鄒 曉， 羅 力， 張曉敏， 施 鳴， 楊 輝， 劉愛英＊

（1.貴州大學(xué)真菌資源研究所，貴陽 550025； 2.貴州大學(xué)昆蟲研究所，貴陽 550025；3.貴州中煙工業(yè)有限責(zé)任公司，貴陽 550004）

煙草甲蟲（Lasiodermaserricorne）是取食調(diào)制后煙葉的主要害蟲之一，它適應(yīng)熱帶氣候，為害加工過程中各種形態(tài)的煙草。我國在20世紀(jì)90年代曾對(duì)全國貯煙害蟲的為害程度進(jìn)行調(diào)查，每年因蟲害引起的質(zhì)（重）量損失率大約為1.64%［1］。由于國內(nèi)煙草系統(tǒng)提出生產(chǎn)綠色煙草的目標(biāo)，因此生物防治開始受到關(guān)注。在煙草甲蟲的生物防治研究中，蘇云金芽胞桿菌（Bt）對(duì)煙草甲有一定的殺蟲活性，但效果并不理想［2］。生防真菌作為經(jīng)過表皮入侵的殺蟲劑有其他殺蟲劑所不具備的優(yōu)點(diǎn)，沒有化學(xué)殺蟲劑的殘留毒害，也不像Bt農(nóng)藥必須經(jīng)過昆蟲口腔進(jìn)入腸道才能發(fā)揮作用［3］。煙草甲蟲的性引誘劑（主要成分為4，6－二甲基－7－羥基－3－壬酮）經(jīng)常作為煙草倉庫蟲情監(jiān)控的一種手段，目前已經(jīng)可以通過化學(xué)方法大量合成［4］，從經(jīng)濟(jì)上為應(yīng)用奠定了基礎(chǔ)。在室外也有一些白僵菌與性引誘劑聯(lián)合防治的成功案例［5］，但在煙倉或倉庫條件下將真菌與主要害蟲性引誘劑聯(lián)合使用的報(bào)道不多見。本文用白僵菌結(jié)合煙甲性誘劑和甲蟲發(fā)生規(guī)律在防治煙草甲方面做一些探索。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 供試菌株

球孢白僵菌（Beauveriabassiana）為貴州大學(xué)真菌資源研究所鑒定保存，保藏號(hào)：GZUIFR－GL5。白僵菌孢子培養(yǎng)基：麩皮80%，米糠10%，酒糟殼5%，玉米粉5%，等質(zhì)量水，滅菌備用。培養(yǎng)好的白僵菌，陰涼處風(fēng)干，過150目標(biāo)準(zhǔn)篩獲得孢子粉，孢子粉孢子含量約為4×1010個(gè)／g。

1.1.2 試驗(yàn)用蟲

試驗(yàn)對(duì)象為煙草甲蟲（Lasiodermaserricorne）。試驗(yàn)地點(diǎn)設(shè)在中煙公司貴陽卷煙廠南明區(qū)煙葉醇化庫和貴陽卷煙廠技術(shù)中心倉庫。

1.1.3 煙箱和誘芯

試驗(yàn)所用煙箱為200 kg裝煙葉的紙箱。煙草甲蟲誘芯片劑由武漢東昌倉儲(chǔ)技術(shù)有限公司出品，質(zhì)量分?jǐn)?shù)小于10%。

1.1.4 檢測用水盆

清水裝至水盆2／3處，水表面懸浮兩層紗布，使其吸水并浮于液面，煙草甲蟲能夠在其上爬行而不至于溺水，同時(shí)有利于觀察白僵菌產(chǎn)孢。

1.2 方法

1.2.1 貴陽地區(qū)煙草甲蟲發(fā)生規(guī)律調(diào)查

采用誘捕器調(diào)查成蟲蟲口情況，打開煙包對(duì)幼蟲蟲情進(jìn)行觀察［6］。

1.2.2 煙箱內(nèi)施菌

煙箱中的一側(cè)放置一些煙葉（2 kg左右），用單層醫(yī)用紗布包裹白僵菌孢子粉，以一小木棍輕輕敲打，使孢子逸散，在煙葉下部的煙箱側(cè)壁上貼2枚煙草甲蟲的性外信息素誘芯，再在煙箱內(nèi)的另一側(cè)放入一盆具紗布的清水。

1.2.3 煙草甲蟲帶菌擴(kuò)散能力的檢測

采用相同規(guī)格的煙箱，方法如1.2.2，不同之處在于不施加孢子粉?？瞻讓?duì)照，在其他倉庫的煙箱中只放置清水盆，無誘芯和孢子粉。為避免人為活動(dòng)帶菌，試驗(yàn)人員分組并在不同的倉庫進(jìn)行試驗(yàn)。

1.2.4 白僵菌致死甲蟲的檢測

甲蟲尸體變白，在顯微鏡下觀察到典型的球孢白僵菌的產(chǎn)孢結(jié)構(gòu)計(jì)為由白僵菌感染致死的甲蟲。蟲口死亡率為白僵菌感染致死的甲蟲占檢測總死蟲數(shù)量的百分比。

1.2.5 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

圖1中黑色部分為加有孢子粉的紙箱。每個(gè)倉庫孢子粉施用量都為5 g，1號(hào)庫施用孢子粉煙箱編號(hào)為E；2號(hào)庫施用的孢子粉煙箱為B、C各2.5 g；3號(hào)庫施用孢子粉的煙箱為 A、B、C、D（每箱用1.25 g）。對(duì)照庫煙箱位置只放在倉庫中的A、B兩處。

1.2.6 數(shù)據(jù)分析方法

試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS統(tǒng)計(jì)軟件中非參數(shù)卡方檢驗(yàn)分析。

圖1 醇化庫內(nèi)白僵菌粉與性誘劑使用位置示意圖

2 結(jié)果與分析

2.1 倉庫中各點(diǎn)白僵菌致死情況

表1中白僵菌對(duì)煙草甲蟲的致死率多在20%～30%，最高達(dá)61% 最低為0。在全部煙草甲蟲蟲尸中，可分為幾種死亡類型，自然死亡、白僵菌感染致死、白僵菌感染和其他因素混合致死、其他因素致死。在試驗(yàn)中檢測的只是白僵菌感染致死的數(shù)值指標(biāo)，對(duì)于其他可能的煙草甲致死指標(biāo)未進(jìn)行檢測，但也不能排除白僵菌在其中的作用。有文獻(xiàn)［6－7］記載白僵菌和化學(xué)農(nóng)藥共同防治害蟲有協(xié)同增效作用，白僵菌與其他煙草甲致死因子的協(xié)同增效作用，即直接致死和其他因素死亡之間的灰度區(qū)應(yīng)進(jìn)一步研究。另外在對(duì)照庫同樣檢測到白僵菌致死的甲蟲，一方面說明煙草甲跨庫擴(kuò)散能力很強(qiáng)，另一方面也可能是煙草甲自帶病原。在離試驗(yàn)地點(diǎn)較遠(yuǎn)的貴陽卷煙廠技術(shù)中心倉庫，用相同方法未檢測到白僵菌感染；同樣在醇化車間未施菌的密封煙箱內(nèi)收集煙草甲蟲尸保濕培養(yǎng)也未檢測到白僵菌，排除了煙草甲自帶病原白僵菌的可能。

表1 白僵菌致死煙草甲占總死蟲數(shù)的百分比1） %

表2是對(duì)表1數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果，從中可以看出：采用不同的分析方式，出現(xiàn)了截然相反的結(jié)果。在分析全部取樣點(diǎn)時(shí)，各樣本點(diǎn)的煙草甲死亡率差異均極顯著，且每個(gè)倉庫都有一個(gè)最高值（見表1）。經(jīng)過對(duì)倉庫實(shí)地調(diào)查發(fā)現(xiàn)，死亡率最高的樣本點(diǎn)都是在窗子附近，透光性較好。在以往的蟲情調(diào)查時(shí)，也發(fā)現(xiàn)過煙草甲盛發(fā)時(shí)在窗子上群集的現(xiàn)象。煙草甲的正趨光行為造成了在試驗(yàn)分析中的差異顯著性，為了排除光線因素干擾而去除最高值進(jìn)行分析。在表2中去除最高值后分析結(jié)果顯示為不同劑量和不同施藥方式對(duì)煙草甲蟲的致死效果差異不顯著。劑量差異不顯著的原因，或許是由于各施菌點(diǎn)白僵菌的密度太大超過了濃度引起差異的上限所致。

表2 表1中數(shù)據(jù)的非參數(shù)卡方檢驗(yàn)分析1）

3 討論

在貴陽地區(qū)煙草甲蟲一年發(fā)生2～3代。越冬代成蟲在5月中下旬出現(xiàn)，第1代成蟲7月下旬出現(xiàn)，第2代成蟲8月下旬出現(xiàn)，8月上旬至10月底為發(fā)生高峰期，有世代重疊現(xiàn)象。在醇化倉庫人工加溫加濕的條件下，常年均可觀測到活動(dòng)的煙草甲蟲，世代重疊現(xiàn)象嚴(yán)重。近些年煙草甲抗藥性逐年累積增加，導(dǎo)致化學(xué)用藥量越來越大，需要開發(fā)新的防治方法。在開展生物防治過程中，考慮到煙葉生產(chǎn)貯存的工藝特點(diǎn)不利于直接添加生物農(nóng)藥，采取結(jié)合煙草甲發(fā)生規(guī)律、行為和生防制劑的方法可行性更好一些。

另外白僵菌與性引誘劑聯(lián)合使用防治害蟲已有報(bào)道［5］，是一個(gè)從實(shí)驗(yàn)室研究走向田間應(yīng)用的實(shí)例。采用這種辦法在倉庫這個(gè)相對(duì)封閉獨(dú)立的環(huán)境防治害蟲，相比于田間可控因素多，如果方法合適會(huì)取得比較好的結(jié)果。在應(yīng)用白僵菌和性誘劑防治煙草甲的過程中，由于白僵菌侵染對(duì)濕度依賴大。而在煙草醇化過程中的防霉、防蟲工作要求濕度不能太高，這就需要菌株在低濕度下能夠侵染寄主昆蟲，因此應(yīng)加強(qiáng)菌種的選育工作。在試驗(yàn)中作者采取了一種折中的辦法即在局部小環(huán)境高濕處理，既增加白僵菌感染成功率又不必提高倉庫濕度。

根據(jù)對(duì)表2的分析，在防治中施用菌劑的方法可以簡化，一個(gè)倉庫有一個(gè)或兩個(gè)施藥點(diǎn)即可。利用甲蟲種群自身擴(kuò)散習(xí)性就可以將菌劑散布到整個(gè)倉庫里甚至擴(kuò)散到別的倉庫。在誘蟲過程中可結(jié)合甲蟲行為采取多種方法。如煙草甲喜歡取食含糖量高的優(yōu)質(zhì)煙葉、可以在誘捕環(huán)境中放置少量的優(yōu)質(zhì)煙葉延長甲蟲的停留時(shí)間從而提高侵染概率。另外對(duì)煙草甲的行為研究有待進(jìn)一步深入，特別是感染白僵菌后其在趨性方面的變化對(duì)防治有重要意義。

［1］宋紀(jì)真，周漢平，奚家勤，等.煙草甲蟲為害損失調(diào)查［J］.煙草科技，2006（7）：56－59.

［2］齊緒峰，宋紀(jì)真，謝劍平，等.貯煙倉庫中蘇云金芽胞桿菌對(duì)煙草甲的殺滅活性［J］.煙草科技，2006（5）：57－59.

［3］鄒曉，張曉敏，楊輝，等.4種蟲生真菌對(duì)煙草甲蟲的侵染致死效果［J］.植物保護(hù)，2008，34（2）：40－43.

［4］古昆，李鮮，陳靜波，等.煙草甲蟲性信息素（7S）－（－）－4，6－二甲基－7－羥基－3－壬酮的立體選擇性合成 ［J］.應(yīng)用化學(xué)，2001，18（8）：662－663.

［5］劉云鵬，夏成潤，王四寶，等.球孢白僵菌無紡布菌劑與引誘劑聯(lián)合防治松褐天牛初報(bào)［J］.安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2005，32（4）：415－418.

［6］鐘文堅(jiān)，李小蘭，馬永瑾，等.煙草甲蟲發(fā)生規(guī)律及防治試驗(yàn)［J］.廣西農(nóng)業(yè)科學(xué)，2003（6）：48－50.

［7］陳斌，馮明光.兩種殺蟲真菌制劑與低用量吡蟲啉對(duì)溫室粉虱的協(xié)同防效 評(píng)價(jià) ［J］.應(yīng)用生 態(tài) 學(xué) 報(bào)，2003，14（11）：1934－1938.

［8］王濱，李農(nóng)昌，樊美珍，等.白僵菌油劑與溴氰菊酯混合超低量噴霧防治馬尾松毛蟲［J］.中國森林病蟲，2003，22（3）：15－18.