巫小莉 ，湯勇才，張 程 ，張偉紅，湯習(xí)鋒 ，周小棉

(1、廣州醫(yī)學(xué)院附屬?gòu)V州市第一人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣東 廣州 510180；2、廣東醫(yī)學(xué)院2005屆學(xué)生；3、廣州陽(yáng)普醫(yī)療科技股份有限公司)

EDTA-K2是血細(xì)胞常規(guī)分析的較理想的抗凝劑，但是最近幾年里，有關(guān)由于EDTA依賴(lài)所引起的血小板假性減少的報(bào)道較多，周小棉[1]等人于2007年報(bào)道了新鮮配制的5mg/m l丁胺卡那霉素可以使血小板計(jì)數(shù)在4h內(nèi)保持穩(wěn)定，如果將此法應(yīng)用在日常血常規(guī)上，將可有效防止EDTA依賴(lài)而引起的血小板假性減少，減少臨床誤診，從而減輕病人的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)，防止醫(yī)療糾紛的發(fā)生。假如批量生產(chǎn)，它的穩(wěn)定期(有效期)究竟有多長(zhǎng)？為了探討這個(gè)問(wèn)題，我們用即配新鮮EDTA-K2丁胺卡那霉素抗凝管作為測(cè)定管，陽(yáng)普公司批量制作的EDTA-K2丁胺卡那霉素抗凝管為對(duì)照管，同步計(jì)數(shù)因EDTA依賴(lài)引起的血小板假性減少患者的血小板數(shù)，觀察批量制作的EDTA-K2丁胺卡那霉素抗凝管的穩(wěn)定期(有效期)，結(jié)果如下。

1 材料與方法

1.1 試劑與儀器 EDTA-K2抗凝管、EDTA-K2丁胺卡那霉素管均由廣州陽(yáng)普醫(yī)療用品有限公司提供；丁胺卡那霉素為廣州白云山天心制藥股份有限公司產(chǎn)品；美國(guó)雅培CD-3700血細(xì)胞分析儀和配套試劑及質(zhì)控物；OLMPUS顯微鏡;WQF-410付立葉變換紅外光譜儀，北京第二光學(xué)儀器廠生產(chǎn)。

1.2 檢測(cè)標(biāo)本 7例廣州市第一人民醫(yī)院住院病人靜脈血，年齡45～75歲，男的4例，女的3例。

1.3 方法 對(duì)通過(guò)篩查確診為EDTA依賴(lài)的患者，采集靜脈血，用EDTA-K2抗凝管、新鮮配制的EDTA－K2丁胺卡那抗凝管、批量制作EDTA－K2丁胺卡那抗凝管，分別注入2ml于各抗凝管中，輕輕顛倒搖勻；在全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀上分別測(cè)定血小板數(shù)量，觀察不同時(shí)間(即時(shí)、0.5h、1h、2h、3h、4h)各管血小板數(shù)量的變化。

2 結(jié)果

2.1 第一個(gè)月：新鮮配制的EDTA－K2丁胺卡那抗凝管和廠家批量制作EDTA－K2丁胺卡那抗凝管，4h內(nèi)血小板數(shù)穩(wěn)定；而沒(méi)有添加丁胺卡那霉素的EDTA抗凝管最不穩(wěn)定(數(shù)值波動(dòng)最大)，其血涂片在鏡下可見(jiàn)血小板有明顯的聚集現(xiàn)象。見(jiàn)圖1。

2.2第三個(gè)月：新鮮配制的EDTA－丁胺卡那抗凝管4h內(nèi)血小板計(jì)數(shù)穩(wěn)定，廠家批量制作的EDTAK2丁胺卡那抗凝管在30min內(nèi)血小板數(shù)保持穩(wěn)定，30min后，呈下降趨勢(shì)，血涂片部分血小板聚集；EDTA抗凝管的總體變化趨勢(shì)均為隨著時(shí)間的延長(zhǎng)而血小板計(jì)數(shù)下降。見(jiàn)圖2。

2.3 第六個(gè)月：自配EDTA－K2丁胺卡那抗凝管4h內(nèi)血小板計(jì)數(shù)穩(wěn)定，其血涂片中的血小板未發(fā)現(xiàn)有聚集現(xiàn)象；廠家抗凝管在1h后緩慢下降，血涂片中有少許的血小板聚集；EDTA抗凝管則最不穩(wěn)定，血涂片有明顯的血小板聚集。見(jiàn)圖3。

2.4 第十三個(gè)月：自配EDTA－K2丁胺卡那抗凝管4h內(nèi)血小板計(jì)數(shù)穩(wěn)定，其血涂片亦未見(jiàn)血小板聚集；廠家抗凝管在0.5h內(nèi)開(kāi)始下降，血涂片中有少許的血小板聚集；EDTA－K2抗凝管則最不穩(wěn)定，血涂片有明顯的血小板聚集。見(jiàn)圖4。

2.5 三個(gè)月、十八個(gè)月的EDTA抗凝管紅外光譜對(duì)比圖：從圖中對(duì)比可以看出，兩個(gè)生產(chǎn)日期的抗凝管在紅外光譜中存在不同，在吸光度約1100nm和600nm出現(xiàn)了不同的峰值，說(shuō)明管內(nèi)物質(zhì)發(fā)生了變化，這種變化是否就是造成EDTA－K2丁胺卡那抗凝管的不穩(wěn)定因素，需進(jìn)一步確證。見(jiàn)圖5。

表1 EDTA-K2與EDTA-K2丁胺卡那抗凝管4h內(nèi)血液參數(shù)的比較

3 討論

PTCP是由于血液在EDTA鹽抗凝作用中，EDTA誘導(dǎo)血小板中的特殊蛋白使血小板發(fā)生凝聚而引起，當(dāng)用全自動(dòng)血液分析儀檢測(cè)時(shí)，不能準(zhǔn)確計(jì)數(shù)血小板，而導(dǎo)致血小板發(fā)生假性減少的現(xiàn)象，據(jù)報(bào)道，EDTA導(dǎo)致血小板聚集的原因與血小板表面存在某種隱匿性抗原有關(guān)[2]。

據(jù)國(guó)際血液學(xué)標(biāo)準(zhǔn)委員會(huì)(ICSH)1993年的文件建議，血細(xì)胞計(jì)數(shù)宜用EDTA鹽抗凝，其他抗凝劑均不適合于血細(xì)胞計(jì)數(shù)。EDTA與血液中的鈣離子結(jié)合形成配位化合物,從而阻止血液凝固[3]，因EDTA對(duì)血細(xì)胞形態(tài)影響很小，特別適用于全血細(xì)胞分析，已被臨床廣泛使用。對(duì)EDTA敏感而導(dǎo)致血小板假性減少的發(fā)生率雖然只有0.007%～1%，但也一直困擾著臨床。

周小棉[1]等人于2007年報(bào)道了新鮮配制的5mg/ml丁胺卡那霉素可以使得血小板計(jì)數(shù)在4h內(nèi)保持穩(wěn)定，沿著這個(gè)思路，我們做了上述的實(shí)驗(yàn)，希望找到徹底解決問(wèn)題的方法，圖1表明，廠家批量制作的EDTA－K2丁胺卡那抗凝管，一個(gè)月內(nèi)作血小板計(jì)數(shù)可穩(wěn)定4h；圖2～4顯示，三個(gè)月后(下轉(zhuǎn)第370頁(yè))到一年的EDTA－K2丁胺卡那抗凝管，血小板計(jì)數(shù)只能穩(wěn)定30min～1h，這到底是丁胺卡那和EDTA兩種物質(zhì)在一起的化學(xué)反應(yīng)而造成的不穩(wěn)定，還是作為氨基糖甙類(lèi)抗生素的丁胺卡那霉素半衰期而引起的不穩(wěn)定，抑或是管內(nèi)細(xì)菌所引起的不穩(wěn)定(抗凝管沒(méi)有經(jīng)過(guò)無(wú)菌處理)，機(jī)理不明了。從圖5的紅外線(xiàn)光譜圖可以看到，在吸光度約1100nm和600nm出現(xiàn)了不同的峰值，說(shuō)明同一種物質(zhì)在不同的時(shí)間還是有差異(由于條件限制，我們只做了第3個(gè)月和第18個(gè)月的紅外線(xiàn)光譜圖)，這是否就是造成血小板計(jì)數(shù)的不穩(wěn)定因素，有待進(jìn)一步探討。

從實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表1可以看出，往EDTA抗凝管內(nèi)加入5mg/ml丁胺卡那霉素可以有效抑制血小板聚集現(xiàn)象，計(jì)數(shù)可以穩(wěn)定4h，并且不影響其他血常規(guī)參數(shù)的測(cè)定。與周小棉等[1]所報(bào)道的可以在4h內(nèi)解聚血小板相符合，但是從實(shí)驗(yàn)結(jié)果我們可以發(fā)現(xiàn)，批量加入丁胺卡那霉素的EDTA抗凝管對(duì)不同的患者作用時(shí)間有所不同，存在著個(gè)體差異，如圖2和圖3的結(jié)果所顯示。圖2與圖3為不同的患者，按預(yù)測(cè)，第六個(gè)月的檢測(cè)值應(yīng)比第三個(gè)月的檢測(cè)值下降的快，但實(shí)際情況并不是我們想象(如圖2、圖3黃色線(xiàn)所示)，而是第三個(gè)月的檢測(cè)值比第六個(gè)月的檢測(cè)值下降的更快，就象倍比稀釋的試驗(yàn)出現(xiàn)的跳管現(xiàn)象，由此可見(jiàn)，患者間存在著個(gè)體差異。

由于此類(lèi)病人較少且難以追蹤，我們?cè)诿總€(gè)時(shí)間段只能找到一到兩例病人做實(shí)驗(yàn)，所以結(jié)果并不具有全面的代表性，只能起到一個(gè)提示或者說(shuō)是一個(gè)拋磚引玉的作用，希望引起同道們的重視，共同探討研究，找到解決問(wèn)題的方法。

[1]周小棉,巫小莉,李結(jié)秋,等.丁胺卡那霉素抑制和解離抗凝劑依賴(lài)的假性血小板聚集作用研究[J].中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2007,30(3):333-336.

[2]周小棉,鄒 曉.假性血小板減少癥研究進(jìn)展[J].中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2007,30(9):88-92.

[3]巫小莉,周小棉,鄧穗德,等.EDTA抗凝劑依賴(lài)性假性血小板減少癥血小板計(jì)數(shù)的研究[J].實(shí)用醫(yī)學(xué),2007,23(4):578.