史宏妍，潘成學(xué)(1.河南省中醫(yī)院，鄭州市450003；2.鄭州大學(xué)藥學(xué)院，鄭州市450001)

六味地黃丸源于宋代錢乙所著的《小兒藥證真訣》，由熟地黃、山茱萸、牡丹皮、山藥、茯苓、澤瀉組成，具有滋陰補腎功效，可以達到脾、肝、腎三陰同補的效果，通常用來治療小兒先天不足，發(fā)育遲緩等病癥。膏滋劑系中醫(yī)長期習(xí)慣用于治療慢性病的一種浸出藥劑，對久病體虛者具有滋補作用，結(jié)合二者的特點，筆者把六味地黃制成膏滋劑。丹皮酚是牡丹皮的主要有效成分，也是質(zhì)量控制的主要指標(biāo)之一，為進一步完善該制劑質(zhì)量控制方法，筆者采用高效液相色譜(HPLC)法測定該膏滋劑中丹皮酚的含量，方法簡便易行，結(jié)果準(zhǔn)確可靠。

1 儀器與試藥

2695型Separations Module高效液相色譜儀、Empower數(shù)據(jù)采集系統(tǒng)(美國Waters公司)；純水器(美國Millipore公司)。甲醇為色譜純(天津市四友精細(xì)化學(xué)品有限公司)；丹皮酚對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號:0908-9704)；六味地黃丸膏滋劑取自本醫(yī)院制劑；水為超純水，其它試劑為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

填充劑:十八烷基硅烷鍵合硅膠；流動相:甲醇∶水＝70∶30；流速:0.8 mL·min－1；柱溫:25℃；進樣量:10 μL；檢測波長:274 nm。理論板數(shù)按丹皮酚峰面積計算≥3500[1]。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液制備:取丹皮酚對照品適量，精密稱定，加甲醇制成1 mL含0.020 mg的溶液，即得丹皮酚對照品溶液[2]。

2.2.2 樣品溶液制備:精密稱取六味地黃丸膏滋劑0.5 g，置于25 mL具塞錐形瓶中，精密加入甲醇10 mL，密塞，稱定，超聲提取30 min，放冷，加甲醇補足失重，搖勻，離心5 min，精密吸取上清液1 mL，置于10 mL量瓶中，用甲醇定容，混勻，即得[3]。

2.3 線性關(guān)系的考察

精密吸取對照品貯備溶液2.5、5.0、7.5、10.0、12.5 μL，依次注入液相色譜儀，記錄色譜圖。以丹皮酚進樣量(X，μg)為橫坐標(biāo)，以峰面積積分值(Y)為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為Y＝5081.61775X+5.69132，(r＝0.9999，n＝6)。結(jié)果表明，丹皮酚檢測濃度在50～300 μg·mL－1范圍內(nèi)與峰面積積分值具有良好線性關(guān)系。

2.4 精密度試驗

精密吸取對照品溶液重復(fù)進樣6次，每次10 μL，按“2.1”項下色譜條件重復(fù)6次，測定峰面積[4]。結(jié)果RSD＝1.37%(n＝6)，表明儀器精密度較好。

2.5 重復(fù)性試驗

精密稱取同一批樣品適量，共5份，分別按“2.2”項下方法制備供試品溶液，并進行色譜分析。結(jié)果，RSD＝1.62%，表明方法重復(fù)性良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗

精密稱取供試品溶液10 μL，分別于0、1、2、4、6、8、12、24 h進樣，測定。結(jié)果，RSD＝1.53%，表明供試品溶液24 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.7 空白對照試驗

按處方比例和樣品制備工藝制成不含丹皮酚陰性對照品，按“2.2”項下方法制成陰性對照品溶液并測定。結(jié)果，陰性對照品在丹皮酚吸收峰處無吸收峰，表明其對樣品測定無干擾[5]。

2.8 加樣回收試驗

精密稱取已知含量樣品(批號:20091003)適量，精密加入丹皮酚對照品溶液(0.572 mg·mL－1)1.0 mL，按“2.2”項下方法制備供試品溶液，平行6份，按“2.1”項下色譜條件測定樣品含量，計算加樣回收率[6]，結(jié)果見表1。

表1 加樣回收率試驗結(jié)果(n＝6)Tab 1Results of recovery test(n＝6)

2.9 樣品含量測定

取3批樣品，按“2.2”項下方法制備供試品溶液，取10 μL進樣，按上述方法測定樣品中的丹皮酚的含量，結(jié)果見表2。

表2 六味地黃丸膏滋劑丹皮酚含量測定結(jié)果(n＝3)Tab 2Content determination of paeonol in Liuwei dihuang soft extract(n＝3)

3 討論

隨著21世紀(jì)全球進入“崇尚自然”、“回歸自然”的健康新概念階段，人類疾病譜和醫(yī)療模式均發(fā)生了重大變化，加上合成藥物帶來的危害以及中藥、天然藥物等傳統(tǒng)藥物療法取得的明顯成效，均為中藥、天然藥物的發(fā)展帶來了良好的機遇。本品制劑具有處方確定、劑型成熟，原料充足、成本低廉，藥性滋潤、口感好、便于服用等諸多優(yōu)點。因此，該研究將其作為院內(nèi)制劑，成為老少皆宜、獨樹一幟的劑型。六味地黃膏滋劑成品較黏稠，為便于服用，應(yīng)用大口容器盛裝，容器應(yīng)洗凈，滅菌干燥后使用，以免生霉變質(zhì)。微生物檢測應(yīng)符合煎膏劑項下的各項檢查，在此不再羅列。分裝時應(yīng)待煎膏充分冷卻后再裝入容器，然后加蓋，切勿在熱時加蓋，以免水蒸氣冷凝后回入煎膏中，久貯后易產(chǎn)生霉變現(xiàn)象。本品制成膏滋劑后具有藥物濃度高、體積小、穩(wěn)定性好等諸多優(yōu)點，且制劑工藝簡便，質(zhì)量穩(wěn)定可控，療效較為顯著。

[1]國家藥典委員會編.中華人民共和國藥典(一部)[S].2010年版.北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:599.

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