陳朝紅 洪亦眉 秦衛(wèi)松 曾彩虹 劉志紅

各種損傷 (免疫,毒物,感染,高糖,局部缺血等)均可觸發(fā)足細胞損傷和缺失。足細胞缺失達到一定程度后,殘存的足細胞代償性工作,這種長期應(yīng)激狀態(tài)將加速足細胞的損傷和脫落,導(dǎo)致更多足細胞丟失,從而啟動足細胞受損的惡性循環(huán),血管緊張素 II(Ang II)可放大這一效應(yīng)。足細胞表達 Ang II的 1型受體(AT1R)和 2型受體(AT2R),Hoffmann等[1]發(fā)現(xiàn),足細胞高表達 AT1R的大鼠在血壓無增高、出現(xiàn)微量蛋白尿時,足細胞發(fā)生病變,表現(xiàn)為足突融合和足細胞胞體脫落,逐步進展為局灶節(jié)段硬化,證實 Ang可直接作用于足細胞。因此,長期以來,Ang II作為足細胞損傷治療的靶點,抑制 Ang II的產(chǎn)生或抑制其與受體結(jié)合的藥物可延緩腎小球疾病進展。由于雷公藤甲素對腎小球足細胞疾病具有廣泛的治療作用[2-7],而 Ang II是介導(dǎo)足細胞損傷的重要因素,并參與了腎小球疾病的進展。我們前期研究發(fā)現(xiàn)雷公藤甲素對足細胞損傷有直接的保護和修復(fù)作用,可拮抗氨基核苷嘌呤霉素對足細胞的損傷,穩(wěn)定足細胞的骨架結(jié)構(gòu)[8]。針對雷公藤甲素能否拮抗 Ang II導(dǎo)致的足細胞損傷,我們體外觀察了雷公藤甲素對 Ang II誘導(dǎo)的足細胞損傷的直接保護作用,并探討其作用機制。

材料與方法

藥品 雷公藤甲素由中國藥品生物制品檢定所提供。樣品經(jīng)高效液相層析分析,純度 ＞99%。雷公藤甲素以二甲基亞砜(DMSO)配制成 10mg/ml的儲存液,儲存于 -20℃冰箱,實驗前應(yīng)用時,用培養(yǎng)液新鮮稀釋成所需濃度,DMSO的濃度不超過0.001%(V/V)。

試劑和儀器 Ang II(Sigma);RPMI-1640(GIBCO)培養(yǎng)液中,含 10%滅活小牛血清(四季青生物工程技術(shù)研究所,杭州);青霉素、鏈霉素各 100 U/ml;重組小鼠 γ干擾素(IFN-γ)(R＆D),CM-H2DCFDA(GIBCO),羅丹明標(biāo)記的鬼筆環(huán)肽(cytosleleton),緊密連接蛋白 1(ZO-1)單抗(Zymed),FITC標(biāo)記的兔抗小鼠 IgG(DAKO),抗p-38、抗 C-Jun氨基端激酶(JNK)、抗細胞外信號調(diào)節(jié)激酶 1/2(ERK1/2)磷酸化和非磷酸化抗體,HRP標(biāo)記的兔抗小鼠 IgG、山羊抗兔 IgG和驢抗山羊 IgG(上海康成),p-38絲裂原活化蛋白激酶(MAPK)抑制劑 SB203580,ERK MAPK抑制劑 U0126,JNK MAPK抑制劑 SP600125均購自 Sigma,增強的化學(xué)發(fā)光 試劑 ECL(上?？党?,顯影液、定影液(樂凱),激光共聚焦顯微鏡(Zeiss LSM 510)。

足細胞培養(yǎng) 永生化溫度敏感小鼠足細胞系(heat-sensitive mouse podocytes,HSMPs)由美國華盛頓大學(xué) Shankland教授惠贈。HSMPs由 H-2KbtsA58轉(zhuǎn)基因小鼠的腎小球分離培養(yǎng)獲得。tsA58為溫度敏感 SV40大 T抗原,其表達受 IFN-γ誘導(dǎo)的啟動子調(diào)控。足細胞于 33℃,在重組小鼠 IFN-γ(150 U/ml)誘導(dǎo)條件下足細胞增生,而在 37℃不含IFN-γ的培養(yǎng)基中培養(yǎng) 10～14 d,足細胞停止增生,獲得分化表型。

足細胞的藥物處理 Ang II以 10-6,10-7,10-8mol/L的濃度加入培養(yǎng)足細胞作用 2h,作為足細胞損傷的體外研究模型;本研究觀察了雷公藤甲素對 Ang II誘導(dǎo)足細胞損傷的保護作用,以及細胞內(nèi)活性氧(ROS)及其下游 MAPK信號通路與雷公藤甲素保護作用的關(guān)系。在觀察雷公藤甲素對足細胞損傷的保護作用研究中,雷公藤甲素(1,3,10 ng/ml)與足細胞預(yù)孵育 30～60 min后,再加入含Ang II(10-7mol/L)的培養(yǎng)基,繼續(xù)作用 2h;在雷公藤甲素抑制 Ang II誘導(dǎo)足細胞損傷的機制研究中,雷公藤甲素(10 ng/ml)與足細胞預(yù)孵育 30 min,再加入含 Ang II(10-7mol/L)的培養(yǎng)基,繼續(xù)作用 5～120 min;以及 p-38 MAPK通路抑制劑 SB203580(25μmol/L),ERK MAPK抑制劑 U0126(25 μmol/L),JNK MAPK抑制劑SP600125(25μmol/L)足細胞預(yù)孵育 30min,再加入含 Ang II(10-7mol/L)的培養(yǎng)基,繼續(xù)作用 2h。

足細胞 Ang受體 mRAN定量 分化 14 d的HSMP經(jīng) Ang II和雷公藤甲素處理后,使用 trizol試劑(凱基生物)提取 RNA。采用 RT-PCR法對足細胞 AT1R和 AT2R mRNA進行定量。小鼠 AT1R和AT2R以及 GAPDH引物序列分別為:AT1R sense:5'-GGAAACAGCTTGGTGGTG-3',AT1R antisense:5'-CTGAATTTCATAAGCCTTCTT-3',擴增產(chǎn)物為556bp;AT2Rsense:5'-TATGCTCAGTGGTCTGCTG G-3',AT2R antisense:5'-TCTCTCTCTTGCCTTGGA GC-3',擴增產(chǎn)物為 427bp;GAPDH sense 5‘-ATGAC ATCAAGAAGGTGGTG-3‘,GAPDH antisense 5‘-CA TACCAGGAAATGAGCTTG-3‘,擴增產(chǎn)物為 177 bp;引物均由上海生工合成。PCR反應(yīng)體系包括:1μl的 cDNA,100 nmol上游引物,100 nmol下游引物,200μM dNTP,1×緩沖液,2.5 mMmg2+,1U Taq酶,2μl DMSO混合,加水至 50μl。 PCR反應(yīng)條件為94℃,45s,55℃,45s,72℃,45s,共 30個循環(huán);72℃,7 min。PCR產(chǎn)物在 2%瓊脂糖凝膠上進行電泳,用Brand Leader Application Version 3.00圖像分析系統(tǒng)對電泳條帶灰度及其面積相對百分比進行分析,以GAPDH光密度值作校正。

熒光顯微鏡觀察足細胞骨架蛋白 接種于chamber slides(Nunc)中的各組細胞,37℃ PBS洗三次,75%冰乙醇固定 10 min后,洗去固定液,加入0.5%Triton X-100透膜 5 min,洗滌,室溫避光條件下羅丹明-鬼筆環(huán)肽孵育 30 min,PBS洗三次,甘油封片,共聚焦熒光顯微鏡下(LSM510,Carl Zeiss)觀察結(jié)果,掃描采集圖像。

免疫熒光染色分析足細胞 ZO-1的表達與分布接種于 chamber slides中的各組細胞,PBS洗三次。用 2%多聚甲醛室溫固定 30 min;0.5%Triton X-100室溫破膜 5 min和 5%BSA室溫封閉 30 min;加抗小鼠 ZO-1單抗,室溫孵育 2h,空白對照孔僅加抗體稀釋液;然后加 FITC標(biāo)記的抗小鼠二抗室溫反應(yīng) 30 min,PBS洗滌,PI套染細胞核 1 min,PBS洗滌,吹干,甘油封片,共聚焦顯微鏡下觀察,掃描采集圖像。

流式細胞儀分析熒光探針 CM-H2DCFDA標(biāo)記的細胞內(nèi) ROS[9]2 ml CM-H2DCFDA(10μmol/L)加入六孔細胞培養(yǎng)板中的足細胞,藥物作用足細胞后,用 PBS洗滌細胞三次,以充分去除未進入細胞內(nèi)的 CM-H2DCFDA,0.25%胰蛋白酶消化收集細胞,流式細胞儀(FACSARIA,BD)分析,使用激發(fā)波長 488 nm,發(fā)射波長 525 nm的檢測參數(shù),以平均熒光強度(mean fluorescence index,MFI)表示細胞內(nèi)ROS含量,每例樣品測定10 000個細胞。

Western blotting檢測雷公藤甲素對足細胞內(nèi)信號通路的影響 25 cm2培養(yǎng)瓶中的各組細胞以預(yù)冷的 PBS液洗二次,加入 100μl預(yù)冷裂解液,冰浴 5 min,刮勺收集樣本,4℃ 12 000 r/min離心 10 min,取上清,以 BCA法測定提取蛋白濃度。每個樣本取50μg蛋白加入等體積 2×SDS上樣緩沖液煮沸變性后,預(yù)制的 10%SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳分離后,14V×16h濕法轉(zhuǎn)移至硝酸纖維素膜。轉(zhuǎn)載標(biāo)本蛋白的硝酸纖維素膜浸入含 5%脫脂奶粉的 TTBS(20 mM Tris-HCl,p H=7.4,150 mM NaCl,0.1%Tween-20),室溫封閉 1h,加入一抗(磷酸化 p38,ERK及 JNK,總 p38,ERK,JNK及 GAPDH,1∶1 000稀釋),4℃孵育過夜,TTBS洗滌 15 min×4次后,加入 HRP標(biāo)記的山羊抗兔或驢抗羊二抗(1∶5 000稀釋),室溫孵育 1h,充分洗滌后,用增強的化學(xué)發(fā)光系統(tǒng)(ECL,上海康成)檢測標(biāo)本膜上的信號,所有目的條帶與內(nèi)參均在同一張膜上檢測,X片記錄實驗結(jié)果。利用上海復(fù)日圖像分析系統(tǒng)進行條帶的分析。

統(tǒng)計學(xué)處理 采用 SPSS 11.0軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析。計量資料以均數(shù) ±標(biāo)準(zhǔn)差表示,兩組間比較采用 t檢驗。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義,P＜0.01時統(tǒng)計學(xué)差異顯著。

結(jié) 果

雷公藤甲素對足細胞 Ang受體表達的影響在 mRNA水平,RT-PCR擴增后,瓊脂糖電泳中出現(xiàn)556 bp和 427 bp的目的條帶,顯示我們體外培養(yǎng)的小鼠足細胞系表達 AT1R和 AT2R。進一步的定量實驗顯示,不論是Ang II單獨作用,還是雷公藤甲素單獨作用,或雷公藤甲素與Ang II聯(lián)合作用,均不影響足細胞 AT1R和 AT2R的表達水平(圖1)。

雷公藤甲素對 Ang II誘導(dǎo)足細胞骨架蛋白破壞的保護作用 足細胞于 37℃,無 IFN-γ的培養(yǎng)基中分化 14 d,觀察骨架結(jié)構(gòu)的形態(tài),結(jié)果顯示,正常分化的足細胞,細胞骨架呈絲狀結(jié)構(gòu),密度大,絲強勁有力,沿細胞呈極性分布(圖2A),Ang II呈劑量依賴性破壞足細胞骨架結(jié)構(gòu)。10-8mol/L Ang II對足細胞骨架結(jié)構(gòu)無明顯的損傷作用,部分細胞出現(xiàn)F-actin變細;10-7mol/L Ang II干預(yù) 2h,足細胞骨架結(jié)構(gòu)被明顯破壞,細胞骨架的極性消失,排列紊亂,部分足細胞 F-actin出現(xiàn)溶解(圖 2B);10-6mol/L Ang II作用后,F-actin幾乎完全解聚,少數(shù)細胞尚有殘存的被切斷的絲狀結(jié)構(gòu)。雷公藤甲素與足細胞預(yù)孵育 30 min后,再加入 Ang II作用 2h,足細胞骨架結(jié)構(gòu)得以很好的保存,雷公藤甲素的保護亦呈劑量依賴性,10 ng/ml雷公藤甲素的保護作用較 3 ng/ml更為明顯(圖 2C、D),但雷公藤與足細胞預(yù)孵育 30 min或 60 min,其對足細胞的保護作用無明顯差異。

圖1 足細胞血管緊張素 II(Ang II)的 1型受體(A)與 2型受體(B)

圖2 雷公藤甲素對血管緊張II(Ang II)誘導(dǎo)足細胞骨架破壞的保護作用(IF,×400)

雷公藤甲素對 Ang II誘導(dǎo)的足細胞間細胞斷裂的保護作用 正常分化的足細胞,ZO-1沿細胞邊界呈均勻連續(xù)的線狀分布,細胞邊緣光滑,細胞間連接緊密。Ang II呈劑量依賴性破壞足細胞的細胞間連接。Ang II(10-8mol/L)作用足細胞 2h,ZO-1連續(xù)的線性分布消失,出現(xiàn)皺褶,但無明顯的斷裂;Ang II(10-7mol/L)組細胞 ZO-1表達和分布出現(xiàn)明顯改變,ZO-1出現(xiàn)明顯的斷裂(圖 3B);Ang II(10-6mol/L)組細胞 ZO-1的破壞進一步加劇,表達減弱、斷裂,細胞出現(xiàn)皺縮,細胞間間隙增大。雷公藤甲素與足細胞預(yù)孵育 30 min后,能夠有效拮抗 Ang II對足細胞細胞間連接蛋白的破壞,雷公藤甲素的保護亦呈劑量依賴性,10 ng/ml雷公藤甲素的保護作用較 3 ng/ml更為明顯(圖 3C、D),但雷公藤與足細胞預(yù)孵育 30 min或 60 min,其對足細胞的保護作用無明顯差異。

圖3 雷公藤甲素對血管緊張素II(Ang II)誘導(dǎo)的足細胞間細胞斷裂的保護作用(IF,×400)

雷公藤甲素抑制 Ang II誘導(dǎo)的細胞內(nèi) ROS的產(chǎn)生 Ang II(10-7mol/L)作用10 min即可誘導(dǎo)足細胞內(nèi) ROS的明顯增加,是基礎(chǔ)值的近三倍,并持續(xù)到 30 min。雷公藤甲素(10 ng/ml)或抗氧化劑 N乙酰半胱氨酸(NAC)(10 mmol/L)預(yù)處理細胞后,能夠有效遏制 Ang II誘導(dǎo)的細胞內(nèi) ROS的產(chǎn)生。與此相平行,足細胞骨架蛋白的熒光染色也證實,抗氧化劑能夠阻斷 Ang II對足細胞的損傷,進一步說明了 ROS介導(dǎo)了 Ang II對足細胞的損傷。雷公藤甲素抑制 ROS的產(chǎn)生無疑是阻斷 Ang II對足細胞損傷作用的重要機制(圖4)。

圖4 雷公藤甲素抑制Ang II誘導(dǎo)的細胞內(nèi)ROS產(chǎn)生

雷公藤甲素抑制 Ang II誘導(dǎo)的 MAPK信號通路的活化 Ang II(10-7mol/L)可誘導(dǎo) MAPK三條信號通路的活化,p-38和 JNK MAPK信號通路較早發(fā)生活化。Western blot結(jié)果顯示,Ang II刺激 10min后,p-38和 JNK MAPK的磷酸化水平即顯著升高,分別是對照組的 5.1倍和 4.5倍,并持續(xù)到 60 min。ERK MAPK磷酸化水平在 Ang II作用 30min后達到高峰,并持續(xù)到 60 min。雷公藤預(yù)處理細胞后,能夠有效地遏制 Ang II誘導(dǎo)的 MAPK信號通路的活化,p-38,ERK和 JNK MAPK的磷酸化水平顯著降低(圖5)。足細胞骨架蛋白的熒光染色發(fā)現(xiàn),p-38、ERK MAPK抑制劑 SB203580和 U0126能拮抗 Ang II對足細胞的損傷,而 JNK MAPK抑制劑對 Ang II誘導(dǎo)的足細胞損傷無明顯的保護作用(圖6)。

討 論

雷公藤用于治療腎炎已有 30多年的歷史,能明顯減少微小病變,局灶節(jié)段腎小球硬化(FSGS)和膜性腎病患者的蛋白尿[2-5]。動物實驗和臨床研究顯示,雷公藤甲素對糖尿病腎病(DN)的蛋白尿也有一定的療效[10,11]。近年來隨著對蛋白尿形成機制研究的深入,足細胞病變在大量蛋白尿發(fā)生中的重要性得到了充分的認識。足細胞損傷是 DN發(fā)病的早期事件,如微量白蛋白尿(MAU)、腎小球肥大等的重要病因,與腎小球硬化、腎功能下降有關(guān)系,因此人們將DN也歸因于足細胞病。不同病因的足細胞疾病發(fā)展到一定程度,有共同的病理機制推動腎小球病變進展直至腎小球球性硬化。Ang II就是導(dǎo)致足細胞受損惡性循環(huán)的一個重要因素,臨床試驗和實踐均顯示,有效地控制血壓、抑制 Ang II的生成或作用,以及減少蛋白尿幾乎延緩所有腎小球疾病的進展[9]。雷公藤甲素對多種以足細胞病變?yōu)橥怀霰憩F(xiàn)的腎小球疾病的療效提示,雷公藤甲素可能作用于推動疾病進展的一個共同因素。我們前期研究發(fā)現(xiàn),雷公藤甲素對免疫因素和非免疫因素介導(dǎo)的蛋白尿的產(chǎn)生均有防治作用[6,7]。體外實驗發(fā)現(xiàn)雷公藤甲素對嘌呤霉素氨基核苷(PAN)所致的足細胞損傷有直接的保護和修復(fù)作用,可拮抗 PAN對足細胞的損傷,穩(wěn)定足細胞的骨架結(jié)構(gòu)[12]。結(jié)合臨床上觀察到雷公藤對足細胞病的廣泛療效,我們進一步觀察了雷公藤對 Ang II誘導(dǎo)足細胞損傷的影響。

圖5 雷公藤甲素抑制 MAPK信號通路的活化

圖6 p-38 MAPK和ERK MAPK信號通路介導(dǎo) Ang II誘導(dǎo)的足細胞骨架損傷

腎素血管緊張素系統(tǒng)(RAS)激活是足細胞損傷的重要因素。一些因素,如高糖,高血壓可刺激局部,包括足細胞內(nèi) RAS的激活,導(dǎo)致 Ang II釋放增加[13]。研究證實足細胞上有 ATIR與 AT2R表達,是 Ang II作用的靶細胞。Ang II可誘導(dǎo)足細胞肥大,刺激足細胞分泌 IV型膠原 α3鏈的產(chǎn)生,刺激整合素 β1分泌和整合素連接激酶合成[14,15],誘導(dǎo)裂孔膜成分,如 nephrin表達和分布的改變[16]。更為重要的是,有研究表明,Ang II可影響足細胞骨架蛋白和細胞間的緊密連接[17]。以肌動蛋白為中心的細胞骨架是各種損傷因素作用于足細胞引起足細胞損傷的“共同通路”[18],足細胞的骨架結(jié)構(gòu)又是主要由 F-actin、α-actinin和 synaptopodin組成,它們之間在結(jié)構(gòu)和功能上互相支撐、相互影響,其中 actin是足細胞的基本骨架蛋白,對維持足細胞的正常結(jié)構(gòu)和功能具有重要意義。不論引起足突形態(tài)變化的因素是什么或損傷的部位在何處,大部分情況下均可先影響足細胞骨架而后引起足突融合的形態(tài)改變,同時足細胞相關(guān)蛋白分子的改變也能以不同的方式與細胞骨架發(fā)生作用從而引起足突融合。細胞間緊密連接蛋白 ZO-1分位于裂孔隔膜的胞質(zhì)內(nèi),是裂孔膜分子(nephrin和 podocin)與 actin連接的橋梁,在裂孔隔膜完整性和信號傳導(dǎo)及穿膜蛋白復(fù)合體組成中起重要作用[17]。我們的研究表明,Ang II呈劑量依賴性解聚足細胞胞質(zhì)中應(yīng)力纖維,破壞足細胞間細胞連接,是 Ang II損傷足細胞的分子基礎(chǔ)。失去骨架支撐以及細胞間連接松散的足細胞易于從基膜脫落,是 DN足細胞數(shù)目減少的病理基礎(chǔ)。如果預(yù)先加入雷公藤甲素處理,Ang II上述作用被明顯的減弱,足細胞骨架結(jié)構(gòu)得到了很好的保存,拮抗Ang II對足細胞細胞間連接蛋白的破壞。上述研究證實雷公藤甲素對 DN的療效與其對足細胞直接保護作用有關(guān)。那么雷公藤甲素為何對多種因素造成的足細胞損傷均有明顯的保護作用,是否因為不同損傷因素通過共同機制影響足細胞功能呢?

Ang II通過細胞上表達的 1型和 2型受體發(fā)揮生物學(xué)作用,高糖和機械牽張等因素可誘導(dǎo) AT1R的表達[19]。我們的研究結(jié)果顯示,雷公藤甲素并不影響足細胞上 AT1R和 AT2R的表達,提示雷公藤甲素的作用靶點可能在細胞內(nèi)的下游信號通路。

氧化應(yīng)激參與了多種腎小球疾病的發(fā)病過程,包括 DN的發(fā)生發(fā)展[20-23]。足細胞不僅是 ROS作用的靶細胞,同樣也是產(chǎn)生 ROS的源頭。研究表明,PAN可刺激足細胞內(nèi) ROS的產(chǎn)生[12,24],ROS是PAN導(dǎo)致足細胞損傷的初始因素[25]。而 Ang II可誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細胞[26],血管平滑肌細胞[27],成纖維細胞[28]等多種細胞內(nèi) ROS的產(chǎn)生。我們發(fā)現(xiàn),Ang II同樣刺激足細胞內(nèi) ROS的產(chǎn)生,Ang II(10-7mol/L)作用 10 min即可誘導(dǎo)足細胞內(nèi) ROS的明顯增加,是基礎(chǔ)值的近三倍,足細胞骨架蛋白的熒光染色證實,抗氧化劑 NAC能夠阻斷 Ang II對足細胞的損傷。進一步說明 ROS介導(dǎo)了 Ang II對足細胞的損傷。而雷公藤甲素(10ng/ml)預(yù)處理細胞后,能夠有效抑制 Ang II誘導(dǎo)的細胞內(nèi) ROS的產(chǎn)生。在前期研究中,我們發(fā)現(xiàn)雷公藤甲素對 ROS的影響參與了其對 PAN誘導(dǎo)足細胞損傷的保護作用,該機制同樣介導(dǎo)了雷公藤甲素對 Ang II所致足細胞損傷的保護作用。

細胞內(nèi) ROS可直接攻擊細胞,或作為類似第二信使的信號分子激活氧化還原敏感性信號通路,如核因子 κB、MAPK、己糖胺等。其中 MAPK是足細胞內(nèi)重要的信號通路,nephrin可通過 p-38和 JNK MAPK激活轉(zhuǎn)錄因子的激動蛋白,而 podocin可明顯加強 nephrin的這一信號傳遞[29],MAPK通路的活化與足細胞損傷,足突融合和蛋白尿的發(fā)生密切相關(guān)[30]。MAPK家族主要有三條亞信號通路,即經(jīng)典的 p-38 MAPK通路,細胞外信號調(diào)節(jié)激酶(ERK1/2)通路,c-un氨基末端激酶(JNK)/應(yīng)激激活蛋白激酶(SAPK)途徑。我們研究發(fā)現(xiàn),Ang II(10-7mol/L)可誘導(dǎo) MAPK三條信號通路的活化,雷公藤預(yù)處理細胞后,能夠有效地遏制 Ang II誘導(dǎo)的MAPK信號通路的活化,p-38,ERK和 JNK MAPK的磷酸化水平顯著降低。足細胞骨架蛋白的熒光染色發(fā)現(xiàn),p-38、ERK MAPK抑制劑 SB203580和U0126能拮抗 Ang II對足細胞的損傷,而 JNK MAPK抑制劑對 Ang II誘導(dǎo)的足細胞損傷沒有明顯的保護作用,JNK信號通路的活化在足細胞損傷中的作用還有待進一步研究。

上述研究表明,雷公藤甲素對 Ang II導(dǎo)致的足細胞的損傷有直接的保護作用,表現(xiàn)為拮抗 Ang II誘導(dǎo)的骨架蛋白解聚,拮抗 Ang II誘導(dǎo)的細胞間連接分子的重排。雷公藤甲素的上述作用與細胞內(nèi)ROS及下游的 p-38、ERK MAPK信號通路密切相關(guān)。雷公藤甲素干預(yù)Ang II誘導(dǎo)的足細胞損傷可能部分參與了其對腎小球疾病的療效。

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