李文超,徐江,張惠

(1石河子大學(xué)醫(yī)學(xué)院,石河子832002;2石河子大學(xué)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院,石河子832008)

成釉細(xì)胞瘤中Survivin的表達(dá)與影像學(xué)分型的關(guān)系

李文超1,徐江2,張惠1

(1石河子大學(xué)醫(yī)學(xué)院,石河子832002;2石河子大學(xué)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院,石河子832008)

為探討成釉細(xì)胞瘤中Survivin的表達(dá)和臨床意義,以及Survivin的表S達(dá)與成釉細(xì)胞瘤影像學(xué)分型之間的關(guān)系。采用免疫組化S-P法檢測(cè)60例成釉細(xì)胞瘤患者和22例正常人口腔粘膜中Survivin蛋白的表達(dá),同時(shí)收集患者的手術(shù)前X線片并分型,結(jié)合Survivin蛋白在成釉細(xì)胞瘤中表達(dá)的結(jié)果進(jìn)行分析。結(jié)果顯示:60例成釉細(xì)胞瘤中Survivin的陽(yáng)性表達(dá)率為71.67%(43/60),22例正常口腔粘膜中Survivin表達(dá)率為18.18%(4/22),二者間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。單房型成釉細(xì)胞瘤中Survivin的表達(dá)率為50%,較多房型(83.87%)和蜂窩型成釉細(xì)胞瘤(100%)低(P<0.01),多房型成釉細(xì)胞瘤和蜂窩型成釉細(xì)胞瘤中Survivin的表達(dá)率無(wú)差異(P>0.05)。由此可知,Survivin可能作為成釉細(xì)胞瘤診斷的一項(xiàng)重要指標(biāo);單房型成釉細(xì)胞瘤的凋亡抑制能力及細(xì)胞增殖能力較多房型和蜂窩型低。

Survivin;免疫組化;成釉細(xì)胞瘤;影像學(xué)

腫瘤發(fā)生、發(fā)展的關(guān)鍵是細(xì)胞增殖和凋亡之間的平衡失調(diào),在這一過(guò)程中,細(xì)胞凋亡抑制起著重要作用。此方面研究較多的是凋亡抑制蛋白(The inhibitor of apoptosis,IAP)家族,該家族主要通過(guò)桿狀病毒 IAP重復(fù)序列(Baculoviral IAP repeats,BIR)與凋亡酶(Caspase)結(jié)合,抑制其活性,從而抑制細(xì)胞凋亡。Survivin又名生存素,是 IAP家族中最小的成員。僅含有單一的BIR及其后端的長(zhǎng)a-螺旋結(jié)構(gòu),沒(méi)有其它可識(shí)別的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)域,具有抑制細(xì)胞凋亡和調(diào)節(jié)細(xì)胞有絲分裂的雙重功能。

成釉細(xì)胞瘤(Ameloblastoma,AB)是來(lái)自牙源性上皮組織的良性多形性腫瘤,約占牙源性腫瘤的63.2%,占口腔頜面部腫瘤的3.05%。該腫瘤具有局部侵襲性,存在較高的復(fù)發(fā)率。本研究主要探討Survivin在成釉細(xì)胞瘤中的表達(dá)和臨床意義及其與成釉細(xì)胞瘤影像學(xué)分型之間的關(guān)系,為成釉細(xì)胞瘤的早期診斷及手術(shù)治療等方面提供參考依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象

60例成釉細(xì)胞瘤(其中男36例,女24例,平均年齡(31.25±16.49)歲)患者和22例正常人口腔粘膜(其中男10例,女12例,平均年齡(43.73±22.15)歲)作對(duì)照,同時(shí)收集相對(duì)應(yīng)的成釉細(xì)胞瘤患者手術(shù)前X線片并根據(jù)馬緒臣[1]主編的《口腔頜面醫(yī)學(xué)影像診斷學(xué)》中成釉細(xì)胞瘤X線分型的診斷標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行分型。單房型24例,多房型31例,蜂窩型5例。

1.2 研究方法

標(biāo)本經(jīng)固定包埋后切片,采用鏈霉菌素-生物素(S-P)免疫組化技術(shù),一抗為濃縮型 Survivin兔抗人多克隆抗體,購(gòu)于美國(guó) ZYMED公司,工作濃度為1∶50。S-P免疫組化試劑盒通用型 SP-9000 kit購(gòu)于丹麥DA KO公司。實(shí)驗(yàn)過(guò)程按試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行,PBS代替一抗作陰性對(duì)照。

1.3 結(jié)果判定

圖1 Survivin 在正常口腔粘膜中的表達(dá)( ×100)Fig. 1 The expre ssion of Survivin in normal oral mucosa ( ×100)

免疫組織化學(xué)染色結(jié)果參照Soslow[2]的三個(gè)參數(shù)(即陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)、染色強(qiáng)度和兩者乘積即為積分)的半定量計(jì)數(shù)方法:著色強(qiáng)度記分:無(wú)色-0分(陰性),淺黃色-1分(弱陽(yáng)性),棕黃色-2分(中度陽(yáng)性),棕褐色-3分(強(qiáng)陽(yáng)性)。每張切片光鏡下隨機(jī)觀察5個(gè)高倍視野(×40),計(jì)數(shù)50個(gè)細(xì)胞,記錄陽(yáng)性細(xì)胞的百分率,記分標(biāo)準(zhǔn):0分(無(wú)陽(yáng)性細(xì)胞),1分(陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)占1%～10%),2分(陽(yáng)性細(xì)胞占11%～50%),3分(陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)占51%～80%),4分(陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)占81%～100%)。著色強(qiáng)度記分與陽(yáng)性細(xì)胞所占百分率的評(píng)分乘積則為最后總積分:0分(-),1～4分(+),5～8分 (++),9～12分(+++)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

利用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件做數(shù)據(jù)處理,采用χ2檢驗(yàn)或Fisher確切概率法進(jìn)行分析,P<0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 Survivin蛋白在正?？谇火つず统捎约?xì)胞瘤中的表達(dá)

Survivin蛋白陽(yáng)性定位于細(xì)胞漿和/或細(xì)胞核,出現(xiàn)黃色或棕黃色顆粒。在正常口腔黏膜組織的上皮基底層細(xì)胞核中可見(jiàn)少量表達(dá)(圖1),在成釉細(xì)胞瘤中大多呈輕、中度陽(yáng)性表達(dá)(圖2),結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 Survivin蛋白在不同組織中的表達(dá)Tab.1 Survivin protein expression in different tissues

圖2 Survivin在成釉細(xì)胞瘤中的表達(dá)(×100)Fig.2 The expression of Survivin in ameloblastoma(×100)

2.2 Survivin蛋白的表達(dá)與成釉細(xì)胞瘤臨床特征的關(guān)系

以30歲為標(biāo)準(zhǔn),將AB按年齡分為2組,分析Survivin蛋白的表達(dá)與成釉細(xì)胞瘤患者的不同年齡組、性別及發(fā)病部位之間的關(guān)系,結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 Survivin蛋白的表達(dá)與AB臨床特征的關(guān)系Tab.2 The relationship between Survivin protein expression and clinical features of ameloblastoma

2.3 Survivin蛋白的表達(dá)與成釉細(xì)胞瘤X線分型之間的關(guān)系

60例患者中,Survivin蛋白在單房型成釉細(xì)胞瘤中的的表達(dá)率為50%(12/24),在多房型中的的表達(dá)率為83.87%(26/31),蜂窩型中的表達(dá)率為100%(5/5)。Survivin蛋白在單房型成釉細(xì)胞瘤中的表達(dá)率明顯低于多房型和蜂窩型成釉細(xì)胞瘤(P<0.01),多房型成釉細(xì)胞瘤中Survivin蛋白的表達(dá)率與蜂窩型成釉細(xì)胞瘤比較無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 Survivin蛋白的表達(dá)與成釉細(xì)胞瘤X線分型的關(guān)系Tab.3 The relationship between Survivin protein expression and X-ray subtypes in ameloblastoma

3 討論

3.1 Survivin蛋白在正?？谇徽衬ず统捎约?xì)胞瘤中的表達(dá)及意義

細(xì)胞周期有著高度有序的調(diào)控過(guò)程,其調(diào)控機(jī)制的核心是細(xì)胞周期依賴性蛋白激酶(Cyclin-dependentkinase,CDK),人類細(xì)胞主要的 CDK有CDK1(CDC2)、CDK2、CDK4、CDK5、CDK6、CDK7(CA K)。Survivin是細(xì)胞周期依賴性基因,可結(jié)合CDK4形成 Survivin-CDK4復(fù)合體,激活 CDK2/Cyclin E復(fù)合物,導(dǎo)致視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤(Retinoblastoma,Rb)蛋白磷酸化,促使細(xì)胞有絲分裂[3]。研究發(fā)現(xiàn),Survivin幾乎高表達(dá)于所有的腫瘤、胚胎組織及增殖的正常成人組織[4]。Sui等[5]發(fā)現(xiàn) Survivin的表達(dá)與卵巢腫瘤的增殖活性具有正相關(guān)性,Wasko等[6]研究發(fā)現(xiàn),Survivin蛋白與PCNA共表達(dá)于垂體瘤細(xì)胞中,且Survivin蛋白的表達(dá)陽(yáng)性以細(xì)胞核為主,特別是在侵襲性垂體瘤中,這表明Survivin在垂體瘤細(xì)胞中具有重要的增殖調(diào)控作用。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)Survivin蛋白弱表達(dá)于正?？谇徽衬ど掀さ幕讓蛹?xì)胞核,中等強(qiáng)度表達(dá)于成釉細(xì)胞瘤上皮周邊的立方細(xì)胞或柱狀細(xì)胞核/漿。正?？谇徽衬ど掀さ幕准?xì)胞層又稱生發(fā)層,具有較強(qiáng)的增殖能力,而成釉細(xì)胞瘤中Survivin蛋白的表達(dá)多位于增殖活性較強(qiáng)的細(xì)胞中,這一結(jié)果提示Survivin可能與成釉細(xì)胞瘤的細(xì)胞增殖有關(guān)。

然而,Survivin不僅具有調(diào)節(jié)細(xì)胞有絲分裂的功能,還是抑制細(xì)胞凋亡的重要基因。Survivin可通過(guò)抑制凋亡酶(Caspases)的激活阻礙細(xì)胞凋亡過(guò)程。王智明等[7]研究發(fā)現(xiàn) SurvivinmRNA參與了舌鱗癌的發(fā)生、發(fā)展并抑制了Caspases-3mRNA的表達(dá),進(jìn)而導(dǎo)致細(xì)胞凋亡發(fā)生障礙,出現(xiàn)細(xì)胞的異常增殖。本研究中,成釉細(xì)胞瘤中Survivin的表達(dá)明顯高于正?？谇徽衬?出現(xiàn)這種結(jié)果的原因可能是在某些不良因素刺激下,一些牙源性上皮(如成釉器、口腔黏膜上皮、縮余釉上皮、牙源性囊腫的襯里上皮等)細(xì)胞凋亡受到抑制,出現(xiàn)異常增殖,導(dǎo)致AB的發(fā)生。因此,Survivin蛋白在AB中表達(dá)上調(diào)的現(xiàn)象可能提示該蛋白是AB的診斷標(biāo)記之一。

本研究結(jié)果顯示,30歲以下AB患者Survivin蛋白的表達(dá)略高于30歲以上患者,男性略高于女性,上頜骨AB高于下頜骨,但無(wú)明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。這一結(jié)果提示AB的發(fā)生與患者的年齡、性別和發(fā)病部位無(wú)關(guān)。

3.2 成釉細(xì)胞瘤的X線影像特征

X線影像在初步診斷頜骨囊性病變中具有重要的價(jià)值[8],是成釉細(xì)胞瘤的主要診斷方法之一。通過(guò)收集患者的X線片資料觀察發(fā)現(xiàn),成釉細(xì)胞瘤的X線影像以放射透射影像為主且具有如下特征:1)腫瘤區(qū)內(nèi)常含有牙齒,被含牙齒可處于發(fā)育各個(gè)不同的階段,有的僅含有牙冠,有的牙根已經(jīng)大部分形成,所含牙齒可為埋伏阻生牙,部分為多生牙。2)腫瘤區(qū)內(nèi)牙齒常出現(xiàn)移位或缺失。此現(xiàn)象多為腫瘤生長(zhǎng)過(guò)程中將牙向側(cè)方擠壓、推移,或者是腫瘤對(duì)牙槽側(cè)骨質(zhì)破壞,加之牙根被侵蝕,牙齒自行脫落或因松動(dòng)而被拔除所致。3)腫瘤區(qū)牙根常呈鋸齒狀、截根狀或斜面狀,主要由于腫瘤膨脹性生長(zhǎng)侵蝕牙根所致,部分牙根間出現(xiàn)浸潤(rùn)征象,周春香等[9]認(rèn)為成釉細(xì)胞瘤的這些X線影像在本病的診斷及與牙源性囊腫鑒別診斷中具有重要的作用。4)影像學(xué)特征是成釉細(xì)胞瘤的分隔影像。本研究收集的成釉細(xì)胞瘤X線影像分型符合成釉細(xì)胞瘤X線分型的診斷標(biāo)準(zhǔn)。5)成釉細(xì)胞瘤的X線影像邊緣大多是清晰的,當(dāng)邊緣模糊不清時(shí),可能預(yù)示成釉細(xì)胞瘤患者的預(yù)后不良[10]。

3.3 不同X線類型成釉細(xì)胞瘤中 Survivin蛋白表達(dá)的意義

不同X線類型的成釉細(xì)胞瘤中Survivin蛋白表達(dá)率不同。單房型成釉細(xì)胞瘤中Survivin蛋白的表達(dá)率明顯低于多房型和蜂窩型(P<0.01),多房型和蜂窩型成釉細(xì)胞瘤中Survivin蛋白的表達(dá)率無(wú)明顯差異(P>0.05)。而Survivin具有促使細(xì)胞增殖的作用,這表明成釉細(xì)胞瘤的 X線類型不同,細(xì)胞增殖能力存在差異,蜂窩型成釉細(xì)胞瘤的細(xì)胞增殖能力較高,而單房型較低,提示單房型成釉細(xì)胞瘤侵襲力可能較弱,預(yù)示患者預(yù)后較好。這與部分學(xué)者認(rèn)為的單房型成釉細(xì)胞瘤術(shù)后復(fù)發(fā)率較低是相符的[11-12]。然而,文獻(xiàn)[9]顯示AB早期為單房型或蜂窩型影像,經(jīng)過(guò)多年可變?yōu)槎喾坑跋?多房影像經(jīng)過(guò)一段時(shí)間房間隔可消失,使房室融合擴(kuò)大。所以,隨著時(shí)間的推移,AB的房室形態(tài)可轉(zhuǎn)變,是否同一患者隨著腫瘤房室形態(tài)的改變其細(xì)胞增殖活性隨之改變還需作進(jìn)一步的研究。由于收集的樣本所限,未能掌握足夠的資料,但通過(guò)本資料可以明確的是如果采用相同的手術(shù)方式,單房型成釉細(xì)胞瘤患者預(yù)后較好[11-12]。所以針對(duì)不同X線類型的成釉細(xì)胞瘤,可采用不同的手術(shù)方式,如單房型成釉細(xì)胞瘤,尤其是青少年,可采用一期開(kāi)創(chuàng)減壓,二期根治手術(shù)的治療方式[13-14],這樣既能減少手術(shù)創(chuàng)傷又能降低對(duì)患者頜面部功能與外形的影響,而多房型和蜂窩型成釉細(xì)胞瘤治療方式不易保守。

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Expression of Survivin in Ameloblastoma and Correlation with Imaging Subtypes of Ameloblastoma

LI Wenchao1,XU Jiang2,ZHANG Hui1
(1 Medical College of Shihezi University,Shihezi 832002,China;2 First Affiliated Hospital of Medical College of Shihezi University,Shihezi 832008,China)

To examine the expression of Survivin in ameloblastoma and the relationship between ameloblastoma and subtypes of ameloblastoma in imaging,the expression of survivin was examined by using the immunohistochemisty(SP)method.60 cases of ameloblastoma pre-operative X-ray film were collected.These specimens were divided into three groups.The relationship between the results of Survivin protein expression and imaging subtypes in ameloblastoma were analyzed.The expression of Survivin is 71.67%(43/60)in ameloblastoma samples and the expression of Survivin in normal oral tisues is 18.18%(4/22).The expression of survivin in unilocular ameloblastoma is 50%and lower than multilocular ameloblastoma(83.87%)and honeycomb ameloblastoma(100%)(P<0.01).There was no statistically significant between multilocular ameloblastoma and honeycomb ameloblastoma(P>0.05).Survivin may be one of thre biomarker for early diagnose of ameloblastoma.The proliferation and apoptosis inhibiting capacity of multilocular ameloblastoma and honeycomb ameloblastoma may be higher than unilocular ameloblastoma.

Survivin;immunohistochemistry;ameloblastoma;imaging

R782.2+6

A

1007-7383(2011)02-0201-04

2010-11-04

李文超(1982-),男,碩士生,專業(yè)方向?yàn)榭谇活M面部腫瘤。

徐江(1964-),男,主任醫(yī)師,從事口腔頜面部腫瘤的研究;e-mail:xvjiang2850554@yahoo.com.cn。