張宇思,龔祝南,石雪萍
(1.南京師范大學 生命科學學院,江蘇南京 210046;南京野生植物綜合利用研究院,江蘇南京 210042)
銀杏葉為銀杏科銀杏屬植物 (Ginkgo biloba)銀杏樹的葉,根據(jù)現(xiàn)有科學報道,銀杏葉中含有藥用有效成分達 170多種,其中黃酮類約有 40余種,按化學結(jié)構(gòu)可分為 3類,即單黃酮類 32種,雙黃酮類 6種,兒茶素類 4種[1-5]。國內(nèi)外對銀杏的化學成分、藥理作用已進行了廣泛的研究,現(xiàn)已報道銀杏葉有抗氧化作用、促智功能、抗焦慮作用及鎮(zhèn)靜作用、調(diào)節(jié)血脂功能、抑制血小板的功能、擴張腦血管防止血拴形成、參與腎上腺皮質(zhì)類固醇的調(diào)節(jié),對腦缺血再灌注損傷保護作用,對糖尿病大鼠腎臟保護作用等。國內(nèi)對銀杏葉的研究和開發(fā)亦已做了大量的工作,以銀杏葉為原料的藥物和保健食品等已經(jīng)上市[6-10]。我院對銀杏葉食用毒理學安全性也有了全面評價的報道[11]。本文旨在就銀杏葉對調(diào)節(jié)血脂作用進行探討。為銀杏葉在預(yù)防高脂蛋白血癥和心血管疾病方面提供科學的依據(jù)。
1.1.1 樣品
南京野生植物綜合利用研究院提供銀杏葉樣品,鑒定種為 Ginkgo biloba。
高脂飼料:按衛(wèi)生部衛(wèi)生監(jiān)督司頒布的《保健食品功能學評價程序和檢驗方法》中的方法配制,基礎(chǔ)飼料 93.8%、膽固醇 1%、豬油 5%、膽鹽0.2%。
1.1.2 主要儀器
電子天平 (SL-1001型,上海民橋電子儀器廠)、分光光度計 (722型,上海第三分析儀器廠)。
1.1.3 試驗動物
昆明雄性 SD大鼠,由南京江寧青龍動物繁殖場提供。生產(chǎn)許可證號:SCXK(蘇)2001-0010:使用許可證號:SYXK(蘇)2001-0017。
1.2.1 樣品處理
銀杏葉粉狀樣品 20 g,常壓下,在溫度 80~90℃的蒸餾水中浸泡 50 min,每次浸泡的蒸餾水量為 400 mL,浸泡 2次,合并浸泡液并濃縮至150 mL,備用,用于動物灌胃。
1.2.2 實驗動物分組
將健康成年昆明雄性 SD大鼠 50只,平衡喂養(yǎng)5 d后,取尾血,測定血清總膽固醇 (TCH)、血清甘油三酯(TG)和血清高密度脂蛋白膽固醇 (HDLCH)。篩選出體重為 150~200 g的 40只進行分組,按 TCH值隨機分為 4組,每組 10只。設(shè)高脂對照組,低劑量組,中劑量組和高劑量組。
1.2.3 高脂血癥大鼠造型及給藥
從實驗開始到結(jié)束,高脂對照組用蒸餾水灌胃;銀杏葉茶低劑量組,用上述浸泡濃縮液稀釋 4倍灌胃,相當于 0.33 g/kg·bw/d;銀杏葉中劑量組,用上述浸泡濃縮液稀釋 2倍灌胃,相當于 0.67 g/kg·bw/d;銀杏葉高劑量組,用上述浸泡濃縮液灌胃,相當于1.33/kg·bw/d。灌胃體積為 2.0 mL/200 g·bw,每日一次,動物單籠飼養(yǎng),自由攝取高脂飼料。連續(xù)灌胃30 d后,取尾血,測定血清 TCH、血清 TG和血清HDL-CH。[12-13]
1.2.4 檢測方法
血清 TCH、TG、HDL-CH采用酶法測定,試驗前測定使用由上海榮盛生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的試劑盒進行測定,批號為 20020228。試驗結(jié)束時使用日立 -7150全自動生化分析儀進行測定。
1.2.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計處理方法[12]
采用 SAS統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進行方差分析,用Dunnett’s T檢驗進行各試驗組與對照組的比較。
銀杏葉對各組動物血清中 TCH的影響見表1。
表1 銀杏葉對大鼠血清 TCH的影響(mmol/L)
如表1所示,試驗前各組動物血清 TCH的檢測值無顯著性差異,試驗后各組動物血清 TCH水平差異有非常顯著意義。經(jīng) Dunnet’s T檢驗,銀杏葉中劑量組和高劑量組血清 TCH水平與高脂對照組的差異有顯著性 (P<0.05)。說明銀杏葉在 0.67 g/kg·bw/d和 1.33 g/kg·bw/d的劑量時 ,具有降低實驗大鼠血清 TCH的作用。
銀杏葉對各組動物血清中 TG的影響見表2。
表2 銀杏葉對大鼠血清 TG的影響 (mmol/L)
如表2示,試驗前各組動物血清 TG的檢測值無顯著性差異,試驗后各組動物血清 TG水平差異有顯著意義。經(jīng) Dunnett’s T檢驗,銀杏葉高劑量組血清 TG水平與高脂對照組的差異有顯著性 (P<0.05)。說明銀杏葉在 1.33 g/kg·bw/d的劑量時,具有降低實驗大鼠血清 TG的作用。
從表2和表3可以看出,高脂對照組動物試驗后血清 TCH和 TG水平顯著高于試驗前的水平 (t檢驗,P<0.05),說明本次試驗高脂模型是成立的。
銀杏葉對各組動物血清中 HDL-CH的影響見表3。
表3 銀杏葉對大鼠血清 HDL-CH影響
如表3示,試驗前各組動物血清 HDL-CH的檢測值無顯著性差異,試驗后各組動物血清 HDLCH水平差異有顯著意義。經(jīng) Dunnett’s T檢驗,銀杏葉中劑量組和高劑量組血清 HDL-CH水平與高脂對照組的差異有顯著性 (P<0.05)。說明銀杏葉在 0.67 g/kg·bw/d和 1.33 g/kg·bw/d的劑量時 ,具有升高實驗大鼠血清 HDL-CH的作用。
在 0.67、1.33 g/kg·bw/d劑量條件下 ,銀杏葉可有效降低高脂血癥大鼠血清 TCH,升高高脂血癥大鼠 HDL-CH水平。劑量 1.33 g/kg·bw/d劑量下,能夠降低大鼠血清 TG的含量。因此,銀杏葉茶在一定劑量條件下具有較好地調(diào)節(jié)高血脂動物的血脂的功能。銀杏葉是純天然制劑,它不僅可以降低血清總膽固醇、甘油三酯,升高高密度脂蛋白含量,而且安全可靠,無毒副作用。對于防治老年人動脈粥樣硬化及冠心病有著重要意義。我國是銀杏的發(fā)源地,其資源占世界總量的 70%左右,因此,銀杏葉的開發(fā)具有廣闊的市場前景,本研究為銀杏葉資源的合理利用以及功能保健茶的開發(fā)提供了較好的理論依據(jù)。
[1] 鄧永強,赫 慧,王 宏,等.銀杏葉及其提取物藥理作用研究進展[J].藥物流行病學雜志,2004,13(1):10-14.
[2] Chen X,Chen W Z.Recent phremaeolgoieal progress of Ginkgo biloba extract for cardiovascular and neuronal disease[J].Chin Jlnteg Trad West Med,1996(2):300-302.
[3] Barkats M,Venault P,Christen Y,et a1.Effect of Longterm treatment with EGB761 on aeg-dependent structural changes in the hippocampi of three inbred mouse strains[J].Life Sci,1994,56(4):213-215.
[4] Satyan K S,Jaiswal A K,Ghosal S,et a1.Anxiolytic activity of ginkgolic acid conjugates fromIndina Ginkgo biloba[J].Psychophar maeology,1998,136(2):148-152.
[5] 周月蟬,胡怡秀,藏雪冰,等.銀杏茶調(diào)節(jié)血脂和抗氧化作用實驗研究[J].實用預(yù)防醫(yī)學,2000,7(2):135-136.
[6] 沈連忠,崔燕英,王淑仙,等.銀杏葉提取物血液流變學研究[J].中國中藥雜志,1998,23(10):622-623.
[7] 謝人明,湯臣康,馬樹德,等.銀杏葉注射液對動物循環(huán)作用的研究[J].中草藥,1986,17(8):23-24.
[8] 丁勤學.銀杏葉對中樞神經(jīng)系統(tǒng)的作用及其分子機理[J].國外醫(yī)學(中醫(yī)中藥分冊),1998,21(1):6-7.
[9] 周蘭蘭,明 亮,江 勤,等.銀杏葉提取物對反復(fù)腦缺血再灌注損傷的保護作用[J].中國中西醫(yī)結(jié)合雜志,2000,20(5):356-357.
[10] 廖 璞,王淑琴,廖血松,等.銀杏葉提取物對糖尿病大鼠腎臟保護作用的實驗研究[J].中國藥房,2000,11(3):114-115.
[11] 張衛(wèi)明,顧龔平,史勁松.銀杏葉食用安全性的毒理學評價[J].南京師范大學學報:自然科學版,2005,28(1):28-30.
[12] 明道續(xù).生物統(tǒng)計附試驗設(shè)計[M].北京:中國農(nóng)業(yè)出版社,2002:67-89.