謝朝暉，王宇紅，房 赤，唐 應(yīng)

（湖南中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院，湖南長沙 410007）

婦寧洗劑由蛇床子、龍膽草、百部、地膚子、黃柏、敗醬草等組成，具有清熱解毒、消炎止痛、殺蟲止癢、消腫止痛的功效，臨床用于霉菌、滴蟲、細(xì)菌性陰道炎、宮頸炎、外陰瘙癢、濕疹及淋病的輔助治療,具有較好療效。為了進(jìn)一步證實(shí)其抗菌、消炎、止癢作用，就其藥效學(xué)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究,為臨床提供理論依據(jù)，現(xiàn)報(bào)道如下：

1 材料與試藥

1.1 材料

健康ICR雄性小鼠[50只，體重：8～22 g，上海西普爾-必凱實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司，許可證號(hào)：SCXK（滬）2003-0002，合格證號(hào)：0029731]；SD 系 SPF 級(jí)雄性大鼠[50 只，體重：180～220 g，上海西普爾-必凱實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司，許可證號(hào)：SCXK（滬）2003-0002，合格證號(hào)：0029731]；普通級(jí)豚鼠[40 只，雌雄各半，體重：200～250 g，長沙開福區(qū)東創(chuàng)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科技服務(wù)部，許可證號(hào)：scxk（湘）2006-0001，合格證號(hào)：002606]；實(shí)驗(yàn)動(dòng)物環(huán)境設(shè)施合格證號(hào)：SYXK（湘）2003-0001。

1.2 試藥

婦寧洗劑（本實(shí)驗(yàn)室配制）；潔爾陰洗液（成都恩威制藥有限公司，國藥準(zhǔn)字 Z10930008，批號(hào)：0806026）；氨芐青霉素（華北藥業(yè)股份集團(tuán)，1 g 干粉/瓶，批號(hào)：20080721）；氟康唑（湖南康普藥業(yè)有限公司，50 mg/粒，批號(hào)：20080201）；金黃色葡萄球菌（編號(hào)：26001，湖南省疾控中心的保存菌種）；大腸埃希菌（編號(hào)：44136，湖南省疾控中心的保存菌種）；消化道鏈球菌（臨床分離菌，湘雅醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)室）；白色念球菌、變形桿菌、淋病雙球菌均為臨床分離株（湖南中醫(yī)藥大學(xué)微生物教研室）；金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、變形桿菌均采用普通營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，消化道鏈球菌、淋病雙球菌采用血瓊脂培養(yǎng)基，白色念珠菌采用沙氏培養(yǎng)基。

2 方法與結(jié)果

2.1 抗感染作用

2.1.1 對(duì)二甲苯致小鼠耳廓炎癥腫脹的抑制作用 取ICR雄性小鼠50只，隨機(jī)分成5組，分別為空白對(duì)照組（蒸餾水）、潔爾陰組、婦寧洗劑低、中、高劑量組（1.0、2.0、4.0 g/kg）。用乙醚淺麻小鼠，將20 μl二甲苯涂于右耳兩面，30 min按表1劑量將相應(yīng)藥物涂于右耳兩面，15 min后處死動(dòng)物，沿耳廓基線剪下兩耳，用8 mm打孔器在兩耳同一部位打下圓耳片，立即稱重，計(jì)算腫脹率=（右耳重量-左耳重量）/左耳重量×100%。結(jié)果見表1。由表1可知，與空白對(duì)照組比較，婦寧洗液高、中劑量組動(dòng)物耳緣腫脹率有顯著性差異，其耳緣腫脹明顯減輕，其低劑量組也有減輕趨勢，表明婦寧洗劑對(duì)二甲苯引起的小鼠耳緣腫脹有明顯治療作用，具有較好的抗感染作用。

2.1.2 對(duì)角叉菜致炎大鼠足跖腫脹的抑制作用 取雄性SD系SPF級(jí)大鼠，體重180～220 g，隨機(jī)分成5組，分別為空白對(duì)照組、潔爾陰組、婦寧洗劑低、中、高劑量組（0.7、1.4、2.8 g/kg），將相應(yīng)藥物涂于大鼠足部，每天1次，連續(xù)3 d，第3天測定每只大鼠右后足跖厚度為致炎前足跖厚度，于末次給藥后1 h，每只大鼠右后足跖皮下注射1%角叉菜混懸液（0.05 ml/只），隨后每隔1 h測定足跖厚度1次，用游標(biāo)卡尺測量膝關(guān)節(jié)下1 cm處足跖中央厚度，連續(xù)5次，計(jì)算腫脹率并加以比較。腫脹率=（致炎后足跖厚度－致炎前足跖厚度）/致炎前足跖厚度×100%。結(jié)果見表2。由表2可知，與空白對(duì)照組比較，婦寧洗劑中、高劑量組大鼠足跖腫脹率在2～4 h內(nèi)均有顯著性差異，其腫脹率明顯降低，表明對(duì)角叉菜致大鼠足跖腫脹有明顯的抑制作用，可見婦寧洗劑可抑制由角叉菜引起的大鼠足跖腫脹，具有一定的抗感染作用。

表1 婦寧洗劑對(duì)小鼠耳緣腫脹的影響（）Tab.1 The effect on mouse ear swelling from Fu'ning Lotion()

表1 婦寧洗劑對(duì)小鼠耳緣腫脹的影響（）Tab.1 The effect on mouse ear swelling from Fu'ning Lotion()

與空白對(duì)照組比較，*P＜0.05

組別 劑量（g/kg） 耳腫脹左耳重（mg） 腫脹率（%）空白對(duì)照組DW22.1±2.676.5±8.9潔爾陰組2.521.7±2.563.3±19.0*婦寧洗劑低劑量組1.021.9±2.464.5±16.9婦寧洗劑中劑量組2.022.3±3.061.7±16.0*婦寧洗劑高劑量組4.022.5±3.660.5±17.2*

表2 婦寧洗劑對(duì)角叉菜致大鼠足跖腫脹的影響（）Tab.2 The effect on food-induced rat sole swelling mode by diagonal side from Fu'ning Lotion()

表2 婦寧洗劑對(duì)角叉菜致大鼠足跖腫脹的影響（）Tab.2 The effect on food-induced rat sole swelling mode by diagonal side from Fu'ning Lotion()

與空白對(duì)照組比較，*P＜0.05

組別 空白組 潔爾陰組 婦寧洗劑低劑量 中劑量 高劑量劑量（g/kg）DW2.00.71.42.8給藥前足跖厚（mm）4.9±0.35.0±0.55.0±0.25.2±0.35.1±0.2致炎后不同時(shí)142.6±12.041.9±5.141.9±14.939.9±5.443.6±5.9間的腫脹率(%)243.6±12.241.5±6.042.6±13.837.7±9.035.1±7.6346.2±10.740.1±8.541.2±11.337.7±7.236.8±7.2*446.8±10.437.1±8.6*38.8±10.535.9±12.1*36.2±9.2*544.3±11.136.5±10.038.1±11.932.9±13.636.3±9.3640.7±12.030.6±12.331.5±13.329.8±14.829.8±14.5

2.2 止癢作用

對(duì)組織胺致豚鼠局部瘙癢的影響進(jìn)行試驗(yàn)。普通級(jí)豚鼠40只，雌雄各半，體重200～250 g，按體重隨機(jī)分成5組，每組8只，分別為模型對(duì)照組、陽性對(duì)照組（潔爾陰洗液）、婦寧洗劑組3個(gè)劑量組（相當(dāng)于臨床擬用劑量的0.5、1、2倍）。用粗砂紙擦傷右后足背部剃毛處（面積：1 cm2），局部再給藥1次，末次給藥后10 min除去受試物，在創(chuàng)面處滴0.01%磷酸組織胺（0.05 ml/只），此后每隔 3 min 依 0.01%，0.02%，0.03%，0.04%……遞增濃度，每次均為0.05 ml/只，直至出現(xiàn)豚鼠回頭舔右后足為止。實(shí)驗(yàn)前2天各豚鼠右后足剃毛，并涂藥，每日2次，連續(xù)2 d。第3天用粗砂紙擦傷右后足背部剃毛處（面積：1 cm2），局部再給藥1次，末次給藥后10 min除去受試物，按造模方法，累計(jì)各組豚鼠所用磷酸組織胺總量為致癢閾（μg）。結(jié)果見表3。由表3可知，婦寧洗劑能顯著提高磷酸組織胺對(duì)豚鼠致癢反應(yīng)的致癢閾，經(jīng)組間t檢驗(yàn)，與空白對(duì)照組比較，有非常顯著性差異。結(jié)果提示婦寧洗劑有明顯的止癢作用。

2.3 體外抑菌作用

2.3.1 瓊脂平板擴(kuò)散法（打孔法） 取37℃培養(yǎng)24 h的金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、變形桿菌、消化道鏈球菌、淋病雙球菌，28℃培養(yǎng)48 h的白色念球菌。無菌平皿先倒入下層瓊脂培養(yǎng)基，待干后，再倒入上層含菌培養(yǎng)基，用直徑6 mm打孔器打孔，抗菌試驗(yàn)時(shí)用藥物原液，每個(gè)菌種每次做3孔/平皿，重復(fù)3次。同時(shí)設(shè)培養(yǎng)基對(duì)照、加菌不加藥的陽性對(duì)照。結(jié)果見表4。

表3 婦寧洗劑對(duì)組胺致豚鼠局部癢閾值的影響（）Tab.3 The effect on guinea pig's localized itching threshold mode by histamine from Fu'ning Lotion()

表3 婦寧洗劑對(duì)組胺致豚鼠局部癢閾值的影響（）Tab.3 The effect on guinea pig's localized itching threshold mode by histamine from Fu'ning Lotion()

與模型對(duì)照組比較，*P≤0.05

組別 致癢閾（μg）空白對(duì)照組68.75±24.70潔爾陰洗液組135.63±47.84*婦寧洗劑組146.25±38.70*婦寧洗劑組140.00±30.89*婦寧洗劑組98.75±25.98

2.3.2 試管法 取細(xì)菌同上。藥物用液體培養(yǎng)基作對(duì)倍稀釋，濃度分別為 1∶1、1∶2、1∶4、1∶8、1∶16、1∶32、1∶64。 于試管加入稀釋后的被試藥液，再加入等量菌液。同時(shí)設(shè)培養(yǎng)基對(duì)照、加菌不加藥的陽性對(duì)照。試管法每菌2管，重復(fù)3次。結(jié)果見表5。

表4 瓊脂擴(kuò)散法的檢測抑菌環(huán)結(jié)果（mm）Tab.4 The detection of antimicrobial rings results of agar diffusion method(mm)

表5 試管法檢測的最低抑菌濃度（MIC，n=6）Tab.5 Tube minimum inhibitory of concentration detection(MIC,n=6)

由表4、5可知，婦寧洗劑對(duì)以上細(xì)菌具有一定的體外抑制作用。

3 討論

陰道炎、外陰瘙癢癥是婦科常見、多發(fā)病,中醫(yī)學(xué)認(rèn)為,此類疾病多由濕熱、蟲蝕或肝腎陰虛所致,發(fā)病時(shí)陰癢難忍,伴灼熱刺痛,白帶多且有濃臭味等。方中蛇床子、龍膽草、敗醬草清熱解毒、燥濕,地膚子利小便，清濕熱。黃柏善清下焦?jié)駸?、解毒，蛇床子、百部等共助化濕殺蟲止癢之功，諸藥配伍具有清熱解毒、消炎止痛、殺蟲止癢之功。

現(xiàn)代藥理研究證明，本方中多味藥所含的有效成分具有殺菌、止癢、殺蟲的功效，如蛇床子的止癢有效成分R2具有拮抗組胺和抑制肥大細(xì)胞脫顆粒以及止癢、抗感染、抗變態(tài)反應(yīng)等藥理作用，可用于急、慢性皮炎所致皮膚瘙癢和皮膚瘙癢癥的治療[3]。研究顯示敗醬草有抗菌作用；最低抑菌濃度（MIC）結(jié)果表明，金黃色葡萄球菌（13/27）、表皮葡萄球菌（18/22）的 MIC≤3.13 mg/ml,普通變形桿菌（2/2）,淋病奈瑟氏菌（2/2）的MIC≤0.78 mg/ml[4]。黃柏所含小檗堿對(duì)白喉?xiàng)U菌、草綠色鏈球菌、痢疾桿菌、鏈球菌、金黃色葡萄糖球菌有抑制作用[5]。龍膽有抗病原微生物和寄生蟲的作用。通過本文藥效學(xué)實(shí)驗(yàn),證明了該洗劑中諸藥合用具有抗菌、消炎、止癢的功效,為臨床應(yīng)用提供了理論依據(jù)。

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