黃桂蘋

[摘要] 目的 比較金標(biāo)快速檢測(cè)板、酶聯(lián)免疫法和熒光定量PCR檢測(cè)乙肝五項(xiàng)結(jié)果的一致性,分析其產(chǎn)生原因及臨床應(yīng)用價(jià)值。方法 對(duì)我單位2004年1月～2008年1月511例疑似乙肝患者血清進(jìn)行金標(biāo)快速檢測(cè)板、酶聯(lián)免疫法和熒光定量PCR三種方法檢測(cè),比較三種方法的一致性。結(jié)果 HBsAg(+)、HBeAg(+)、HBcAb(+)組(大三陽組)患者287例經(jīng)酶聯(lián)免疫法和熒光定量PCR檢測(cè)全部檢出,符合率100%,金標(biāo)快速檢測(cè)板檢測(cè)出285例,符合率99.3%;HBsAg(+)、HBeAb(+)、HBcAb(+)組(小三陽組)患者210例經(jīng)酶聯(lián)免疫法檢出208例,符合率99.04%,熒光定量PCR檢測(cè)全部檢出,金標(biāo)快速檢測(cè)板檢測(cè)出199例,符合診斷率94.76%。結(jié)論 傳統(tǒng)酶聯(lián)免疫法檢測(cè)乙型肝炎病毒檢出率高,結(jié)果準(zhǔn)確,出現(xiàn)少見模式時(shí)易出現(xiàn)檢測(cè)錯(cuò)誤;熒光定量PCR檢測(cè)法靈敏度高,可為臨床HBV感染、復(fù)制及傳染性的判斷提供可靠的依據(jù);金標(biāo)快速檢測(cè)板方法簡(jiǎn)單、快速,但靈敏度不如前兩種方法,較適于急診檢驗(yàn)。

[關(guān)鍵詞] 金標(biāo)快速檢測(cè)板; 酶聯(lián)免疫法; 熒光定量PCR檢測(cè); 乙肝五項(xiàng); HBV

[中圖分類號(hào)] R512.62;R446 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1673-9701(2009)23-112-02

乙型肝炎是常見的傳染病之一,我國(guó)是該病的高發(fā)區(qū),人群感染率約為10%[1]。隨著臨床檢測(cè)技術(shù)的不斷發(fā)展,乙肝病毒的檢測(cè)方法隨之增加。我單位自2004年1月～2008年1月對(duì)511例疑似乙肝患者血清進(jìn)行酶聯(lián)免疫(ELISA法)法、金標(biāo)快速檢測(cè)板法和熒光定量PCR檢測(cè)法進(jìn)行比較分析,現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

資料來源于2004年1月～2008年1月來我單位就診的511例疑似乙型肝炎患者,其中男298例,女213例,年齡16～73歲。511例疑似病例首先經(jīng)金標(biāo)快速檢測(cè)板檢測(cè),未檢出HBeAb者,采用酶聯(lián)免疫法補(bǔ)充檢測(cè),后經(jīng)熒光定量PCR檢測(cè)法進(jìn)行檢測(cè)和量化判斷。

1.2 方法

1.2.1 儀器和試劑 金標(biāo)快速檢測(cè)板采用艾康生物技術(shù)(杭州)有限公司產(chǎn)品,批號(hào)為:200405024。ELISA法檢測(cè)試劑由北京瑪諾生物制藥有限公司生產(chǎn),國(guó)藥準(zhǔn)字S19983029。深圳匹基生物工程股份有限公司生產(chǎn)的HBV-DNA熒光定量檢測(cè)試劑盒,批號(hào)20050901。德靈BEP2000型全自動(dòng)酶聯(lián)免疫系統(tǒng)分析儀,美國(guó)應(yīng)用生物系統(tǒng)公司Prism?誖 7000型實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀。全部檢測(cè)嚴(yán)格按照儀器和試劑和說明書操作。

1.2.2 檢測(cè)方法 金標(biāo)快速檢測(cè)板采用快速免疫層析法,其中HBsAg、HBeAg采用雙抗體夾心法,HBsAb采用雙抗原夾心法,HBeAb、HBcAb采用競(jìng)爭(zhēng)抑制法,按說明書要求操作并判斷結(jié)果。ELISA法采用全自動(dòng)酶免系統(tǒng)分析儀,以S/CO值判定結(jié)果。熒光定量PCR檢測(cè)的定量結(jié)果采用求對(duì)數(shù)平均值的方法計(jì)算HBV-DNA的平均拷貝數(shù)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS12.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件,組間采用χ2檢驗(yàn),P<0.05具有顯著性差異。

2 結(jié)果

以目前最靈敏的熒光定量PCR檢測(cè)法為參照。511例疑似乙肝患者血清標(biāo)本中,檢出HBV-DNA陽性497例。大三陽合小三陽組的檢出率三種方法分別為:99.3%和94.76%;100%和99.04%;100%。見表1。

3 討論

本組研究表明,金標(biāo)快速檢測(cè)板、酶聯(lián)免疫法和熒光定量PCR檢測(cè)乙肝病毒三種方法都比較實(shí)用,對(duì)于檢測(cè)HBV的感染與復(fù)制,三種方法都具有一定的HBV-DNA檢出率。金標(biāo)快速檢測(cè)板有11例未能檢出HBeAb,符合率94.76%,由于HBeAb的檢測(cè)是采用競(jìng)爭(zhēng)法,結(jié)果的判定是比較檢測(cè)線和控制線顏色的深淺,而當(dāng)這兩條線顏色相近時(shí),肉眼辨色困難而影響判定,因此造成金標(biāo)快速檢測(cè)板HBeAb的假陰性增多[2]。而對(duì)于HBcAb的檢測(cè),金標(biāo)快速檢測(cè)板的靈敏度和特異性稍差[3]。酶聯(lián)免疫法出現(xiàn)少見模式時(shí),如HBsAb(+)、HBeAb(+)及HBeAb(+)ELISA法檢測(cè)為HBeAb陽性,HBcAb陰性,而熒光定量PCR檢測(cè)法則HBeAb伴隨HBcAb同時(shí)陽性。出現(xiàn)上述原因主要是由于酶聯(lián)免疫法測(cè)HBcAb標(biāo)本是1∶30稀釋后檢測(cè),而測(cè)HBeAb則用原血清。因此出現(xiàn)很多HBeAb陽性而HBcAb陰性模式,而金標(biāo)快速檢測(cè)板和熒光定量PCR檢測(cè)法均用的原血清,所以不存在此問題。另外一個(gè)原因可能是酶聯(lián)免疫法采集的標(biāo)本水浴處理時(shí)間短,血球沉降不充分,試管壁上有血痂,快速離心導(dǎo)致溶血,因血球中過氧化物酶溶出粘附于酶標(biāo)板未被洗去,產(chǎn)生過氧化物酶樣作用而顯色致假陽性[4]。熒光定量PCR檢測(cè)法采用了完全閉管和熒光探針,通過光電傳導(dǎo)系統(tǒng)直接探測(cè)PCR擴(kuò)增過程中熒光信號(hào)的變化以獲得定量結(jié)果,從而決定被測(cè)物質(zhì)的濃度不受黃膽溶血及脂血影響,避免了交叉感染,因此其假陽性率較低[5]。此外熒光定量PCR檢測(cè)法還可以準(zhǔn)確的反應(yīng)出HBV-DNA的復(fù)制水平、病程變化和治療恢復(fù)情況[6]。

綜上所述,三種方法檢測(cè)乙肝病毒各具優(yōu)勢(shì)。金標(biāo)快速檢測(cè)板法靈敏、簡(jiǎn)單、快速,適合于急診應(yīng)用;傳統(tǒng)的酶聯(lián)免疫法設(shè)備簡(jiǎn)單、收費(fèi)低廉、易于開展,適用于常規(guī)檢查[7];而熒光定量PCR檢測(cè)法非常精確,其高靈敏度可為早期診斷HBV感染提供依據(jù),并可提供準(zhǔn)確的HBV-DNA感染、復(fù)制和傳染性等情況。建議臨床根據(jù)實(shí)際情況,疑似乙肝患者采用多種方法檢測(cè)乙肝病毒[8]。

[參考文獻(xiàn)]

[1] 李立明. 流行病學(xué)[M]. 第5版. 北京:人民衛(wèi)生出版社,2004:481-484.

[2] 欒建敏,杜春煥. 乙肝病毒標(biāo)志物檢測(cè)的項(xiàng)目和意義[J]. 臨床輔助檢查,2006,8(152):86-87.

[3] 龐志釗,宋立志,劉桂芳,等. 濟(jì)陽縣15～40歲人群乙型肝炎病毒感染標(biāo)志調(diào)查[J]. 中國(guó)計(jì)劃免疫,2005,11(2):110-112.

[4] 劉亞濱,王文良,付玉平. 3826名醫(yī)學(xué)生乙型肝炎病毒血清標(biāo)志物檢測(cè)[J]. 中國(guó)公共衛(wèi)生,2006,22(8):955.

[5] 印淑慧,鄭太英. 沈陽市于洪區(qū)1～5歲兒童HBsAg和抗-HBs調(diào)查[J]. 中國(guó)醫(yī)藥導(dǎo)報(bào),2006,3(19):120.

[6] 梁曉峰,陳園軍,王曉軍,等. 中國(guó)3歲以上人群乙型肝炎血清流行病學(xué)研究[J]. 中華流行病學(xué)雜志,2005,26(9):655-658.

[7] 金莞爾. 不同人群乙肝病毒感染狀況分析[J]. 中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志,2004, 14(3):316.

[8] 中華醫(yī)學(xué)會(huì)肝病學(xué)分會(huì),中華醫(yī)學(xué)會(huì)感染病學(xué)分會(huì). 慢性乙型肝炎防治指南(節(jié)選)[J]. 中華預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志,2006,40(2):136-140.

(收稿日期:2009-03-04)