張立平，趙晶晶，郭子寧，宋瑩瑩

（北京中醫(yī)藥大學(xué)東方醫(yī)院消化內(nèi)科，北京 100078）

芪蓮纖化湯減輕大鼠慢性肝損傷的動(dòng)態(tài)觀察*

張立平，趙晶晶，郭子寧，宋瑩瑩

（北京中醫(yī)藥大學(xué)東方醫(yī)院消化內(nèi)科，北京 100078）

[目的]通過對(duì)體質(zhì)量、肝臟病理、肝功能等指標(biāo)變化的檢測(cè)，動(dòng)態(tài)觀察芪蓮纖化湯減輕實(shí)驗(yàn)大鼠肝損傷的作用。[方法]采用四氯化碳（Cl4）傷害的方法復(fù)制大鼠慢性肝損傷模型，中藥組、西藥組分別于造模開始時(shí)給予芪蓮纖化湯、聯(lián)苯雙酯滴丸進(jìn)行灌胃。于造模第1、2、3、4、5、6周末，觀察大鼠的一般狀況及血清丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、天門冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶（AST）、白蛋白（ALB）值；于第3、6周末，進(jìn)行大鼠肝組織蘇木精-伊紅（HE）、Masson染色，以觀察其組織病理學(xué)改變。[結(jié)果]芪蓮纖化湯可以明顯改善四氯化碳傷害所致大鼠的一般狀況和肝臟病理學(xué)改變，降低血清ALT、AST的水平，提高ALB含量。[結(jié)論]芪蓮纖化湯確可通過減輕肝臟的病理學(xué)改變、保護(hù)肝功能來減輕大鼠肝損傷的程度。

肝損傷；芪蓮纖化湯；肝臟病理學(xué)改變；肝功能

慢性肝損傷是由不同病因引起的、肝細(xì)胞在功能和形態(tài)結(jié)構(gòu)等方面發(fā)生改變的慢性肝臟疾病。肝損傷有廣義和狹義之分。廣義的肝損傷包括早期肝損傷、肝纖維化、肝硬化等一系列病理變化過程；狹義的肝損傷指慢性肝病的早期階段，肝臟尚未出現(xiàn)纖維化病理改變，臨床癥狀可不明顯。本實(shí)驗(yàn)采用四氯化碳（CCl4）制取大鼠肝損傷模型，一方面探討早期肝損傷的發(fā)生機(jī)制，一方面早期應(yīng)用芪蓮纖化湯和聯(lián)苯雙酯，動(dòng)態(tài)觀察芪蓮纖化湯的治療作用，并進(jìn)一步揭示其治療機(jī)制。

1 材料和方法

1.1 材料 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：Wistar雄性大鼠70只，體質(zhì)量（200±10）g，購(gòu)于北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司，動(dòng)物許可證編號(hào)：SCXK（京）2007-0001。主要實(shí)驗(yàn)用藥：四氯化碳（CCl4）、橄欖油溶液由北京化學(xué)試劑公司提供。聯(lián)苯雙酯由北京協(xié)和藥廠提供，每粒1.5mg，按照每100mL蒸餾水含25粒配制水溶液，終濃度為0.375 g/L。芪蓮纖化湯（黃芪、半枝蓮、郁金等中藥組成）由北京中醫(yī)藥大學(xué)東方醫(yī)院藥材科提供，煎煮后濃縮至每毫升湯藥含生藥量1 g。丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、天門冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶（AST）、白蛋白（ALB）試劑盒由南京建成生物技術(shù)研究所提供。主要實(shí)驗(yàn)儀器：紫外分光光度計(jì)，（Amersham公司）；臺(tái)式高速離心機(jī)，（Eppendorf公司5415D型）；-80℃低溫冰箱，（REVCO公司）；萬分之一天平，（sartorius公司 BP121S型）；酸度計(jì)（標(biāo)準(zhǔn)型），sartorius公司（PB10型）。

1.2 方法

1.2.1 大鼠肝損傷模型的復(fù)制 采用50%CCl4橄欖油注射液，以2mL/kg的劑量對(duì)大鼠進(jìn)行皮下注射，每周兩次，持續(xù)6周。

1.2.2 分組及給藥 將大鼠隨機(jī)分為4組：模型組20只、中藥組20只、西藥組20只、正常組10只。正常組大鼠，普通飼料喂養(yǎng)，不加任何處理。其余各組予50%CCl4橄欖油注射液皮下注射，按2mL/kg的劑量，每周注射2次。中藥組、西藥組分別于造模開始時(shí)給予芪蓮纖化湯、聯(lián)苯雙酯滴丸進(jìn)行灌胃，1次/d，給藥劑量按照大鼠體表面積公式進(jìn)行計(jì)算。

1.2.3 肝臟病理組織學(xué)檢測(cè) 在第3周、第6周末，隨機(jī)選取各組3只大鼠，麻醉、消毒、開腹、150mL氨酸鹽溶液+150mL 80%多聚甲醛+0.42mg高碘酸鈉（PLP）液灌流肝臟后，摘取肝臟，置于4%多聚甲醛中固定，脫水、透明、石蠟包埋，切片，做肝組織蘇木精-伊紅（HE）、Masson染色，普通光鏡觀察、攝片。

1.2.4 肝功能指標(biāo)檢測(cè) 造模第 1、2、3、4、5、6 周末隨機(jī)取各組大鼠10只，經(jīng)眼眶內(nèi)眥靜脈叢取血（3～4mL），靜置、離心，用于檢測(cè)血清 ALT、AST、ALB 的含量，

1.2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 本實(shí)驗(yàn)所有數(shù)據(jù)均使用SPSS 13.0軟件進(jìn)行多組間單因素方差分析。

2 結(jié)果

2.1 大鼠一般狀況 實(shí)驗(yàn)過程中，正常組大鼠皮毛緊密，色白，有光澤，活潑，飲食正常。模型組大鼠隨著造模時(shí)間的延長(zhǎng)，逐漸出現(xiàn)皮毛松散蠟黃，無光澤，喜靜臥，進(jìn)食量減少，自第6周開始，部分大鼠開始出現(xiàn)體質(zhì)量下降。中藥組大鼠與模型組大鼠相比，毛白，光澤度好，飲食正常，體質(zhì)量無下降；西藥組與模型組相比，改善不明顯。

2.2 大鼠肝、脾臟大體標(biāo)本情況 正常組大鼠肝臟色紅嫩，有光澤，質(zhì)軟，邊緣銳利。模型組大鼠3周末肝臟質(zhì)韌，色暗淡，稍腫脹，邊緣稍頓；6周末大鼠肝臟質(zhì)硬，表面粗糙，色暗或灰白，腫大變形，下腔靜脈增粗，脾臟增大，部分出現(xiàn)少量澄清腹水。西藥對(duì)照組大鼠3周末肝臟稍增大，粗糙；6周末大鼠肝臟質(zhì)硬，表面粗糙，色暗或灰白，腫脹，下腔靜脈增粗，部分脾臟增大。中藥治療組大鼠3周末肝臟大體標(biāo)本改變不明顯，6周末與正常組相比，肝臟色稍暗，體積稍增大。

2.3 肝臟組織病理學(xué)改變 模型組大鼠3周末肝臟小葉結(jié)構(gòu)紊亂，中央靜脈區(qū)和匯管區(qū)出現(xiàn)較多的細(xì)胞壞死，壞死區(qū)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，出現(xiàn)明顯的脂肪變性；6周末壞死區(qū)域纖維增多，形成條索，融合成片，主要分布在中央靜脈區(qū)和匯管區(qū)，出現(xiàn)明顯的肝纖維化。西藥對(duì)照組大鼠3周末肝臟小葉結(jié)構(gòu)紊亂，小葉之間出現(xiàn)較多的細(xì)胞壞死，出現(xiàn)脂肪變性，但不及模型組細(xì)胞壞死及變性明顯；6周末壞死區(qū)域纖維增多，形成條索，主要分布在中央靜脈區(qū)。中藥治療組大鼠3周末尚能保持正常肝臟小葉結(jié)構(gòu)，部分區(qū)域壞死增多，出現(xiàn)少量的空泡變性；6周末在中央靜脈區(qū)出現(xiàn)纖維增多，形成細(xì)小的條索，未見融合成片，空泡變性明顯。

2.4 肝功能測(cè)定

2.4.1 血清ALT 見表1。與正常組大鼠相比，模型組大鼠ALT值逐漸升高，從第3周開始差異顯著，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），第4周開始有非常顯著的差異（P<0.01）。中藥組、西藥組呈先升高后降低趨勢(shì)，第6周ALT值降低，與模型組相比，有非常顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，中、西藥組相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

表1 各組大鼠ALT值的比較(±s)Tab.1 Com parisonofserum ALT levelofratsin eachgroup(±s)U/L

表1 各組大鼠ALT值的比較(±s)Tab.1 Com parisonofserum ALT levelofratsin eachgroup(±s)U/L

注：模型組與正常組相比，*P<0.05，**P<0.01；中藥組、西藥組與造模組相比，◆P<0.05，◆◆P<0.01。

組別正常組造模組中藥組西藥組1周2周3周4周5周6周18.55±7.85 28.02±13.64 35.87±10.04 24.53±13.10 49.52±21.14 51.64±23.68 44.78±21.89*43.34±16.15 38.73±13.40 20.96±16.43 94.43±15.02**105.61±18.23 101.59±14.10 105.38±12.64**103.07±24.68 98.92±30.20 111.92±8.44**55.10±29.48◆58.25±28.41◆◆

2.4.2 血清AST 見表2。模型組大鼠與正常組大鼠相比，AST值逐漸升高，到第6周差異顯著，P<0.05。中藥組、西藥組呈先升高后降低趨勢(shì)，中藥組AST值在第4、5周時(shí)較前升高不明顯，第6周降低，與模型組相比差異顯著，P<0.05。

表2 各組大鼠AST值的比較(±s)Tab.2 Comparisonofserum AST levelofratsin eachgroup(±s)U/L

表2 各組大鼠AST值的比較(±s)Tab.2 Comparisonofserum AST levelofratsin eachgroup(±s)U/L

注：模型組與正常組相比，*P<0.05，**P<0.01；中藥組、西藥組與造模組相比，◆P<0.05，◆◆P<0.01。

組別正常組造模組中藥組西藥組1周2周3周4周5周6周19.83±8.54 14.41±3.79 24.20±10.28 19.55±4.65 19.10±8.27 27.98±15.48 22.02±9.58 17.9±10.74 25.06±12.94 22.67±10.47 22.70±10.29 31.26±11.70 43.53±10.75 28.08±6.02 25.14±6.97 42.16±7.29◆◆35.94±13.22*21.8±11.31◆26.59±10.16

2.4.3 血清ALB 見表3。與正常組比較，中藥治療組、西藥對(duì)照組6周末蛋白含量變化不大，與模型組相比，差異顯著，中、西藥組相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

表3 各組大鼠ALB值的比較(±s)Tab.3 Comparisonofserum ALB levelofratineach group(±s)g/L

表3 各組大鼠ALB值的比較(±s)Tab.3 Comparisonofserum ALB levelofratineach group(±s)g/L

注：模型組與正常組相比，**P<0.01；中藥組、西藥組與造模組相比，◆P<0.05，◆◆P<0.01。

組別正常組造模組中藥組西藥組1周2周3周4周5周6周19.97±4.79 21.75±4.85 25.77±4.81 20.65±4.40 20.32±4.53 24.54±5.36 21.88±5.27 23.79±5.13 27.41±3.68 24.90±5.56 22.33±7.58 20.43±3.83 25.32±4.66 21.85±7.17 20.05±3.01 22.30±3.51 17.11±5.56**22.80±4.67◆26.48±4.77◆◆

3 討論

慢性肝損傷是指肝細(xì)胞遭受不能耐受的有害因子刺激時(shí)，引起的代謝功能和形態(tài)結(jié)構(gòu)3方面的變化。病毒感染（主要是乙型、丙型肝炎病毒）、乙醇濫用、藥物中毒、自身免疫性疾病等諸多因素都會(huì)導(dǎo)致慢性肝損傷的發(fā)生，繼而出現(xiàn)肝纖維化。因此，肝損傷是各種肝病共同的病理基礎(chǔ)，通過對(duì)肝損傷的研究，可以為臨床治療各種肝病提供理論依據(jù)。由于慢性肝損傷大多起病隱匿，進(jìn)展緩慢，臨床癥狀不明顯，故由慢性肝損傷到肝纖維化形成可能要經(jīng)歷幾個(gè)月、幾年、甚至是數(shù)十年的過程。臨床上很多患者出現(xiàn)明顯不適才來就診，肝穿發(fā)現(xiàn)已經(jīng)形成了肝纖維化甚至是肝硬化。研究表明，各種肝病的發(fā)展過程中，肝損傷與肝纖維化常相繼發(fā)生或者同時(shí)存在。一般急性肝病，發(fā)生和痊愈比較迅速，不會(huì)發(fā)生肝纖維化。慢性肝病經(jīng)久不愈，無論其病因如何，均可發(fā)生肝纖維化[1-3]。

肝損傷的發(fā)生發(fā)展存在著顯著的個(gè)體差異，其發(fā)生發(fā)展取決于正邪力量的對(duì)比。本課題組認(rèn)為，正氣不足，免疫力低下，是導(dǎo)致慢性肝損傷的發(fā)生的根本原因。乙醇、藥物、毒物、高脂飲食等損傷脾胃，脾不健運(yùn)，生濕化痰，阻礙氣機(jī)，濕熱毒邪侵害，內(nèi)蘊(yùn)中焦，影響脾胃運(yùn)化，熏蒸肝膽，形成氣滯、血瘀、痰濕共存的病理狀態(tài)。采用臨床療效顯著的芪蓮纖化湯，取其補(bǔ)肺脾之氣、肝腎之陰，活血補(bǔ)血、行氣解郁、清熱解毒、消腫利濕之用，合奏扶正解毒之功。

四氯化碳是肝毒性藥物，引起肝小葉內(nèi)中央靜脈細(xì)胞壞死，引起纖維增生，而增生以小葉內(nèi)竇間隙增生為主。啟動(dòng)機(jī)制為毒性化學(xué)物質(zhì)對(duì)于肝臟的損傷，自由基的形成及引發(fā)的鏈?zhǔn)竭^氧化反應(yīng)。CCl4在肝內(nèi)主要被微粒體細(xì)胞色素氧化酶代謝，生成兩個(gè)活性自由基（CCl3O2·和Cl·）及一系列氧活性物，破壞生物膜結(jié)構(gòu)的完整性，與細(xì)胞成分如胞內(nèi)脂質(zhì)、蛋白、核脂質(zhì)、核蛋白和DNA等多種大分子發(fā)生不可逆的共價(jià)結(jié)合而導(dǎo)致細(xì)胞死亡，并作用于DNA時(shí)，使核酸直接破壞，引起DNA鏈的斷裂，影響其信息傳遞功能以及轉(zhuǎn)錄和復(fù)制特性。此種研究比較適合肝炎方面的研究，本實(shí)驗(yàn)中模型組大鼠肝臟病理染色可見：3周時(shí)出現(xiàn)嚴(yán)重的脂肪變性，6周末纖維化形成。說明四氯化碳傷害3周時(shí)，大鼠處于早期肝損傷階段，6周后則進(jìn)入肝纖維化階段，此模型復(fù)制成功。

ALT是存在于肝細(xì)胞胞質(zhì)中的一種特異性的酶類物質(zhì)，肝細(xì)胞受損時(shí)釋出，對(duì)肝細(xì)胞損傷非常敏感，肝細(xì)胞膜輕微損傷即可出現(xiàn)ALT的明顯升高。是評(píng)價(jià)肝損害最常用的一個(gè)指標(biāo)[4]。AST的大部分存在于線粒體、小部分存在于細(xì)胞質(zhì)中，只有當(dāng)線粒體受損時(shí)AST才明顯升高，故AST可反映肝細(xì)胞病變的嚴(yán)重性，是反映肝細(xì)胞損傷程度的重要指標(biāo)[5]。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：中藥組大鼠肝臟無論是大體標(biāo)本還是病理組織學(xué)改變，都較模型組和西藥對(duì)照組為輕，說明芪蓮纖化湯可顯著減輕肝細(xì)胞炎癥，降低炎癥分級(jí)，保護(hù)肝細(xì)胞，改善肝臟供血和門脈高壓狀態(tài)，從而延緩肝纖維化的進(jìn)程。中、西藥組血清ALT、AST含量均呈現(xiàn)先升高后降低趨勢(shì)，血清ALB含量6周末與模型組相比，差異顯著。說明芪蓮纖化湯、聯(lián)苯雙酯均能明顯改善肝功能，降低轉(zhuǎn)氨酶，中藥組第6周AST值明顯降低，與模型組相比，差異顯著，西藥組則降低不明顯，說明芪蓮纖化湯在改善肝功能方面療效優(yōu)于聯(lián)苯雙酯。

因此，具臨床良好療效的芪蓮纖化湯確實(shí)能動(dòng)態(tài)地改善實(shí)驗(yàn)大鼠肝臟病理情況和有效地保護(hù)大鼠肝臟功能。

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[4]孫志強(qiáng),毛遠(yuǎn)麗.肝病酶學(xué)指標(biāo)及臨床應(yīng)用進(jìn)展[J].中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志 2005，28(6):659-662.

[5]李淑葵.肝臟疾病的實(shí)驗(yàn)室診斷(二)[J].中國(guó)臨床醫(yī)生，1999，27（8）:59-60.

Dynam ic observation on the effectofQilian Xianhua decoction on chronic liver injury in rats.

ZHANG Li-ping,ZHAO Jing-jing,GUOZi-ning,etal
（The Dongfang HospitalofBeijing University of TraditionalChineseMedicine，Beijing 100078， China）

[Objective]Todynamicallyobserve theamelioratingeffectofQilian Xianhua decoction on liver injury through examining the changes in bodyweight,liver pathology,liver function in experimental rats.[Methods]Chronic liver injurywasproduced in ratsby injecting carbon tetrachloride for sixweeks.Qilian XianHua decoction and Dimethyldiphenylbicarboxylatewere administrated per oral in different ratgroup for sixweeks.Thegeneral condition and serum ALT,AST,ALB and CHEwere detected everyweek;Pathology of liver wasobserved by HEand Masson stainingat the third and sixthweek.[Results]Forexperimental liver injury of rats,Qilian XianHua decoction can significantly improve the general condition and pathology of liver,decrease the level of ALT and AST,increase the level of ALB.[Conclusion]Qilian XianHuadecoction showsa significantprotectiveeffectagainst the chronic injury of liver in rats.

liver injury;Qilian XianHua decoction;pathology of liver;liver function

R285.5

A

1672-1519(2010)03-0230-03

國(guó)家中醫(yī)藥管理局留學(xué)回國(guó)人員科技活動(dòng)擇優(yōu)資助項(xiàng)目（2003-57）。

張立平（1963-），女，博士，教授，主要從事消化系統(tǒng)疾病的臨床及實(shí)驗(yàn)研究工作。

2010-04-20）