包春惠

(宣威市環(huán)保局,云南宣威 655400)

細(xì)菌生長與接種條件

包春惠

(宣威市環(huán)保局,云南宣威 655400)

通過對(duì)無菌室開紫外燈滅菌時(shí)間的長短進(jìn)行空白營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基培養(yǎng)后細(xì)菌有無情況的比較分析,得出無菌室用紫外燈滅菌的最佳時(shí)間是 30min;并通過接種時(shí)控制培養(yǎng)基溫度為 40～45℃,了解菌落分布均勻,生長良好的前提。

細(xì)菌生長;接種條件;實(shí)驗(yàn)

細(xì)菌廣泛分布于我們的生活環(huán)境中,是空氣和水中的微生物指標(biāo)之一。空氣中的細(xì)菌總數(shù)是指1m3空氣中各種細(xì)菌的總數(shù)目。水中的細(xì)菌總數(shù)是指 1ml水樣在普通瓊脂培養(yǎng)基中,于 37℃經(jīng) 24h培養(yǎng)后所生長的細(xì)菌菌落總數(shù)。一般認(rèn)為每 1ml水中細(xì)菌總數(shù)小于 100個(gè)為極清潔的水,100～1000個(gè)為清潔水,1000～10000個(gè)為不太清潔水,10000個(gè)以上即為不清潔水。人們飲用了不清潔的水可產(chǎn)生各種疾病,如:細(xì)菌性痢疾、霍亂沙門氏菌病等。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)器材

培養(yǎng)皿 (直徑 90～100mm),500ml大燒杯,100℃溫度計(jì),500ml三角瓶,高壓蒸汽滅菌鍋,恒溫生化培養(yǎng)箱,放大鏡。

1.2 培養(yǎng)基的配方

蛋白胨 10g、牛肉浸膏 3g、氯化鈉 5g、瓊脂20g、蒸餾水 1000ml。

2 總結(jié)與討論

2.1 實(shí)驗(yàn)過程

培養(yǎng)基在配制時(shí)各種配方稱好后混于水中,經(jīng)過加熱熔化,熔化過程中要不斷攪拌使各成分均勻混于水中,并在加熱同時(shí)不斷補(bǔ)充失去的水分,以補(bǔ)足至原來的體積。否則培養(yǎng)基各成份混合不均勻,水分不足,培養(yǎng)基營養(yǎng)不全,不利于細(xì)菌生長。配制好的培養(yǎng)基若有沉渣或混濁,趁熱用三至四層紗布過濾,濾液最好用 pH計(jì)調(diào)節(jié)pH值為 7.2～7.4,過酸或過堿都不利于細(xì)菌生長,并在 2h內(nèi)滅菌。滅菌的高壓鍋?zhàn)詈檬菃为?dú)使用放于無菌室中,滅菌好的培養(yǎng)基可于高壓鍋中存放 1～2h;待無菌室滅菌后,再打開高壓鍋取出備用,以達(dá)到備用培養(yǎng)基絕對(duì)無菌。

2.2 無菌室的滅菌

一般要求只要打開無菌室的紫外燈 20min后,無菌室就可以達(dá)到無菌,但經(jīng)過實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證無法達(dá)到要求,細(xì)菌空白對(duì)照實(shí)驗(yàn)如表 1所示。

表 1 空白對(duì)照實(shí)驗(yàn)

從 4組細(xì)菌空白實(shí)驗(yàn)可以看出無菌室達(dá)到真正無菌只要打開無菌室紫外燈 30min后,再打開無菌操作臺(tái)的風(fēng)機(jī)預(yù)熱 20min后進(jìn)行水樣細(xì)菌接種實(shí)驗(yàn),這樣就可得到相對(duì)準(zhǔn)確的細(xì)菌總數(shù)分析結(jié)果。這一結(jié)果是紫外燈更換 90d左右所得。但紫外燈使用 1a以上,接近 1.5a,開紫外燈 30min后,再預(yù)熱無菌操作臺(tái) 20min后進(jìn)行空白實(shí)驗(yàn),不能達(dá)到無菌室真正無菌的要求,建議紫外燈 1a更換 1次。

2.3 培養(yǎng)基的溫度

水樣接種時(shí),培養(yǎng)基的溫度非常關(guān)鍵,溫度高了容易把水樣中的細(xì)菌燙死,溫度低了一方面瓊脂培養(yǎng)基容易凝固 (尤其在冬季),另一方面水樣與培養(yǎng)基混合不均勻,培養(yǎng)出的菌落分不開,成團(tuán)生長,不易計(jì)數(shù)。培養(yǎng)基的溫度在 40～45℃左右最佳,接種時(shí)最好用溫度計(jì)控制溫度,建議在無菌室放一個(gè)電爐,溫度達(dá)不到時(shí),以便加熱使溫度保持在一定范圍內(nèi),也可用熱水浴保持培養(yǎng)基的溫度。

3 結(jié)論

試驗(yàn)表明,要準(zhǔn)確掌握水樣中的細(xì)菌總數(shù),關(guān)鍵是細(xì)菌的培養(yǎng)。細(xì)菌培養(yǎng)的前提不僅有配制良好且無菌培養(yǎng)基,真正無菌的接種室,而且要有接種時(shí)培養(yǎng)基適宜的溫度。

[1]吳邦燦.環(huán)境監(jiān)測技木 [M].北京:環(huán)境科學(xué)出版社,1995.

[2]劉培哲.環(huán)境水質(zhì)監(jiān)測質(zhì)量保證手冊 [M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,1984.

[3]蔡宏道.環(huán)境醫(yī)學(xué) [M].北京:環(huán)境科學(xué)出版社,1990.

Bacteria Growth and Vaccination Condition

BAO Chun-hui

(Xuanwei Environmental Protection Bureau,Xuanwei Yunnan 655400 China)

The optimal time of sterilization is 30 minutes in sterile room with ultraviolet lamp by comparing between the time of sterilization in sterile room and the sum bacteria by blank cultivating nutrient agar.The condition with better bacteria growth is tested when controlling the vaccination temperature as 40 to 45℃.

bacteria growth;vaccination condition;test

X83

A

1673-9655(2010)增 1-0088-02

2009-06-05