張 琦,凌 偉,李 鑫,盧聯(lián)合,陳志海,李興旺

2009年3月墨西哥暴發(fā)甲型 H1N1流感疫情,隨后,全球多個(gè)國(guó)家出現(xiàn)疫情,2009-06-11世界衛(wèi)生組織 (WHO)將流感大流行警告級(jí)別提高至 6級(jí)。我國(guó)衛(wèi)生部也將其納入《中華人民共和國(guó)傳染病防治法》規(guī)定的乙類(lèi)傳染病,依照甲類(lèi)傳染病采取預(yù)防、控制措施。自 2009-05-15起,北京地壇醫(yī)院開(kāi)始收治甲型 H1N1流感患者,本研究通過(guò)檢測(cè)部分確診患者發(fā)病期和恢復(fù)期 T細(xì)胞亞群,并與健康對(duì)照者進(jìn)行比較,初步探討甲型 H1N1流感患者細(xì)胞免疫功能變化特點(diǎn)及其臨床指導(dǎo)意見(jiàn)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取 2009-05-15—2009-07-15于北京地壇醫(yī)院確診的甲型 H1N1流感患者 67例 (研究組),其中男38例,女 29例;年齡 4～60歲,平均 (20±14)歲。診斷標(biāo)準(zhǔn)及治愈標(biāo)準(zhǔn)參照衛(wèi)生部頒發(fā)的 《甲型 H1N1流感診斷治療方案 2009試行版第一版》[1]及衛(wèi)生部制定的 《甲型 H1N1流感出院標(biāo)準(zhǔn)》[2]。排除存在血液病史、免疫系統(tǒng)病史及其他影響血液細(xì)胞改變疾病者。同時(shí)選擇健康體檢者 40例作為對(duì)照組,其中男 23例,女 17例,年齡 23～36歲,平均 (30±4)歲。

1.2 標(biāo)本采集及病原學(xué)檢測(cè) 采集患者咽拭子標(biāo)本,送北京市疾病預(yù)防控制中心 (CDC)進(jìn)行病毒核酸檢測(cè),甲型 H1N1實(shí)驗(yàn)室診斷標(biāo)準(zhǔn):甲型流感病毒通用 (M基因)陽(yáng)性,豬H1N1流感病毒通用 (NP基因)陽(yáng)性,甲型 H1N1流感病毒特異 (HA基因)陽(yáng)性的標(biāo)本。

1.3 方法 患者均于發(fā)病期和恢復(fù)期采血,采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)外周血 CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞。除外合并其他感染性疾病。治療上單獨(dú)應(yīng)用奧司他韋者 19例,應(yīng)用奧司他韋加中草藥者 11例,單獨(dú)應(yīng)用中草藥者 10例,未應(yīng)用奧司他韋或中草藥僅對(duì)癥治療者 27例。同時(shí)檢測(cè)對(duì)照組的外周血 CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞,與研究組進(jìn)行比較。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用 SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,計(jì)量資料以 (x±s)表示,兩樣本資料的比較采用 t檢驗(yàn);多個(gè)樣本均數(shù)的比較采用單因素方差分析,各組間分析用 LSD-t檢驗(yàn)。以 P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

67例患者均恢復(fù)良好。

2.1 甲型 H1N1流感患者發(fā)病期、恢復(fù)期及對(duì)照組 T細(xì)胞亞群比較 研究組發(fā)病期、恢復(fù)期和對(duì)照組 CD4+T、CD8+T淋巴細(xì)胞絕對(duì)數(shù)比較,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P＜0.05)。其中研究組發(fā)病期 CD4+T、CD8+T淋巴細(xì)胞絕對(duì)數(shù)明顯低于恢復(fù)期和對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P＜0.05);恢復(fù)期與對(duì)照組CD4+T淋巴細(xì)胞絕對(duì)數(shù)間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P＞0.05),恢復(fù)期 CD8+T淋巴細(xì)胞絕對(duì)數(shù)多于對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P＜0.05,見(jiàn)表 1)。

2.2 不同治療方法對(duì)甲型 H1N1流感患者 CD4+、CD8

+T淋巴細(xì)胞的影響 不同治療方法的患者治療前后 CD4+、CD8

+T淋巴細(xì)胞絕對(duì)數(shù)的差值間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P＞0.05,見(jiàn)表2)。

3 討論

根據(jù)目前所掌握的資料,近期發(fā)生的甲型 H1N1流感是由變異后的新型甲型 H1N1流感病毒所引起的急性呼吸道傳染病。甲型 H1N1流感病毒屬于正粘病毒科,甲型流感病毒屬,為單股負(fù)鏈 RNA病毒,基因組約為 13.6 kb,由大小不等的 8個(gè)獨(dú)立片段組成[1]。該病毒傳染性較強(qiáng),人群普遍易感。通過(guò)飛沫、氣溶膠、直接接觸或間接接觸傳播,臨床主要表現(xiàn)為流感樣癥狀,少數(shù)病例病情重,病情進(jìn)展迅速,可出現(xiàn)病毒性肺炎,合并呼吸衰竭、多臟器功能損傷,嚴(yán)重者可以導(dǎo)致死亡。由于這種甲型 H1N1流感是一種新發(fā)疾病,其特點(diǎn)仍待進(jìn)一步觀察總結(jié)。

根據(jù)人外周血T淋巴細(xì)胞表面分子受體的表達(dá)不同,主要分為三大亞群:CD3+T、CD4+T和CD8+T淋巴細(xì)胞。CD4+T淋巴細(xì)胞主要為輔助性 T細(xì)胞 (Th),能促進(jìn) B細(xì)胞、細(xì)胞毒性 T淋巴細(xì)胞 (Tc)和其他免疫細(xì)胞的增殖及分化,調(diào)節(jié)體液免疫和細(xì)胞免疫;而 CD8+T淋巴細(xì)胞主要由細(xì)胞毒性 T淋巴細(xì)胞組成,是抗病毒感染的主要效應(yīng)細(xì)胞。有資料顯示,在抗流感病毒感染的過(guò)程中,CD4+T和CD8+T淋巴細(xì)胞發(fā)揮著重要作用[3-4]。正常情況下,CD4+T和CD8+T淋巴細(xì)胞相互作用,保持平衡,維護(hù)機(jī)體正常的免疫應(yīng)答。感染甲型 H1N1流感病毒后,由于 CD4+T淋巴細(xì)胞和 CD8+T淋巴細(xì)胞參與清除病毒的過(guò)程,因此在發(fā)病期 T細(xì)胞亞群數(shù)目發(fā)生變化。

表 1 甲型 H1N1流感患者發(fā)病期、恢復(fù)期與正常對(duì)照者 T細(xì)胞亞群比較(x ±s)Table 1 T lymphocyte subsets comparison among the H1N1 influenza patients in eruption,recovery stages and the healthy controls respectively

表 2 不同治療方法對(duì)CD 4+、CD 8+T淋巴細(xì)胞的影響Table 2 Effects of various medical treatments on CD4+、CD8+T lymphocyte

本研究表明甲型 H1N1流感患者在發(fā)病期 CD4+T淋巴細(xì)胞和CD8+T淋巴細(xì)胞絕對(duì)數(shù)均較對(duì)照組明顯下降,這提示CD+T、CD+T淋巴細(xì)胞參與了病毒清除的過(guò)程。另外 CD+484

T淋巴細(xì)胞可通過(guò)分泌 TFN-γ等細(xì)胞因子促進(jìn) Tc前體細(xì)胞分化成Tc[5],CD4+T淋巴細(xì)胞的減少使這一作用減弱。而患者在恢復(fù)期血 CD4+T和CD8+T淋巴細(xì)胞絕對(duì)數(shù)明顯多于發(fā)病期,其中 CD4+T淋巴細(xì)胞與對(duì)照組比較無(wú)明顯差異,CD8+T淋巴細(xì)胞較對(duì)照組有所增多,這表明甲型 H1N1流感病毒所致的免疫抑制是一個(gè)可逆過(guò)程,但 CD8+T淋巴細(xì)胞較對(duì)照組有所增多的臨床意義尚不明確。Powell等[4]的研究結(jié)果提示,在抗流感病毒感染的免疫過(guò)程中,CD4+T淋巴細(xì)胞數(shù)量達(dá)峰后,CD8+T淋巴細(xì)胞數(shù)量仍持續(xù)增多,并且在數(shù)量降低方面比CD4+T淋巴細(xì)胞要慢。可能由于 CD4+T和CD8+T淋巴細(xì)胞為了執(zhí)行不同的功能而被不同的機(jī)制所調(diào)節(jié)有關(guān)。

治療方面,本組 67例患者分別行單獨(dú)應(yīng)用奧司他韋、奧司他韋加中草藥、僅應(yīng)用中草藥及僅對(duì)癥治療 (未應(yīng)用奧司他韋或中草藥),各治療組在 CD4+T、CD8+T淋巴細(xì)胞變化方面無(wú)明顯差異,表明4種治療方法對(duì) T細(xì)胞亞群的影響沒(méi)有差異。

67例患者均恢復(fù)良好,未出現(xiàn)嚴(yán)重并發(fā)癥。但有資料表明,幼兒、孕婦和伴有免疫缺陷或某些嚴(yán)重疾病的患者有病情危重的傾向[6]。本研究顯示,在發(fā)病期,患者機(jī)體免疫力下降,因此在臨床工作中,對(duì)于某些特殊人群,應(yīng)及時(shí)應(yīng)用抗病毒藥物,適當(dāng)選用抗生素預(yù)防感染,也可以考慮免疫調(diào)節(jié)劑的使用,以改善預(yù)后。

本研究由于病例有限,尚需更大樣本的臨床研究來(lái)進(jìn)一步加以證實(shí)。

1 衛(wèi)生部.甲型 H1N1流感診療方案 (2009年試行版第一版)[EB/OL].http://www.moh.gov.cn/publicfiles/business/htmlfiles/mohyzs/s3585/200905/40478.htm.

2 衛(wèi)生部 .甲型 H 1N1流感確診病例出院標(biāo)準(zhǔn) [EB/OL].http://www.gov.cn/gzdt/2009-05/15/content_1315931.htm.

3 Brown DM,Román E,Swain SL.CD4T cell responses to influenza infection.Seminars in immunology[J].Semin Immunol,2004,16(3):171-177.

4 Powell TJ,Brown DM,Hollenbaugh JA,et al.CD8+T cells responding to influenza infection reach and persist at higher numbers than CD4+T cells independently of precursor frequency[J].Clinical Immunology,2004,113(1):89-100.

5 金伯泉.細(xì)胞和分子免疫學(xué) [M].北京:科學(xué)出版社,2001.

6 Novel swine-origin influenza A(H1N1)virus investigation team.Emergence of a novel swine-origin influenza A(H 1N1)virus in humans[J].The New England Journal of Medicine,2009,360:2605-2615.