許景景，吳纖愫

(浙江省舟山市食品藥品檢驗(yàn)所，浙江 舟山 316000)

吐瀉肚痛膠囊由木香、茯苓、赤石脂、厚樸、甘草等9味中藥制成，具有化氣消滯、去濕止瀉功效，用于治療濕熱積滯引起的肚痛泄瀉、暈眩嘔吐。其藥品標(biāo)準(zhǔn)中僅有常規(guī)檢查項(xiàng)[1]。為了確保產(chǎn)品的質(zhì)量，筆者采用高效液相色譜(HPLC)法測定該制劑的厚樸酚及和厚樸酚含量，報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

Agilent 1200型HPLC系統(tǒng)(美國安捷倫公司);SB3000型超聲處理器(上海必能信公司)。厚樸酚對照品(批號為110729-200208)，和厚樸酚對照品(批號為110730-200609)均來自中國藥品生物制品檢定所;乙腈、甲醇(色譜純)，水(重蒸餾水)，其他試劑(分析純);吐瀉肚痛膠囊(廣東嘉應(yīng)制藥股份有限公司，批號分別為 20080702，20080911，20081110)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱:Zorbxa SB-C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);柱溫:25℃;檢測波長:294 nm;流動相:乙腈-甲醇-水(20∶60∶20);流速:1.0 mL/min;進(jìn)樣量:10 μL。

2.2 溶液制備

精密稱取厚樸酚對照品12.28 mg，置100 mL量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成質(zhì)量濃度為122.8 μg/mL的厚樸酚對照品溶液;精密稱取和厚樸酚對照品11.09 mg，置100 mL量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成質(zhì)量濃度為110.9 μg/mL的和厚樸酚對照品溶液。取裝量差異項(xiàng)下的本品，研細(xì)，取約0.3 g，精密稱定，置50 mL量瓶中，加甲醇40 mL，超聲處理(功率400 W，頻率50 kHz)30 min[2]，放冷，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液即得供試品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

專屬性試驗(yàn):取厚樸陰性樣品，按供試品溶液制備法制備陰性對照品溶液并測定。結(jié)果在和厚樸酚和厚樸酚對照品出峰處未出現(xiàn)色譜峰，表明陰性對照品溶液中的組分不干擾厚樸酚及和厚樸酚的測定。

圖1 高效液相色譜圖

線性關(guān)系考察:精密量取厚樸酚對照品溶液(122.8 μg/mL)1，2，2.5，3，4，5，10 mL，置 10 mL 量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，各取10 μL注入色譜儀，測定峰面積 Y，得回歸方程 Y=29.532 X+59.181，r=0.999 2。結(jié)果表明，其質(zhì)量濃度在 12.28 ～122.8 μg/mL范圍內(nèi)與峰面積有良好的線性關(guān)系。精密量取和厚樸酚對照品溶液(110.9 μg/mL)1，2，2.5，3，4，5，10 mL，置 10 mL 量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，各取10 μL注入色譜儀，測定峰面積 Y，得回歸方程Y=35.303 X+49.841，r=0.999 3。結(jié)果表明，其質(zhì)量濃度在11.09～110.9 μg/mL范圍內(nèi)與峰面積有良好的線性關(guān)系。

精密度試驗(yàn):精密吸取厚樸酚和和厚樸酚對照品溶液，分別重復(fù)進(jìn)樣6次，測定。結(jié)果厚樸酚和和厚樸酚峰面積的 RSD分別為0.6%和0.9%(n=6)。

穩(wěn)定性試驗(yàn):按上述色譜條件，每隔一定時(shí)間，精密量取供試品溶液10 μL，注入高效液相色譜儀，測定峰面積。結(jié)果在10 h內(nèi)樣品中厚樸酚及和厚樸酚峰面積積分值的 RSD分別為0.7%和1.2%(n=7)。

重復(fù)性試驗(yàn):取同一批樣品(批號為20080702)樣品6份，依法測定峰面積并計(jì)算含量(mg/g)。結(jié)果厚樸酚的平均含量為5.43mg/g，RSD為1.0%(n=6);和厚樸酚的平均含量為6.09mg/g，RSD為0.9%(n=6)。

加樣回收試驗(yàn):精密稱取已知含量的樣品(批號為20080702)0.2，0.3，0.4 g，各 3份，分別精密加入厚樸酚對照品 1.134，1.697，2.262 mg 及和厚樸酚對照品 1.496，2.280，3.040 mg，按供試品溶液制備法制備溶液并依法測定。結(jié)果見表1。

表1 厚樸酚與和厚樸酚加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n=9)

2.4 樣品含量測定

依法測定了3批樣品，結(jié)果厚樸酚含量分別是5.43，5.07，5.52 mg/g，和厚樸酚含量分別為 6.09，5.84，6.28 mg/g。

3 討論

參照2005年版《中國藥典(一部)》中厚樸、藿香正氣水、人參再造丸等厚樸酚及和厚樸酚的含量測定方法，分別以甲醇[3]、稀乙醇[4]為提取溶劑，對超聲和浸漬[5]兩種提取方式進(jìn)行了考察，發(fā)現(xiàn)甲醇的提取效果較徹底，而超聲和浸漬的提取效果相差不多，考慮到超聲提取較為簡便，最終確定以甲醇為提取溶劑，對樣品超聲提取30 min。

比較了 Diamonsil C18柱、Zorbxa SB-C18柱、Kromasil 100-5 C18柱 3種色譜柱(均為 250 mm ×4.6 mm，5 μm)，結(jié)果發(fā)現(xiàn) Zorbxa SB-C18柱對樣品中和厚樸酚與厚樸酚的分離效果最佳。

考察了乙腈-水(50∶50)、甲醇-水(90∶10)和乙腈-甲醇-水(20∶60∶20)3種流動相，結(jié)果采用最后一種流動相時(shí)分離度較好，且保留時(shí)間適中。

[1]WS3-B-2315-97，衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)·中藥成方制劑(第十二冊)[S].

[2]龍曉蕾，劉 高，陳 曦，等.厚樸酚與和厚樸酚的超聲提取工藝研究[J].湖南農(nóng)業(yè)科學(xué)，2009(5):99-101.

[3]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2005:176，661，313.

[4]郭麗冰，趙麗華.HPLC測定不同來源姜制厚樸中厚樸酚及和厚樸酚的含量[J].中國現(xiàn)代中藥，2006，8(9):17-19.

[5]蘇 健，王寶琴.厚樸及其制劑中厚樸酚、和厚樸酚含量測定方法研究綜述[J].中國中醫(yī)藥信息雜志，2002，9(9):35-37.