曾曉芳，黃 顯，游楓慧

(福建醫(yī)科大學(xué)附屬協(xié)和醫(yī)院藥學(xué)部，福建 福州 350001)

木芙蓉根提取物的體外抑菌作用研究

曾曉芳，黃 顯，游楓慧

(福建醫(yī)科大學(xué)附屬協(xié)和醫(yī)院藥學(xué)部，福建 福州 350001)

目的比較木芙蓉根不同提取物的體外抑菌作用。方法采用不同溶劑提取藥材，用連續(xù)稀釋法進(jìn)行體外抑菌活性研究。結(jié)果木芙蓉根不同提取物對(duì)金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、銅綠假單胞菌和表皮葡萄球菌均有一定抑制作用。結(jié)論木芙蓉根乙酸乙酯提取物抑菌作用最強(qiáng)。

木芙蓉根;提取物;抑菌作用

錦葵科木槿屬植物木芙蓉(Cottomrose Hibiscus)性味微辛、涼，具有清熱解毒、消腫排膿、涼血止血之功效、內(nèi)用治療肺熱咳嗽、月經(jīng)過多、白帶，外用治癰腫瘡癤、乳腺炎、淋巴結(jié)炎、腮腺炎、燒燙傷、毒蛇咬傷、跌打損傷[1]。木芙蓉在我國(guó)分布廣泛，藥材資源豐富，近年來對(duì)其研究日益增多，尤其是在臨床應(yīng)用方面有了較大發(fā)展[2]。目前關(guān)于木芙蓉葉的藥理作用研究較多，但尚未發(fā)現(xiàn)對(duì)木芙蓉根的研究報(bào)道。本試驗(yàn)中，選取木芙蓉根，用不同的試劑對(duì)其進(jìn)行提取，并觀察各自的抑菌效果，旨在為木芙蓉植物資源的利用與開發(fā)提供一定的依據(jù)，報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 材料

儀器和試劑:YXQ－LS－50S1型立式壓力蒸汽滅菌器(上海博迅實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠);DHP 2000型電熱恒溫培養(yǎng)箱(天津市華北實(shí)驗(yàn)有限公司);水平層流凈化工作臺(tái)(蘇州潔凈技術(shù)研究所制造);RE－52AA型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(上海亞榮生化儀器廠)。瓊脂粉和蛋白胨(廣州海洋生物有限公司);化學(xué)試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。

藥材:木芙蓉根購(gòu)自福建古田，按傳統(tǒng)方法加工干燥后粉碎，備用。

菌種:金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)ATCC29213、大腸埃希菌(Escherichia coli)ATCC29523、銅綠假單胞菌(Pseudomonas aeruginosa)ATCC27853、表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis)由福建醫(yī)科大學(xué)附屬協(xié)和醫(yī)院微生物實(shí)驗(yàn)室提供。

1.2 方法

1.2.1 營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基制備

按2005年版《中國(guó)藥典(一部)》規(guī)定比例加入適量瓊脂，調(diào)節(jié)其 pH，使滅菌后 pH 為(7.2±0.2)，在 115 ℃滅菌 30 min，無菌操作倒入平板，培養(yǎng)過夜，無菌生長(zhǎng)，備用。

1.2.2 菌液制備

取試管若干，裝入融化的培養(yǎng)基滅菌后擺成斜面。在無菌條件下用劃線法將供試菌種移接入相應(yīng)的斜面培養(yǎng)基上，每個(gè)菌種活化多支，放入培養(yǎng)箱中，37℃下培養(yǎng)18～24 h。取出，置4℃冰箱中冷藏。取出活化好的菌種，無菌操作，用適量的滅菌生理鹽水洗入已滅菌的干凈試管中，根據(jù)試驗(yàn)的需要采用比濁法配制成含菌數(shù)為107～108CFU/mL的菌懸液，備用。

1.2.3 供試液制備

醇提物制備:精確稱取木芙蓉根粉末100.57 g，置索氏提取器中。用8倍量70%乙醇在85℃左右水浴中冷凝回流3 h，過濾，收集濾液?；厥盏臑V渣用6倍量70%乙醇以相同方法提取2次，每次2 h，收集濾液。合并3次收集的濾液，置旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中進(jìn)行濃縮，溫度控制在65℃左右，濃縮至約150 mL時(shí)將提取物移至蒸發(fā)皿，置水浴上繼續(xù)蒸發(fā)至膏狀，再置干燥箱中，干燥至恒重。

萃取物制備:取一定量提取物，配制成約100 mL的混懸液，加入石油醚除去色素、油脂等雜質(zhì)。萃取多次，直到石油醚層透亮且顏色不再變淺為止。將水相均分成2份，分別用乙酸乙酯、正丁醇各萃取3次，每次萃取劑的用量為溶液量的1.5倍。收集萃取的溶液，置旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上濃縮，濃縮至約100 mL時(shí)移至蒸發(fā)皿，置水浴上繼續(xù)蒸發(fā)至膏狀，再置干燥箱中，干燥至恒重。

水提物制備:精確稱取木芙蓉根粉末100.21 g，用8倍量的蒸餾水煎煮3 h，過濾，收集濾液?；厥盏臑V渣用6倍量的蒸餾水煎煮2次，每次2 h，收集濾液。合并3次收集的濾液，置旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中進(jìn)行濃縮，濃縮至約150 mL時(shí)將提取物移至蒸發(fā)皿，置水浴上繼續(xù)蒸發(fā)至膏狀，再置干燥箱中，干燥至恒重。

供試液制備:取適量木芙蓉根乙醇提取物、乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物及水提物，用滅菌注射用水配制成含生藥1 g/mL的溶液，滅菌備用。臨用前再用滅菌注射用水稀釋成質(zhì)量濃度為1 000，500，250，125，62.5，31.25，15.62，7.81 g/L 的溶液。

1.2.4 抑菌試驗(yàn)[3－4]

吸取上述各種藥物溶液3 mL，置無菌平皿中。將營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基加熱融化，加入12 mL培養(yǎng)基于無菌平皿中迅速混勻、冷卻，制成含不同質(zhì)量濃度藥 物 (200，100，50，25，12.5，6.25，3.125，1.562 g/L)的營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板，用筆將藥物平板分為4個(gè)區(qū)，分別用接種環(huán)將上述試驗(yàn)菌點(diǎn)種于藥物平板上，于37℃恒溫培養(yǎng)16～18 h。以不加提取物溶液的培養(yǎng)基為陰性對(duì)照。以每種藥物對(duì)4種菌分別做3次重復(fù)試驗(yàn)。觀察藥物對(duì)測(cè)試菌生長(zhǎng)的抑制作用，記錄最低抑菌濃度(MIC)值。

2 結(jié)果

結(jié)果見表1及表2。

表1 木芙蓉根各提取物抑菌作用試驗(yàn)結(jié)果

表2 木芙蓉根各提取物對(duì)試驗(yàn)菌的 MIC值(g/L)

3 討論

固體培養(yǎng)基連續(xù)稀釋法可同時(shí)測(cè)定大批菌株的MIC，且不受藥物顏色及混濁度的影響，適合于中藥制劑體外抗菌活性測(cè)定。

本試驗(yàn)提取所得的藥液為顏色較深的中草藥制劑，若采用試管法則會(huì)因溶液顏色深而導(dǎo)致觀察結(jié)果不準(zhǔn)確，若采用濾紙片法則會(huì)因中草藥擴(kuò)散慢、抑菌作用弱而無法得到準(zhǔn)確的抑菌質(zhì)量濃度。為避免這些缺陷，因此，本試驗(yàn)利用平板法。平板法穩(wěn)定，比較適合于中草藥抑菌濃度的測(cè)定，但其缺點(diǎn)是無法測(cè)定提取物的最低殺菌濃度(MBC)。

本研究結(jié)果顯示，木芙蓉根提取物對(duì)金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、銅綠假單胞菌、大腸埃希菌都有一定的抑制作用;木芙蓉根醇提取物和各萃取物對(duì)金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌的抑制作用均優(yōu)于銅綠假單胞菌和大腸埃希菌，且在藥物質(zhì)量濃度相同時(shí)，木芙蓉根乙酸乙酯萃取物對(duì)上述4種細(xì)菌的抑制作用最強(qiáng)，木芙蓉乙醇提取物與木芙蓉根正丁醇萃取物的抑菌作用相似，而木芙蓉根水提物的抑菌作用最弱。

[1]中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)·中藥材(第1冊(cè))[M].廣州:廣東科學(xué)技術(shù)出版社，1992:16.

[2]黃初貴，雷秀霞.木芙蓉軟膏治療癤、癰539例療效觀察[J].中草藥，1987，18(5):10.

[3]邊才苗.白花蛇舌草提取物的抑菌作用研究[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2005，16(10):991.

[4]蔡宏亞，王澤平，何寧先，等.連續(xù)稀釋法研究淡紅忍冬體外抑菌作用[J].臨床和實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2007，6(9):155.

Study on Bacteriostasis In Vitro of Extracts from Cottomrose Hibiscus Roots

Zeng Xiaofang，Huang Xian，You Fenghui
(Department of Pharmacy，Affiliated Union Hospital，F(xiàn)ujian Medical University，F(xiàn)uzhou，F(xiàn)ujian，China350001)

ObjectiveTo evaluate the bacteriostasis in vitro of extracts from Cottomrose Hibiscus roots.Methods The different solvents were adopted to extract Cottomrose Hibiscus roots.The bacteriostatic activities were tested by serial dilution method.Results The different extracts from Cottomrose Hibiscus roots had a certain inhibiting effects on the growth of Staphylococcus aureus，Escherichia coli，Pseudomonas aeruginosa and Staphylococcus epidermidis.Conclusion The antibacterial activity of the extract ethyl acetate(EtOAc)from Cottomrose Hibiscus roots is most powerful.

Cottomrose Hibiscus roots;extract;anti－bacterial activity

R285.5;R282.71

A

1006－4931(2011)02－0029－02

曾曉芳(1975－)，女，福建古田人，主管藥師，碩士研究生，從事臨床藥學(xué)工作，(電子信箱)zxfadr@126.com。

2010－01－14)