劉春鳳，盧春鳳，鄒輝，奚克敏

1.佳木斯大學(xué) 藥理教研室， 黑龍江佳木斯 154007;

2.牡丹江醫(yī)學(xué)院紅旗醫(yī)院 超聲科，黑龍江 牡丹江 157011；

3.牡丹江醫(yī)學(xué)院 藥學(xué)院，黑龍江牡丹江 157011

乳腺癌MCVD與MVD檢測及VEGF-C表達(dá)的關(guān)系

劉春鳳1,2，盧春鳳1，鄒輝3，奚克敏2

1.佳木斯大學(xué) 藥理教研室， 黑龍江佳木斯 154007;

2.牡丹江醫(yī)學(xué)院紅旗醫(yī)院 超聲科，黑龍江 牡丹江 157011；

3.牡丹江醫(yī)學(xué)院 藥學(xué)院，黑龍江牡丹江 157011

目的 探討乳腺癌能量多普勒血流信號平均密度（MCVD）與微血管密度（MVD）及血管內(nèi)皮生長因子-C（VEGF-C）表達(dá)的關(guān)系。方法 采用能量多普勒超聲成像檢測乳腺癌腫塊內(nèi)MCVD。采用免疫組化SP法檢測35例乳腺癌中VEGF-C的表達(dá)，并用CD34標(biāo)記新生血管內(nèi)皮細(xì)胞，計算乳腺癌腫塊內(nèi)MVD。結(jié)果 VEGF-C在乳腺癌組織中的陽性表達(dá)率顯著高于乳腺結(jié)節(jié)樣增生組織（P＜0.01），乳腺癌腫塊中MVD、MCVD明顯增高（P＜0.01），VEGF-C 表達(dá)強度與MVD呈正相關(guān)（P＜0.01），MVD與MCVD呈正相關(guān)（P＜0.01）。結(jié)論 血管生成是與VEGF-C表達(dá)密切相關(guān)，通過能量多普勒超聲成像技術(shù)與MVD、VEGF-C檢測結(jié)合，能很好地評估乳腺癌血管生成。

超聲診斷儀；乳腺癌；能量多普勒；微血管密度；血管內(nèi)皮生長因子-C

乳腺癌是女性常見惡性腫瘤之一，如何提高早期乳腺癌的臨床診斷率，已成為廣大臨床工作者普遍關(guān)注的問題。目前臨床常用的乳腺癌篩查方法主要是采用彩色多普勒超聲及鉬靶檢查，但如單獨采用此兩種方法，則各自均存在一定的局限性。本研究通過能量多普勒超聲成像技術(shù)與免疫組化檢測技術(shù)結(jié)合，探討病灶彩色血流信號平均密度（mean color vessel density，MCVD）與微血管密度（microvessel density，MVD）及血管內(nèi)皮生長因子-C（vascular endothelial growth factor-C，VEGF-C）的關(guān)系，為臨床上進一步了解乳腺癌腫瘤血管生成情況及判斷預(yù)后提供理論依據(jù)和指導(dǎo)，以期對臨床早期診斷及鑒別診斷乳腺癌起到一定的指導(dǎo)作用。

1 資料和方法

1.1 臨床資料

篩選我院2007～2009年普外科收治的術(shù)后病理證實為乳腺癌的患者35例，年齡33～66歲，平均46歲。另選擇乳腺結(jié)節(jié)樣增生癥患者10例作為對照。

1.2 試劑

鼠抗人VEGF-C多克隆抗體、鼠抗人CD34單克隆抗體（均為工作液）、SP免疫組化超敏染色試劑盒均購自福州邁新生物技術(shù)有限公司。

1.3 能量多普勒超聲檢測乳腺腫塊內(nèi)MCVD

應(yīng)用儀器設(shè)備為東芝阿波羅型超聲診斷儀，探頭頻率為7.5～10 MHz。選用乳腺常規(guī)檢測程序，重點觀察腫塊的位置、大小，形態(tài)、內(nèi)部回聲、周圍回聲等聲像圖特征。對腫塊利用CAD圖像處理系統(tǒng)進行處理，對腫塊內(nèi)的血管平均密度記錄，分析。

1.4 免疫組織化學(xué)法檢測乳腺癌組織中VEGF-C和MVD

采用免疫組織化學(xué)SP法，實驗操作按試劑盒說明書進行。用已知陽性片作為陽性對照，用磷酸鹽緩沖液（PBS）代替第一抗體作為陰性對照。

結(jié)果判定：VEGF-C主要為胞質(zhì)著色，少數(shù)為胞核著色，以胞內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒的細(xì)胞為陽性細(xì)胞。判定標(biāo)準(zhǔn)為：以陽性細(xì)胞率＞25%為陽性表達(dá)（+），陽性細(xì)胞率≤25%為陰性表達(dá)（-）。微血管密度：先在低倍視野下找腫瘤組織內(nèi)微血管密度最高的區(qū)域，然后在200倍視野下計數(shù)微血管3個視野的數(shù)目，再將總數(shù)除以3，取其平均值作為該腫瘤高倍視野下的MVD。

1.5 統(tǒng)計學(xué)處理

應(yīng)用SPSS11.0軟件進行統(tǒng)計分析。采用χ2、t檢驗和等級相關(guān)分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 乳腺癌和乳腺結(jié)節(jié)樣增生癥組中的MCVD和MVD

乳腺癌組中的MCVD和MVD明顯增多，與乳腺結(jié)節(jié)樣增生癥組比較，差異有顯著統(tǒng)計學(xué)意義（P ＜0.01）（見表1）。

表 1 乳腺癌和乳腺結(jié)節(jié)樣增生癥組中的MCVD和MVD

2.2 VEGF-C在乳腺癌和乳腺結(jié)節(jié)樣增生癥組織中的表達(dá)

VEGF-C在乳腺癌組織中的陽性表達(dá)率為57.14 %，明顯高于乳腺結(jié)節(jié)樣增生癥組織中的表達(dá)率，差異有顯著統(tǒng)計學(xué)意義（P ＜0.01）（見表2）。

表 2 VEGF-C在乳腺癌和乳腺結(jié)節(jié)樣增生癥組織中的表達(dá)

2.3 乳腺癌MVD與VEGF-C表達(dá)、MCVD的關(guān)系

VEGF-C陽性表達(dá)的乳腺癌MVD明顯高于其陰性表達(dá)組 (P＜0.01)。相關(guān)分析結(jié)果顯示，乳腺癌中MVD與MCVD呈正相關(guān)（r＝0.478，P＜ 0.01）。

3 討論

目前，國內(nèi)外學(xué)者研究彩色多普勒下乳腺癌的較多，普遍認(rèn)為CDFI可以較靈敏直觀地顯示良惡性腫瘤血管狀況上的差異，我們對上述40例乳腺良惡性腫瘤患者的CDFI檢查發(fā)現(xiàn)，乳腺癌的血管顯示率89%，結(jié)節(jié)樣增生的檢出率為39%，二者有顯著差異，良性腫塊血管檢出率較高，這點與Hamada[1]的結(jié)果相似。因此，正如國內(nèi)外學(xué)者普遍認(rèn)為的單存依靠血管的檢出率診斷乳腺癌有一定的局限性，Cosgrove[2]等對血流的信號的數(shù)量進行定量化。本研究立足于能量多普勒血管平均密度（MCVD）,探求其與MVD及VEGF三者間的關(guān)系。近年來研究表明人類實體腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移均需要血管生成[3,4]，腫瘤微血管密度是評估患者轉(zhuǎn)移及預(yù)后的重要指標(biāo)。MVD是目前用以衡量腫瘤新生血管程度的常用標(biāo)志，也是反映惡性腫瘤生物學(xué)行為的重要參考指標(biāo)[5]。

本研究發(fā)現(xiàn)，與乳腺結(jié)節(jié)樣增生癥組相比，乳腺癌組中的MVD明顯增多，表明乳腺癌組中有大量的新生血管。乳腺癌的新生血管是腫瘤自身分泌的血管生長因子誘導(dǎo)而成的，目前人們已經(jīng)發(fā)現(xiàn)多種血管生成誘導(dǎo)因子中VEGF-C被認(rèn)為是促血管生成作用最強的血管生長因子，在腫瘤血管形成過程中起重要作用[6]。VEGF-C與其受體結(jié)合后，可釋放各種生長因子及細(xì)胞因子，并以多種方式促進腫瘤血管生成，從而為腫瘤的浸潤、轉(zhuǎn)移創(chuàng)造條件[7,8]。本研究結(jié)果顯示，乳腺結(jié)節(jié)樣增生癥組織中VEGF-C表達(dá)較低，乳腺癌組織中的表達(dá)增加，表明隨著病變的進展VEGF-C陽性表達(dá)逐漸增加。提示VEGF-C可能參與乳腺癌的發(fā)生過程。同時本研究結(jié)果表明，乳腺癌微血管大量新生，并且VEGF-C陽性表達(dá)者MVD明顯高于VEGF-C陰性表達(dá)者，提示VEGF-C與乳腺癌微血管形成密切相關(guān)。術(shù)前對腫瘤良惡性評價，無創(chuàng)性且能在活體上對血管生成進行評估的檢測技術(shù)具有明顯的臨床意義。近年來，陸續(xù)有應(yīng)用彩色多普勒超聲檢測腫瘤內(nèi)MCVD，評估腫瘤血管生成的報道[9,10]。

本研究發(fā)現(xiàn)，能量多普勒超聲成像技術(shù)檢測MCVD與免疫組化技術(shù)標(biāo)記腫瘤組織內(nèi)微血管測定MVD具有一致性，即乳腺癌組中的MCVD明顯高于乳腺結(jié)節(jié)樣增生癥組，并且MVD也明顯高于乳腺結(jié)節(jié)樣增生癥組，二者呈正相關(guān)。MCVD可以精確地對腫瘤內(nèi)的血管進行定量性評定，可以更準(zhǔn)確地評價血管生成，從而使定量反映活體乳腺癌組織內(nèi)血管生成情況成為可能。但是盡管如此，現(xiàn)有多普勒超聲技術(shù)主要提供較大血管的信息，不可能檢測出較小的腫瘤新生血管，而MVD能精確地標(biāo)識腫瘤內(nèi)微血管，兩種方法結(jié)合將更能準(zhǔn)確反映腫瘤組織中血供情況。

本研究通過能量多普勒超聲成像技術(shù)與免疫組化技術(shù)檢測MVD、VEGF-C相結(jié)合，更能準(zhǔn)確反映腫瘤組織中血供情況，能很好地評估乳腺癌血管生成，且為臨床上進一步了解乳腺癌腫瘤血管生成情況及判斷預(yù)后提供理論依據(jù)和指導(dǎo)。

[1] Mirhio Hamada,et al．Color Doppler echography of breast diseases:Detection rate of color flow signals and significance of color Doppler echogaphy in breast disease．Jpn [J]．Med Utrasonincs,1992(3):19．

[2] DO Cosgrove,et al．Color Doppler signals from breast[J]．Radiology,1990,176:175．

[3] Folkman J．What is the evidence that tumors are angiogenesis dependent[J]． J Natl Cancer Inst,1990,82(1):4-7．

[4] Amaoka N,Saio M,Nonaka K,et al．Expression of vascular endothelial growth factor receptors is closely related to the histological grade of hepatocellular carcinoma[J]．Oncol Rep, 2006,16(1):3-10．

[5] 文耕云,裴雪濤．CD34的分子生物學(xué)研究進展[J]．實驗血液學(xué)雜志,1995,3(3):250-252．

[6] Veikkola T,Alitalo K．VEGFs, receptors and angiognesis[J]．Semin Cancer Biol,1999,9(3):211-220．

[7] Mitsuhashi N,Shimizu H,Ohtsuka M,et al．Angiopoietines and Tie-2 expression in angiogenesis and proliferation of human hepatocellular carcinoma[J]．Hepatology,2003,37(5):1105-1113．

[8] Tanaka S, Arii S． Current status and perspective of antiangiogenic therapy for cancer: hepatocellular carcinoma[J]．Int J Clin Oncol,2006,11(2):82-89．

[9] 李穎嘉,吳鳳林,龔渭冰,等．能量多普勒超聲對乳腺癌血管生成的檢測與PCNA表達(dá)及臨床病理因素的研究[J]．中國超聲醫(yī)學(xué)雜志, 2002,18(5):380-383．

[10] 龐貝,汪湛,黃?。S及彩色多普勒超聲診斷乳腺腫塊的臨床價值[J]．中華醫(yī)學(xué)雜志,2004,28(4):223-224．

Correlation between MCVD, MVD and VEGF-C Expression in Primary Breast Carcinoma using Power Doppler Imaging

LIU Chun-feng1,2, LU Chun-feng1, ZOU Hui3,XI Ke-min2

1.Pharmacology Teaching and Research Section,Jiamusi University, Jiamusi Heilongjiang 154007,China;
2.Department of Ultrasound,Hongqi Hospital Affiliated to Mudanjiang Medical College,Mudanjiang Heilongjiang 157011,China;
3.College of Pharmacy, Mudanjiang Medical College, Mudanjiang Heilongjiang 157011,China

Objective To investigate the relationships between mean color vessel density (MCVD), microvessel density (MVD) and the expressions of vascular endothelial growth factor-C (VEGF-C) in primary breast carcinoma. Methods MCVD was observed preoperatively using power Doppler imaging, the expression of VEGF-C in 35 cases of breast carcinoma was detected by immunohistochemistry SP method, and blood vessel endothelial cells were labelled by CD34 and MVD the breast carcinoma was assayed. Results The positive expression rates of VEGF-C was remarkably higher in breast carcinoma than those in breast nodular hyperplasia (P＜0.01), MVD and MCVD were significantly increased (P＜0.01). There were positive correlation between the expression intensity of VEGF and MVD, MVD and MCVD (P＜0.01). Conclusion Angiogenesis is closely correlated with the expression of VEGF-C in primary breast carcinoma. Joint use of power Doppler imaging and MVD, VEGF-C can illustrate the angiogenesis of a primary breast carcinoma.

ultrasound system;breast carcinoma; power Doppler imaging;microvessel density; vascular endothelial growth factor-C

R445.1

A

10.3969/j.issn.1674-1633.2010.04.010

1674-1633(2010)04-0026-03

2010-01-29

2010-03-30

本文作者：劉春鳳，在讀碩士研究生。

盧春鳳，副教授，博士，碩士研究生導(dǎo)師。

作者郵箱：ku_721@sina．com