劉紅云,張福云,高 福,覃彩芹

(孝感學(xué)院生命科學(xué)技術(shù)學(xué)院,湖北孝感432000)

不同用量酒精對大鼠肝急性損傷的病檢

劉紅云,張福云,高 福,覃彩芹

(孝感學(xué)院生命科學(xué)技術(shù)學(xué)院,湖北孝感432000)

將48只大鼠隨機(jī)分成對照組和5個實驗組,每組8只。實驗組1～5組每只大鼠分別按體重4、8、13、16、20g/kg一次性灌胃47.5%酒精,對照組每只大鼠按體重20g/kg一次性灌胃生理鹽水,灌胃后24h取肝組織進(jìn)行病檢。結(jié)果顯示實驗組各組炎細(xì)胞浸潤、水變性均為100%,實驗組3～5組脂肪變性、點(diǎn)狀/片狀壞死均為100%,而對照組未見異常病變,表明47.5%酒精攝入量在13g/kg以上可造成較嚴(yán)重的急性肝損傷。

酒精;急性肝損傷;病理變化

隨著經(jīng)濟(jì)的發(fā)展,人們生活水平的提高,飲食不當(dāng)導(dǎo)致的肝臟疾病嚴(yán)重危害著人類的身體健康[1]。在美國,酒精相關(guān)性肝病所導(dǎo)致的死亡,在各類肝病中占據(jù)首位,而在國內(nèi)酒精肝的發(fā)病率呈上升趨勢。酒精又名乙醇,具有直接的肝毒性。早在30多年前Lieber等的動物實驗顯示乙醇可以引起肝臟脂肪變性[2],近些年又通過實驗研究表明酒精使線粒體參與細(xì)胞色素P450 2E1的誘導(dǎo),有助于脂質(zhì)過氧化和谷胱甘肽的損耗[3]。酒精通過改變后轉(zhuǎn)譯蛋白質(zhì)擾亂了肝細(xì)胞核和線粒體之間的相互作用[4]。乙醇及在肝細(xì)胞內(nèi)代謝產(chǎn)生的乙醛等毒性代謝產(chǎn)物引起的代謝紊亂是導(dǎo)致酒精性肝損傷的主要原因。酒精可以使肝臟線粒體損傷[5-6]并致功能紊亂,氧化乙醛的能力大大下降,導(dǎo)致肝內(nèi)乙醛含量增加。孫怡寧等用白酒灌胃法加高脂肪飼料建立了早期酒精性肝病的大鼠模型[7]。探討不同用量的酒精導(dǎo)致急性肝損傷的病理變化,有利于急性酒精性肝損傷模型的建立及其發(fā)病機(jī)制的研究。

1 材料與方法

1.1 試劑與動物

47.5%酒精由湖北斯布道化工有限公司提供的95%的醫(yī)用級酒精用蒸餾水稀釋而成。Wistar雄性大鼠由華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院實驗動物中心提供,體重100～148g。

1.2 儀器設(shè)備

切片機(jī)(KD-202型)由浙江省金華通科儀器設(shè)備公司制造。顯微觀察數(shù)碼顯像拍照系統(tǒng),由江南光電股份有限公司組裝。

1.3 動物分組建模

48只大鼠隨機(jī)分成對照組8只和實驗組1、2、3、4、5組各8只。實驗組1～5組每只大鼠分別按體重4g/kg、8g/kg、13g/kg、16g/kg、20g/kg一次性灌胃47.5%酒精,對照組每只大鼠按體重20g/kg一次性灌胃生理鹽水(表1)。灌胃后24h取肝組織進(jìn)行病檢。

1.4 光學(xué)顯微鏡檢查

取出的大鼠肝組織按石蠟切片方法制片,經(jīng)固定、沖洗、脫水、透明、浸蠟、包埋、切片步驟后再進(jìn)行貼片和烤片,脫蠟、復(fù)水和HE染色,再脫水、透明,最后封固,于光學(xué)顯微鏡下檢查。

2 結(jié)果

在光鏡下檢查肝細(xì)胞的損傷。由圖1、圖2和表2可以看出,實驗組各組大鼠酒精灌胃后24h肝組織均可見炎細(xì)胞浸潤,部分門管區(qū)炎性滲出,纖維母細(xì)胞增多;肝細(xì)胞水變性,細(xì)胞及細(xì)胞核輕度腫大淡染,其病變發(fā)生率均占100%。實驗組3、4、5組肝小葉結(jié)構(gòu)明顯紊亂,還可見肝細(xì)胞脂肪變性,肝細(xì)胞內(nèi)脂肪空泡形成;肝細(xì)胞點(diǎn)狀、片狀壞死,單個或幾個或成片的肝細(xì)胞核濃縮、核碎裂、核溶解等,其病變發(fā)生率均占100%。對照組大鼠未見異常病變。

表1 大鼠體重及酒精灌胃劑量(單位:g)

圖1 實驗組4小組肝切片圖(光鏡,HE染色,×300)

圖2 實驗組5小組肝切片圖(光鏡,HE染色,×300)

表2 實驗組肝病變檢測結(jié)果

3 討論

近些年來有較多酒精性肝損傷的報道和研究。王近中等人對大鼠注射酒精8天后,觀察發(fā)現(xiàn)大鼠紅細(xì)胞膜的熒光梯度下降,Na,K-ATP酶活性增加,用光鏡和透射電子顯微鏡(TEM)觀察,可見細(xì)胞水腫、有脂滴、變形、線粒體腫脹、膜破裂和脫粒等現(xiàn)象[8]。酒精引起的氧化應(yīng)激和脂質(zhì)過氧化末端產(chǎn)物在酒精性肝病中起了重要作用[9]。酒精攝入后主要在肝內(nèi)代謝,酒精通過醇脫氫酶代謝產(chǎn)生的乙醛和自由基迅速地捆綁到大量的靶細(xì)胞,包括細(xì)胞信號的傳導(dǎo)路徑和DNA。除了DNA損害之外,乙醛使谷胱甘肽大量減少。酒精可導(dǎo)致肝細(xì)胞微粒體CYP2E1的誘導(dǎo),引起更多的自由基產(chǎn)物和異常的細(xì)胞功能[10]。酒精攝入對肝酶有顯著的影響,加重氧化應(yīng)激,攝入量與肝損傷呈正相關(guān)[11]。Arocha等在酒精攝入的24例病人中按酒精攝入量分類,經(jīng)皮活檢和HE組織學(xué)染色等檢測,提示肝組織學(xué)變化對酒精性肝疾病的診斷有重要作用,且酒精攝入越多酒精性肝疾病越重,越容易發(fā)生嚴(yán)重的肝疾病如酒精性肝硬化和肝癌[12]。本文實驗組3～5小組比1～2小組病變明顯要重。不同用量酒精對大鼠急性肝損傷模型的研究,給急性酒精性肝損傷發(fā)病機(jī)理的研究及臨床防治奠定了一定的基礎(chǔ)。

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Abstract:The pathological change of acute liver injury in rats by the alcohol with different dose was investigated.48 rats were randomly divided into the five experimental groups(eight rats/each group)and the control group(eight rats).The experimental groups were given the alcohol(47.5%v/v)at the dose of 4,8,13,16 and 20 g/kg body weight by gavages,and the control group was given the physiological saline.These rats were killed after 24h.Their hepatic tissues were examined by light microscope.The results indicated that inflammatory cell infiltration and the hydropic degeneration in hepatic tissues in all experimental groups were all 100%.The fatty degeneration and spotty necrosis/patchy necrosis in hepatic tissues were all 100%when the alcohol dose was 13g/kg and more.Abnormality was not found in the control group.We concluded that the serious acute liver injury of rat was arisen by the alcohol(47.5%v/v)with the dose of 13 g/kg and more.

Key Words:alcohol;acute liver injury;pathological change

Pathological Detection of Acute Liver Injury in Rats by Alcohol with Different Dose

Liu Hongyun,Zhang Fuyun,Gao Fu,Qin Caiqin
(College of Lif e Science and Technology,Xiaogan University,Xiaogan,Hubei432000,China)

Q485

A

1671-2544(2010)03-0012-03

2010-01-31

湖北省教育廳科學(xué)研究重大項目(Z200626001);孝感學(xué)院科研項目Z2008018)

劉紅云(1956— ),男,湖北孝感人,孝感學(xué)院生命科學(xué)技術(shù)學(xué)院高級實驗師。

(責(zé)任編輯:陳錦華)