譚志藝，劉永路

(廣東省云浮市藥品檢驗所，廣東 云浮 527300)

牛黃上清片由人工牛黃、大黃、連翹、黃芩、當(dāng)歸等19味中藥制成，具有清熱瀉火、散風(fēng)止痛的功效，可用于治療頭痛眩暈、目赤耳鳴、口舌生瘡、咽喉腫痛、大便燥結(jié)等[1]。該藥原標(biāo)準(zhǔn)中無連翹苷含量測定項，為有效控制其質(zhì)量，筆者采用高效液相色譜(HPLC)法測定方中連翹中連翹苷的含量，結(jié)果滿意。

1 儀器與試藥

Agilent 1200型高效液相色譜儀(美國安捷倫公司)。連翹苷對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號為110821－2007117);樣品1(鶴壁市中藥有限公司，批號為1004012);樣品2(鶴壁市中藥有限公司，批號為1004021);樣品3(河南省百泉制藥有限公司，批號為090312);乙腈(色譜純)，水(超純水)，其他試劑(分析純)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件[2]

色譜柱:Diamonsil(鉆石)C18柱(250 mm × 4.6 mm，5μm);流動相:乙腈－水(25 ∶75);檢測波長:230 nm;流速:1.0 mL/min;柱溫:30℃。理論板數(shù)按連翹苷峰計算達3500以上。

2.2 溶液制備

精密稱取連翹苷對照品適量，置量瓶中，用甲醇溶解并制成40 μg/mL的溶液即得對照品溶液。取牛黃上清片20片，除去糖衣，稱定總質(zhì)量，研細，混勻，精密稱取1.4 g，置具塞錐形瓶中，稱定質(zhì)量，精密加入甲醇25 mL，密塞，超聲處理30 min，取出，放冷，再稱定質(zhì)量，用甲醇補足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過，濾液蒸干，殘渣加水20 mL使溶解，用三氯甲烷振搖提取3次，每次20 mL，合并三氯甲烷液，回收至干，殘渣用50%甲醇溶解，轉(zhuǎn)移至5 mL量瓶中，加50%甲醇至刻度，濾過即得供試品溶液。按處方比例及工藝制備不含連翹的樣品適量，按供試品溶液制備方法制成陰性對照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

陰性干擾試驗:精密吸取對照品、供試品及陰性對照品溶液各10 μL，分別進樣測定。結(jié)果陰性對照品溶液色譜圖中在連翹苷峰相應(yīng)的保留時間附近無干擾峰檢出(圖1)。

圖1 高效液相色譜圖

線性關(guān)系考察:精密吸取質(zhì)量濃度為40 μg/mL的對照品溶液 1，2，5，8，15，25 μL，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖。以峰面積 Y為縱坐標(biāo)、連翹苷對照品進樣量 X為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程為 Y=71.307 X+0.1338，r=0.9999(n=6)。結(jié)果表明，連翹苷進樣量在 0.08 ～1.00 μg 范圍內(nèi)與峰面積有良好的線性關(guān)系。

精密度試驗:精密吸取對照品溶液10 μL，重復(fù)進樣6次，記錄色譜圖。結(jié)果峰面積的 RSD=0.23%(n=6)，表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗:精密吸取同一供試品溶液10 μL，分別在0，1，2，4，8，18，24 h 時測定峰面積。結(jié)果的 RSD 為 0.7%(n=7)，表明待測溶液至少在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

重現(xiàn)性試驗:取同一批號的樣品6份，依法測定。結(jié)果的 RSD為0.54%(n=6)，說明方法的重現(xiàn)性良好。

加樣回收試驗:精密稱取已知含量的樣品6份，分別精密加入連翹苷對照品適量，依法測定其含量，求出加樣回收率。結(jié)果見表1。

表1 連翹苷加樣回收試驗結(jié)果(n=6)

2.4 樣品含量測定

精密吸取對照品及供試品各10 μL，分別注入高效液相色譜儀，記錄峰面積，按外標(biāo)法計算含量。結(jié)果樣品1、樣品2、樣品3的連翹苷含量分別為 10.35，10.08，25.56 μg/片。

3 討論

筆者考察了甲醇、70%乙醇溶液、50%甲醇溶液3種提取溶劑，230 nm和277 nm兩種檢測波長，乙腈－水(25∶75)、乙腈－水－冰醋酸(25∶75∶0.1)兩種流動相。結(jié)果以甲醇溶液為提取溶劑、230 nm為檢測波長、乙腈－水(25∶75)為流動相的效果較好，在此條件下色譜分離和線性關(guān)系良好，重現(xiàn)性及回收率結(jié)果均符合要求。

[1]WS3－B－1509－93，衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)·中藥成方制劑(第八冊)[S].

[2]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2005:589.