徐嬌君，呂火祥，胡慶豐，殷 偉，沈蓓瓊，朱永澤，徐 娟

(1、浙江省金華市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，浙江 金華 321000；2、浙江省人民醫(yī)院檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)中心，浙江 杭州 310014)

鮑曼不動(dòng)桿菌(Acinetobacter baumanni)是一種非發(fā)酵的革蘭陰性條件致病菌，也是醫(yī)院內(nèi)不動(dòng)桿菌屬爆發(fā)流行中最主要的菌種，它廣泛分布于水，土壤，人體皮膚，口腔粘膜，呼吸道和泌尿道中，尤其醫(yī)院環(huán)境中從各種用具和醫(yī)務(wù)人員手的檢測(cè)率均很高且可長(zhǎng)期存活，可引起菌血癥，腦膜炎，肺炎及傷口感染等，對(duì)危重患者和CCU及ICU中的患者威脅很大，此類感染也被稱作ICU獲得性感染。另外，隨著廣譜抗生素的廣泛使用及介入性操作的普及，導(dǎo)致鮑曼不動(dòng)桿菌的耐藥率也逐年增高，出現(xiàn)了多重耐藥甚至“全耐藥”的鮑曼不動(dòng)桿菌[1]，因而給感染性疾病的治療帶來相當(dāng)大的困難。替加環(huán)素[2]是近年來開發(fā)的甘氨酸環(huán)素類抗生素藥物，已在美國上市[3]由于在國內(nèi)還未上市，本文用K-B法檢測(cè)臨床分離的100株鮑曼不動(dòng)桿菌菌株對(duì)替加環(huán)素的藥敏情況，為臨床治療，控制醫(yī)院感染提供參考依據(jù)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1 .1資料來源 100株鮑曼不動(dòng)桿菌分離自浙江省人民醫(yī)院2009年7月至2010年2月住院患者送檢標(biāo)本。分別來自痰液56株、咽拭子25株、血液11株、分泌物6株、腹水1株、膿液1株。同一患者多次分離的菌株只取1株。

1.1 .2儀器與試劑 VITEK-32型全自動(dòng)微生物分析儀、M-H瓊脂均購自法國生物梅里埃公司、替加環(huán)素紙片15μg/片(Oxoid公司，美國輝瑞公司惠贈(zèng))。

1.2 方法

1.2 .1菌種分離與鑒定 將待檢標(biāo)本接種于羊血哥倫比亞瓊脂平板，35℃培養(yǎng)18～24h，分離純化后，用VITEK-32型全自動(dòng)微生物分析儀配套的革蘭陰性菌鑒定卡GNI和GNS藥敏卡進(jìn)行菌株鑒定及常規(guī)藥物敏感性檢測(cè)，具體操作按使用說明書。

1.2 .2 K-B紙片擴(kuò)散法 取0.5麥?zhǔn)蠁挝坏木?，按?biāo)準(zhǔn)的K-B法將菌液涂布于M-H平板上，室溫放置15min，待表面干后，將紙片貼在瓊脂表面。35℃孵育16～18h，用精密度為1mm的游標(biāo)卡尺量取抑菌圈直徑 (抑菌圈的邊緣應(yīng)是無明顯細(xì)菌生長(zhǎng)的區(qū)域)。目前CLIS2009版沒有替加環(huán)素的藥敏結(jié)果的判定標(biāo)準(zhǔn)，本研究的判定標(biāo)準(zhǔn)參照美國FDA給出的替加環(huán)素的抑菌圈的直徑(mm)來判讀結(jié)果。對(duì)于不動(dòng)桿菌屬：抑菌圈的直徑≥16mm為敏感(S)，抑菌圈的直徑在13～15(mm)之間為中介(I),抑菌圈的直徑≤12mm為耐藥(R)。

2 結(jié)果

100 株鮑曼不動(dòng)桿菌對(duì)替加環(huán)素的檢測(cè)結(jié)果見表1顯示：這100株鮑曼不動(dòng)桿菌對(duì)替加環(huán)素的敏感率為57%。

3 討論

替加環(huán)素是米諾環(huán)素的衍生物，是第一個(gè)應(yīng)用于臨床的甘氨酸環(huán)素類抗生素。替加環(huán)素適用于18歲以上患者敏感菌所致感染的治療，2005年FDA已批準(zhǔn)的適應(yīng)癥包括：復(fù)雜性皮膚和皮膚軟組織感染、復(fù)雜性腹腔內(nèi)感染、社區(qū)獲得性細(xì)菌性肺炎。研究表明替加環(huán)素作用機(jī)制是以陽離子-四環(huán)素類復(fù)合物形式通過主動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制穿過細(xì)菌外膜并聚積在包膜間質(zhì)，接著復(fù)合物解離，具有弱親和脂性、電中性的四環(huán)素分子通過彌散方式透過細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞。一旦進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)，四環(huán)素很可能與陽離子形成螯合物，并與核糖體30S亞基結(jié)合，阻斷氨?；?轉(zhuǎn)移RNA(t-RNA)進(jìn)入A位點(diǎn)，從而阻斷肽鏈的延長(zhǎng)繼而抑制細(xì)菌蛋白質(zhì)的合成[4,5]。四環(huán)素類和甘氨酰環(huán)素類共享一個(gè)核糖體結(jié)合位點(diǎn)，該位點(diǎn)位于16S rRNA的30S亞基上。替加環(huán)素與核糖體結(jié)合的緊密度為四環(huán)素和米諾環(huán)素的5倍[6]。替加環(huán)素也可能通過另外的結(jié)合位點(diǎn)，使其對(duì)核糖體保護(hù)介導(dǎo)的耐藥菌仍保持活性[7]。

表1 100株鮑曼不動(dòng)桿菌對(duì)替加環(huán)素抗菌藥物耐藥情況

表2 替加環(huán)素與常用藥物對(duì)100株鮑曼不動(dòng)桿菌耐藥性比較

鮑曼不動(dòng)桿菌屬非發(fā)酵菌，是能在人類皮膚表面生存的革蘭陰性桿菌。本屬菌對(duì)營養(yǎng)無特殊要求，抵抗力強(qiáng)，可在環(huán)境中廣泛存在，在干燥物體表面存活時(shí)間較長(zhǎng)。在健康人群中其定植率為40%，在住院病人中定植率為75%[8]。不動(dòng)桿菌在臨床標(biāo)本分離率僅次于銅綠假單胞菌[9]，醫(yī)院感染不動(dòng)桿菌屬較社區(qū)獲得性感染的菌株藥耐性高，易于發(fā)生耐藥菌的傳播和擴(kuò)散，特別是產(chǎn)β-內(nèi)酰胺酶菌株常造成感染的流行與暴發(fā)[10]。同時(shí)由于長(zhǎng)期抗生素選擇壓力使泛耐藥株明顯增加，特別是對(duì)廣譜β-內(nèi)酰胺類藥物的耐藥，給臨床抗菌治療帶來了極大的困難。研究顯示，100株鮑曼不動(dòng)桿菌對(duì)常用抗菌藥物的藥敏試驗(yàn)結(jié)果表明：頭孢西丁的耐藥率已達(dá)到了91%；其他如亞胺培南，美洛培南，頭孢吡肟,左氧氟沙星,慶大霉素耐藥率都達(dá)到了50%以上分別為69%，65%，71%，66%，55%。相對(duì)阿米卡星的耐藥率稍微低些，為38%；多粘菌素B的耐藥率為0。本試驗(yàn)所研究的替加環(huán)素的耐藥率為22%，中介率為21%，敏感率為57%。在本研究中，替加環(huán)素對(duì)鮑曼不動(dòng)桿菌感染有一定的抑菌效果，臨床可結(jié)合病情，考慮合理使用抗菌藥物以降低鮑曼不動(dòng)桿菌的耐藥性。

[1]王凌偉,陳升汶.不動(dòng)桿菌微生物學(xué)耐藥研究新進(jìn)展[J].國外醫(yī)藥抗生素分冊(cè),2004,25(3):134-137.

[2]王 輝,倪語星,陳民鈞,等.新型甘氨酰環(huán)素類抗菌藥物替加環(huán)素的體外藥敏試驗(yàn)操作規(guī)程 [J].中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2009,32(11):1208-1212.

[3]劉昱東,王 輝,杜 娜,等.利奈唑胺、替加環(huán)素、達(dá)托霉素、頭孢吡普等抗菌藥物對(duì)MRSA的抗菌活性 [J].中國感染與化療雜志,2008,8(1):10-14.

[4]Chopra I,Hawkey PM,Hinton M.Tetracyclines,molecular and clinical aspects[J].JAntimicrob Chemother,1992,29:245-277.

[5]Schnappinger D,Hillen W.Tetracyclines:antibiotic action,uptake,and resistance mechanisms[J].Arch Microbiol,1996,165(6):359-369.

[6]Bauer G,Berens C,Projan SJ,et al.Comparison of tetracycline and tetracycline binding to ribosomes mapped by dimethylsulphate and drug-directed Fe2+cleavage of 16S rRNA [J]. J Antimicrob Chemother,2004,53(4):592-599.

[7]Olson MW,Ruzin A,Feyfant E,et al.Functional,biophysical,and structural bases for antibacterial activity of tigecycline[J].Antimicrob Agents Chemother,2006,50:2156-2166.

[8]張 櫻,陳亞崗,楊 青.不動(dòng)桿菌感染及耐藥機(jī)制的研究[J].國外醫(yī)學(xué)-流行病學(xué)傳染病分冊(cè),2005,32:109-112.

[9]Lee K,Kim YA,Joon Y,et al.Increasing prevalance of vancomy cin-resustant enterococci,and cefoxitin,imipenem,and fluoroqrinolone-resistant gram-negative bacili:A KONSAR study in 2002[J].YonseiMed J,2004,45(4):598.

[10]Zarrilli R,Crispino M,Bagattini M,et al.Molecular epidemiology of sequential outbreaks of Acinetobacter baumannii in an intensive care unit shows the emergence of carbapenem resistance[J].JClin Microbial,2004,42(3):946-953.