞外基質(zhì)合成增多等。

[1]關(guān)鳳軍,董晨,賀敏敏,等.羅格列酮對(duì)IgA腎病小鼠腎小球核轉(zhuǎn)錄因子-κB和活化蛋白-1表達(dá)的影響[J].徐州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2010,30(12)：834-839.

[2]趙慧娟,孫東立,張林霞,等.藥物干預(yù)對(duì)IgA腎病患者尿液中結(jié)締組織生長(zhǎng)因子水平的影響及臨床意義[J].中國(guó)全科醫(yī)學(xué),2010,13(33)：3754-3756.

[3]張麗萍,譚會(huì)斌,邢玲玲,等.IgA腎病足細(xì)胞損傷中的血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子表達(dá)及臨床意義[J].中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志,2010,20(14)：2162-2165.

[4]潘利敏,王月華,邊東,等.腎炎寧對(duì)IgA腎病血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子的影響[J].中國(guó)中醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)雜志,2010,16(2)：135-137.

[5]袁曙光,孫永超,劉映紅,等.IgA腎病腎活檢組織中血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子的測(cè)定及意義[J].廣東醫(yī)學(xué),2008,29(10)：1688-1690.

[6]李華,馮劍.IgA腎病患者血與尿血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子水平變化的臨床意義[J].中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合腎病雜志,2004,5(11)：642-644.