袁連根　劉　丹　李延成

[摘要] 目的 探索紅細(xì)胞在冰凍解凍過程中形態(tài)體積的動態(tài)變化情況,尋求科學(xué)的冰凍解凍程序。方法 通過測定觀察紅細(xì)胞在冰凍、解凍洗滌過程中的體積和形態(tài),并運用統(tǒng)計學(xué)方法,研究紅細(xì)胞的變化規(guī)律。結(jié)果 紅細(xì)胞在冰凍解凍過程中體積由大逐漸變小直至恢復(fù)正常,形態(tài)由大刺毛細(xì)胞或大球形細(xì)胞逐漸恢復(fù)正常紅細(xì)胞的圓盤狀。結(jié)論 隨著紅細(xì)胞冰凍解凍過程的順次進(jìn)行,紅細(xì)胞體積和形態(tài)逐漸恢復(fù)正常。

[關(guān)鍵詞] 紅細(xì)胞冰凍; 紅細(xì)胞解凍; 細(xì)胞體積; 洗滌

[中圖分類號] R197.2 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A [文章編號] 1673-9701(2009)23-113-02

紅細(xì)胞的冰凍保存解決了特殊血型血液和自體血液長期儲存的問題,加入細(xì)胞內(nèi)冰凍保護(hù)劑甘油后,紅細(xì)胞在-80℃條件下可保存10年,臨床使用前要做復(fù)蘇、洗滌去除冰凍保護(hù)劑的處理[1]。本研究著重于觀察分析紅細(xì)胞冰凍解凍過程中各步驟細(xì)胞形態(tài)體積的動態(tài)變化情況,為紅細(xì)胞解凍過程中關(guān)鍵控制點的操作提供事實依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來源

衡水市中心血站Rh陰性紅細(xì)胞冰凍保存、Rh陰性冰凍紅細(xì)胞解凍后供應(yīng)臨床各20例。

1.2 工藝流程

1.2.1 紅細(xì)胞的冰凍 加入57.1%的甘油,使甘油在紅細(xì)胞中的濃度達(dá)40%,于-80℃冰箱冰凍保存。

1.2.2 一洗(第一遍洗滌紅細(xì)胞) 于38～40℃水浴解凍紅細(xì)胞,然后依次加入濃鹽水、羥乙基淀粉,離心棄去上清液。

1.2.3 二洗(第二遍洗滌紅細(xì)胞) 依次加入羥乙基淀粉、生理鹽水洗滌,離心棄去上清液。

1.2.4 三洗(第三遍洗滌紅細(xì)胞)加入生理鹽水洗滌,離心棄去上清液。

1.2.5 四洗(第四遍洗滌紅細(xì)胞) 加入生理鹽水洗滌,離心棄去上清液。

1.2.6 懸浮 紅細(xì)胞用生理鹽水懸浮后供應(yīng)臨床。

1.3 方法

在工藝過程中紅細(xì)胞冰凍前、各洗滌過程離心棄去上清液前、生理鹽水懸浮后分別取樣,用顯微鏡和血細(xì)胞計數(shù)儀觀察檢測紅細(xì)胞形態(tài)體積的動態(tài)變化,各樣本相互對照研究并與正常紅細(xì)胞對照研究。

2 結(jié)果

流程各階段取樣,與正常人紅細(xì)胞體積(90fL)[2]作對比分析,結(jié)果見表1。將各階段紅細(xì)胞體積相互對比觀察,分析細(xì)胞大小變化的顯著性差異,結(jié)果見表2,3。

3 討論

紅細(xì)胞的冰凍、解凍過程是一個比較復(fù)雜的過程,涉及細(xì)胞微細(xì)結(jié)構(gòu)的變化、功能的恢復(fù)等。通過與正常紅細(xì)胞對照分析,紅細(xì)胞在加入冰凍保護(hù)劑和解凍洗脫甘油過程一洗——三洗后的紅細(xì)胞體積都大于正常,四洗和懸浮后的紅細(xì)胞體積恢復(fù)正常。通過顯微鏡觀察,紅細(xì)胞的形態(tài)由加入甘油后的大刺毛細(xì)胞或大球形細(xì)胞逐漸恢復(fù)至圓盤狀。形態(tài)大小的恢復(fù)是決定其輸入人體后發(fā)揮正常生理功能的基礎(chǔ)。

紅細(xì)胞在加入甘油后體積與解凍第一次洗滌后的體積無明顯變化,顯微鏡下,其形態(tài)也無明顯變化。在這個過程中,紅細(xì)胞內(nèi)的滲透壓變化很大,但形態(tài)體積基本無變化,說明紅細(xì)胞在加入甘油后已處于高度膨脹狀態(tài),所以在甘油的加入過程和解凍時第一次洗滌過程,液體的加入速度一定要慢,并有足夠的平衡時間,促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)外滲透壓的平衡,避免造成紅細(xì)胞的破裂。一洗——四洗過程中相互之間細(xì)胞體積的變化比較顯著,在此過程中紅細(xì)胞體積由大逐漸變小,四洗和懸浮后紅細(xì)胞之間,體積無明顯差異,說明四洗后紅細(xì)胞體積已恢復(fù)正常。

[參考文獻(xiàn)]

[1] 王培華. 輸血技術(shù)學(xué)[M]. 北京:人民衛(wèi)生出版社,1998:68-70.

[2] 全國衛(wèi)生專業(yè)資格考試專家委員會. 2008年全國衛(wèi)生資格考試指導(dǎo)——臨床醫(yī)學(xué)檢驗與技術(shù)(中級)[M]. 北京:人民衛(wèi)生出版社,2008:20.

(收稿日期:2009-03-14)