高志雄，王 威*，呂恩基，趙金茹

(1．遼寧中醫(yī)藥大學針灸推拿學院，遼寧沈陽110032;2．遼寧中醫(yī)藥大學實驗中心，遼寧沈陽110032)

腸易激綜合征 (Irritable bowel syndrome，簡稱IBS)，是以慢性或反復出現(xiàn)的腹痛并伴隨腹瀉、排便習慣和大便性狀異常為主要癥狀而又缺乏胃腸道結(jié)構(gòu)和生化異常的綜合征[1,2]．近年來認為內(nèi)臟敏感性增高是IBS的病理生理特征，是IBS患者癥狀產(chǎn)生的重要基礎和癥狀多樣化的原因，甚至被學者視為IBS患者的生物學標識[3]，其具有臨床上常見多發(fā)，但治療方法有限，且療效不理想的特點[4]．

針刺治療內(nèi)臟性疾患具有確切的療效[5]，然而，國內(nèi)又很少開展單純針刺治療IBS的基礎研究報道，加強這方面工作，將有助于臨床針刺治療IBS工作的推廣應用．P物質(zhì)(SP)、血管活性腸肽(VIP)作為胃腸運動調(diào)節(jié)中一對重要的興奮性和抑制性胃腸肽，在胃腸道有廣泛的分布;為此，本實驗應用免疫組織化學方法觀察了針刺上巨虛穴對IBS大鼠模型胃腸道SP、VIP分布的影響，研究針刺的作用規(guī)律，為臨床治療提供科學依據(jù)．

1 材料和方法

1.1 實驗動物

雄性3周齡SD大鼠100只(北京維通利華實驗動物技術有限公司提供),清潔級．

1.2 主要試劑

兔抗鼠SP、VIP抗體，武漢博士德生物工程有限公司提供．

1.3 自制結(jié)腸擴張 (colorectal distention，CRD)刺激球囊

球囊擴張器選用安全套頭端3 cm，用4號手術絲線與加工后的一次性輸液器采液端導管扎緊(氣囊長度25 mm，直徑2．0 mm)．距球囊頭端6 cm處扎絲線作為插入時的深度標記．其外側(cè)開口端接一輸液用三通管(規(guī)格:CONNECTAPLUS3 White瑞典BD公司)，分別與10 mL注射器和XJ11D臺式血壓計相連．

2 實驗方法

2.1 動物分組

將100只SD大鼠隨機分為五組:空白組、模型組、多次電針組、單次電針組、單次針刺組,每組20只．

2.2 IBS造模方法

選用AL－Chaer內(nèi)臟敏感動物模型為基礎，稍改進．使用自制的刺激球囊，蘸少許醫(yī)用石蠟油，自大鼠肛門輕柔插入4～5 cm，大致達到大鼠的降結(jié)腸部位．每次氣囊打氣，維持腸道壓力60 mmHg，保留l min，然后撤氣．每次刺激之前，檢查球囊的密閉性;給予擴張刺激前，可預先刺激大鼠肛門部，使其排盡大便，以減少糞團對擴張程度的影響．一天內(nèi)給予操作一次，總共持續(xù)刺激2周．正常對照組大鼠不作任何處理．

2.3 治療方法

2．3．1 單次電針

電針時取大鼠雙側(cè)“上巨虛 (ST37)”，通過G6805－1A型電針治療儀，采用疏密波，密波100 Hz/3s，疏波4 Hz/3s交替，刺激強度1 mA，以大鼠后肢輕輕抖動但不產(chǎn)生嘶叫為度，持續(xù)30 min．單次針刺組大鼠給予同樣操作，毫針刺入穴位但不進行通電刺激．次日采集標本．

2．3．2 隔日多次電針

電針方法同上，隔日給予一次，持續(xù)給予4次，治療結(jié)束次日采集標本．

2.4 標本采集

標本采集前大鼠禁食不禁水12 h．大鼠給予腹腔注射20%烏拉坦0．35 mL/100g麻醉，動物深昏迷狀態(tài)下打開腹腔，取距肛門6 cm處結(jié)腸1～2 cm，矢狀剖開，鹽水清洗，平鋪于濾紙上，10%甲醛固定，冰箱4℃保存．

2.5 結(jié)腸SP、VIP免疫組化染色

按 SABC(stret avidin－biotin complex)法進行．

2.6 結(jié)腸SP、VIP、免疫組化染色圖像分析

應用BI－2000圖像分析系統(tǒng)，進行灰度值分析．

2.7 統(tǒng)計學處理

3 結(jié)果

3.1 對鼠結(jié)腸SP表達的影響

免疫組化染色圖像分析表明:與多次電針組相比，模型組大鼠SP表達有明顯增強 (P＜0．01);單次電針組、單次針刺組大鼠SP表達明顯增多 (P＜0．01)．單次電針較單次針刺組大鼠SP表達無顯著性差異(P＞0．05)．見表 1．

3.2 大鼠結(jié)腸VIP表達的影響

免疫組化染色圖像分析表明:與多次電針組相比，模型組大鼠 VIP表達明顯降低(P＜0．01);單次電針組、單次針刺組大鼠VIP表達明顯降低(P＜0．01)．單次電針較單次針刺組大鼠VIP表達無顯著性差異(P＞0．05)．

表1 IBS大鼠模型組、治療組和空白組結(jié)腸SP表達的比較(±s)

表1 IBS大鼠模型組、治療組和空白組結(jié)腸SP表達的比較(±s)

注:與模型組相比*P＜0．05，**P＜0．01;與單次針刺組相比☆P＜0．05，☆☆P＜0．01;與單次電針組相比△△P＜0．01;與空白組相比※P＜0．05，※※P＜0．01．

組 別 灰度值模 型 組 95．38±1．02☆※※單次針刺組 94．69±1．06※※單次電針組 93．82±1．13*※※多次電針組 84．17±1．48**△△☆☆※空 白 組 82．29±1．06**△△☆☆

表2 IBS大鼠模型組、治療組和空白組

4 結(jié)論

SP作為一種重要的胃腸肽廣泛地分布于腸神經(jīng)系統(tǒng)和整個胃腸道[6]，既可以激素的形式亦可作為神經(jīng)遞質(zhì)參與胃腸運動的調(diào)控．在哺乳類動物腸道P物質(zhì)主要定位于感覺神經(jīng)纖維，具有參與感覺(特別是傷害性刺激)信息的傳遞、增加血管通透性和調(diào)節(jié)腸運動等十分重要的生物活性[7]．本實驗結(jié)果顯示，針刺后結(jié)腸SP免疫反應陽性神經(jīng)、神經(jīng)元含量明顯降低，且表現(xiàn)多次電針效果優(yōu)于單次電針、單次針刺．結(jié)果提示結(jié)腸中SP的含量增加在IBS中可能起著重要的作用．以往實驗研究證明SP是胃腸運動調(diào)節(jié)中主要的興奮性神經(jīng)遞質(zhì)[8]，新生期持續(xù)腸道機械刺激導致含SP的肽能細神經(jīng)纖維末稍(傷害性感受器)處于致敏狀態(tài)，同時其受體NK 1在各種靶細胞中表達增加．一旦再接受較低強度傷害刺激信息時，SP肽能神經(jīng)纖維就能產(chǎn)生神經(jīng)沖動，一方面向中樞部位傳遞，產(chǎn)生痛覺過敏，另一方面肽能感覺神經(jīng)纖維又可通過軸索反射和神經(jīng)節(jié)反射逆向釋放SP，與各種靶細胞結(jié)合發(fā)揮生物學效應，導致腸道動力紊亂、血管滲透性改變、腺上皮的分泌和肥大細胞的脫顆粒等，而肥大細胞脫顆粒產(chǎn)生的生物活性物質(zhì) (如組胺、5－羥色胺、前列腺素、淋巴因子等)反過來又可進一步引起肽能感覺神經(jīng)末稍的去極化 (尤其正常情況下處于非功能狀態(tài)的傷害刺激感受器)，降低其感覺閾值，從而形成一種正反饋機制，造成腸道持續(xù)的感覺高敏感狀態(tài)和動力功能紊亂．本實驗顯示電針上巨虛穴能降低結(jié)腸中SP的陽性神經(jīng)含量，提示電針上巨虛穴可能通過胃腸道局部SP來降低胃腸壁內(nèi)神經(jīng)元的興奮性，減輕腸道高敏狀態(tài)和動力功能紊亂，且表現(xiàn)多次電針效果優(yōu)于單次電針、單次針刺．

本實驗中，我們還觀察到多次電針能顯著增加結(jié)腸中的VIP免疫反應陽性產(chǎn)物含量，且表現(xiàn)多次電針效果優(yōu)于單次電針、單次針刺．VIP是ENS中具代表性和研究較深入的神經(jīng)肽，也是重要的肽類神經(jīng)遞質(zhì)之一，許多研究已證明VIP在胃腸運動調(diào)節(jié)中主要起抑制效應．故此，上述結(jié)果表明電針上巨虛穴還可能通過增加VIP對胃腸道的抑制作用，降低胃腸運動．

綜上所述，本實驗結(jié)果表明電針上巨虛穴減輕內(nèi)臟痛敏的作用與胃腸道SP的分布減少及VIP的分布增加存在著密切關系，且多次電針效果優(yōu)于單次電針跟單次針刺．電針上巨虛是否對胃腸道其他胃腸激素和神經(jīng)遞質(zhì)也產(chǎn)生影響，還需作更深入的研究．

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