曾 艷,陳 薇,賀月林,繆 東

(湖南省微生物研究所,湖南長沙 410009)

穿心蓮性寒、味苦,能清熱解毒、消炎止痛,可用于急性細(xì)菌性痢疾、急性胃腸炎、扁桃體炎、咽喉炎等[1]。穿心蓮提取物有效成分為二萜類內(nèi)酯化合物。二萜類內(nèi)酯化合物均難溶于水,故通過在內(nèi)酯結(jié)構(gòu)中引入不同的親水基團(tuán),增加內(nèi)酯的水溶性[2]。穿琥寧是由清熱解毒中藥穿心蓮的提取物穿心蓮內(nèi)酯與琥珀酸酐脫水、酯化、成鹽而形成的脫水穿心蓮內(nèi)酯琥珀酸半酯單鉀鹽,具有解熱、抗菌、抗病毒、抗炎及鎮(zhèn)靜作用。穿琥寧在穿心連內(nèi)酯針劑中其抗炎解熱作用是最強(qiáng)的。目前穿琥寧的臨床使用效果已得到國內(nèi)外醫(yī)學(xué)專家的認(rèn)可,但在獸醫(yī)臨床上末見使用報(bào)道。而且國內(nèi)外對穿琥寧注射液長期服用有關(guān)毒理學(xué)方面報(bào)道較少。本課題組通過穿琥寧注射液急性毒性實(shí)驗(yàn),測得其 LD50為 757 mg/kg體重[3]。穿琥寧注射液臨床療程為7 d,中藥新藥長期毒性試驗(yàn)的給藥周期應(yīng)是臨床療程的2倍～4倍[4-5]。故設(shè)計(jì)為期28 d的穿琥寧注射液長期毒性試驗(yàn),現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 藥物 20 mg/mL穿琥寧注射液,由湖南省微生物研究所獸藥研究室配制。

1.1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 SD大鼠,雌雄各半,由湖南省疾病控制實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供,許可證號(hào):scxk(湘)2006-0002。

1.2 方法

取SD大鼠 80只,體重180 g～220 g。觀察飼養(yǎng)1周,隨機(jī)分為4組,每組20只,雌雄各半。給藥劑量如下:①對照組(同體積生理鹽水);②高劑量組:75.7 mg/kg(LD50的 1/10);③中劑量組:15.14m g/kg(LD50的 1/50);④低劑量組:7.57m g/kg(LD50的1/100)[6-7]。注射用水配制試驗(yàn)藥物成所需濃度,腹腔注射給藥,給藥體積均為3.8 mL/kg,每天給藥1次,連續(xù)給藥28 d,每周稱體重1次,每周根據(jù)體重調(diào)整給藥量,并觀察動(dòng)物活動(dòng)、毛發(fā)、糞便情況。給藥28 d及停止給藥后14 d(恢復(fù)期)時(shí),每組每次隨機(jī)各取10只大鼠(雌性各半)腹主動(dòng)脈采血檢測血常規(guī)、血液生化指標(biāo),而后放血致死,解剖取心 、肝 、脾、肺 、胃 、腎、睪丸(卵巢)稱濕重以計(jì)算臟器指數(shù)。數(shù)據(jù)處理應(yīng)用SAS 8.1統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件,統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用方差分析。

2 結(jié)果

2.1 臨床癥狀及對體重的影響

2.1.1 臨床癥狀 大鼠一般狀況:各組大鼠給藥期間行為、步態(tài)、毛色、糞便性狀與空白對照組相比,未見異常變化,偶有拉稀癥狀,第2天停止拉稀,毛色白且有光澤,停藥觀察14 d亦未出現(xiàn)遲發(fā)性不良反應(yīng)。說明穿琥寧注射液對SD大鼠一般狀況無明顯不良影響。

2.1.2 對大鼠體重的影響 試驗(yàn)期間每周稱體重1次,計(jì)算第14天、28天以及恢復(fù)期各組大鼠的平均增重量,體重增長情況見表1。從表1中可知,各組大鼠在試驗(yàn)期間體重均有增加,各給藥組大鼠體重增長略低于對照組,但與對照組比較無顯著性差異(P＞0.05),可見長期腹腔注射穿琥寧注射液對SD大鼠體重?zé)o不良影響。

表1 穿琥寧注射液對SD大鼠體重增重的影響Table1 The effect of injection potassium dehyd roandrograpolide succinate on w eight gain in SD rats g

2.2 對血液學(xué)指標(biāo)的影響

連續(xù)給大鼠腹腔注射穿琥寧注射液28 d以及停藥飼喂14 d后,各實(shí)驗(yàn)組每次隨機(jī)取大鼠10只(雌雄各半)腹主動(dòng)脈采血,檢測血紅蛋白、白細(xì)胞、紅細(xì)胞以及白細(xì)胞分類數(shù)。經(jīng)統(tǒng)計(jì)處理各給藥組與對照組比較無顯著性差異(P＞0.05),停藥14 d后各給藥組與對照組比較也無顯著性差異(P＞0.05)。表明本品對正常大鼠外周血象無顯著影響,恢復(fù)期未見延遲性損害(表2,表3)。

表2 穿琥寧注射液對SD大鼠長期毒性試驗(yàn)28 d血常規(guī)指標(biāo)的影響Table2 The effect of in jection potassium dehydroand rog rapolide succinate on indexes of hematology for 28 day s in SD rats

2.3 血液生化學(xué)指標(biāo)的影響

給大鼠連續(xù)用藥4周,測定穿琥寧注射液高、中、低劑量組和空白對照組大鼠在末次給藥24 h后的血清谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(A LT)、尿素氮(BUN)、總蛋白(TP)、白蛋白(A LB)、球蛋白(GLB)、白/球比值、肌酐(Cr)、尿酸(UA)、谷丙/谷草轉(zhuǎn)氨酶的結(jié)果,各劑量組的各項(xiàng)指標(biāo)與對照組比較,均無顯著性差異(P＞0.05)。停藥14 d的測定結(jié)果,各劑量組的各項(xiàng)指標(biāo)與對照組比較,均無顯著性差異(P ＞0.05)(表4,表5)。

表3 穿琥寧注射液對SD大鼠長期毒性試驗(yàn)恢復(fù)期血常規(guī)指標(biāo)的影響Table3 The effect of injection potassium dehydroand rog rapolide succinate on indexes of hematology during recovery in SD rats %

表4 穿琥寧注射液對SD大鼠長期毒性試驗(yàn)28 d血清生化指標(biāo)的影響Table4 The effect of in jection potassium dehydroand rog rapolide succinate on indexes of blood biochem istry for 28 day s in SD rats %

2.4 對臟器指數(shù)的影響

連續(xù)給大鼠腹腔注射穿琥寧注射液28 d以及停藥飼喂14 d后,每次每組隨機(jī)取10只(雌雄各半)大鼠腹主動(dòng)脈采血后,取心、肝、腎、肺、脾、胃、睪丸和卵巢在濾紙上除去血跡,稱濕重,計(jì)算臟器指數(shù)。結(jié)果表明各給藥組的心、肝、腎、脾、肺、睪丸或卵巢的臟器系數(shù)與對照組比較差異不顯著(P＞0.05)(表6,表 7)。

表5 穿琥寧注射液對SD大鼠長期毒性試驗(yàn)恢復(fù)期血清生化指標(biāo)的影響Table5 The effect of injection potassium dehydroandrograpolide succinate on indexesof b lood biochemistry du ring recovery in SD rats

表6 穿琥寧注射液對SD大鼠長期毒性試驗(yàn)28 d臟器指數(shù)的影響Table6 The effect of injection potassium dehyd roandrograpolide su ccinate on indexes of organ for 28 days in SD rats

表7 穿琥寧注射液對SD大鼠長期毒性試驗(yàn)恢復(fù)期臟器指數(shù)的影響Table7 The effect of injection potassium dehydroandrograpolide succinate on indexes of organ du ring recovery in SD rats

3 討論

穿琥寧為抗菌抗病毒類藥物,主要用于腸道、呼吸道感染,具有解熱、抗菌、抗炎、抗病毒、鎮(zhèn)靜作用。穿琥寧注射液抗病毒機(jī)制是脫水穿心蓮內(nèi)酯琥珀酸半酯單鉀鹽占據(jù)病毒復(fù)制過程中DNA與蛋白質(zhì)結(jié)合位點(diǎn),阻止蛋白質(zhì)對DNA片段的包裹從而使病毒不能正常復(fù)制,最終達(dá)到抑制和殺滅病毒的作用[9]。本試驗(yàn)表明,穿琥寧注射液分別按 LD50的1/10、1/50、1/100對SD大鼠連續(xù)給藥28 d,各劑量組大鼠狀態(tài)良好,生長正常,未出現(xiàn)中毒癥狀及死亡,體重、血液學(xué)指標(biāo)、血液生化學(xué)指標(biāo)、臟器指數(shù)與對照組相比均無明顯差異。本試驗(yàn)結(jié)果表明穿琥寧注射液連續(xù)給藥28 d大鼠無不良反應(yīng),停藥14 d后,亦未出現(xiàn)遲發(fā)性不良反應(yīng)。王秀珍等[9]對穿琥寧注射液治療急性支氣管炎的臨床研究表明,穿琥寧治療前后血小板、BUN、A LT、AST均無明顯改變,此結(jié)論與本試驗(yàn)結(jié)論一致。

[1]四川醫(yī)學(xué)院.中草藥學(xué)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,1979:343.

[2]鄧文龍,劉家玉,聶仁吉.十三種穿心蓮注射液的藥理作用比較研究(Ⅰ)——解熱、抗炎作用及毒性[J].中國中藥雜志,1985(7):16-19.

[3]曾 艷,賀月林,陳 薇,等.穿琥寧注射液的急性毒性試驗(yàn)[J].動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展,2009,30(1):53-54.

[4]農(nóng)業(yè)部獸藥審評委員會(huì)辦公室.獸藥試驗(yàn)技術(shù)規(guī)范匯編[G].北京:農(nóng)業(yè)部獸藥審評委員會(huì)辦公室,2001.

[5]馬仁強(qiáng),王紅星,陳健文.中藥注射劑長期毒性試驗(yàn)研究問題探討[J].中藥藥理與臨床,2004,24(5):45-48.

[6]袁伯俊,顧長紅.新藥長期毒性實(shí)驗(yàn)的劑量設(shè)計(jì)[J].國外醫(yī)學(xué):藥學(xué)分冊,1997,24(2):97-100.

[7]李建榮,黃芳華.中藥新藥長期毒性實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)及常見問題分析[J].中國新藥雜志,2004,13(9):769-772.

[8]王 麗,劉宏偉,宋 鐵,等.穿琥寧針劑的研究與臨床應(yīng)用[J].中醫(yī)藥信息,1998,15(1):9-10.

[9]王秀珍,李 杰,林先毅,等.穿琥寧注射液治療急性支氣管炎臨床研究[J].中國中醫(yī)急癥,2002,10(5):363-364.