康頌建　史獻(xiàn)君等

康頌建史獻(xiàn)君史永芝曾兆麟

(泰山醫(yī)學(xué)院生理聽覺研究室,山東271000;1泰山醫(yī)學(xué)院第一教學(xué)醫(yī)院;2上海中醫(yī)藥大學(xué))

摘要將動(dòng)物隨機(jī)分成3組:GE組動(dòng)物肌肉注射慶大霉素,每天80 mg/kg;針刺組肌肉注射慶大霉素同GE組,每天電針雙側(cè)"聽宮"、"翳風(fēng)"、"腎俞"穴1次;對(duì)照組動(dòng)物不做任何處理。以腦干聽覺誘發(fā)電位(BAEP)和琥珀酸脫氫酶(SDH)組織化學(xué)檢測為指標(biāo)。結(jié)果:對(duì)照組BAEP反應(yīng)閾無明顯變化,耳蝸血管紋SDH染色呈紫藍(lán)色;GE組動(dòng)物BAEP反應(yīng)閾明顯升高,SDH顯色變淡或消失;針刺組BAEP反應(yīng)閾升高幅度及血管紋SDH顯色變化明顯低于GE組。結(jié)論:電針能減輕GE耳毒性;對(duì)耳蝸血管紋SDH有保護(hù)作用。

主題詞耳蝸/酶學(xué)琥珀酸脫氫酶/針灸效應(yīng)慶大霉素類/毒性電針

針刺治療耳聾是中醫(yī)學(xué)的傳統(tǒng)方法,對(duì)藥物性耳聾的防治作用已有報(bào)道,針刺有保護(hù)耳蝸酸性磷酸酶、ATP酶和琥珀酸脫氫酶(Succinate dehydrogenase,SDH)活性,對(duì)抗氨基糖甙類抗生素耳毒性的作用^[1,2]。針刺能否保護(hù)耳蝸血管紋SDH的活性,尚未見報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)主要觀察電針對(duì)慶大霉素(gentamicin,GE)致聾豚鼠耳蝸血管紋細(xì)胞SDH變化的影響。

1材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組選用耳郭反射正常,日齡45～65天,平均53天,體重為250～350 g的健康雜色豚鼠(由泰安生物制品研究所動(dòng)物園提供),雌雄兼用,隨機(jī)分成3組:GE組10只,每天肌肉注射GE 80 mg/kg體重,連續(xù)注射20天;針刺組14只,肌肉注射GE同GE組,每天注射GE后1h給予針刺1次;對(duì)照組5只,不做任何處理,只作為耳蝸血管紋SDH的正常對(duì)照。

1.2腦干聽覺誘發(fā)電位測定用固定裝置固定豚鼠,測定清醒狀態(tài)下的豚鼠腦干聽覺誘發(fā)電位(BAEP)反應(yīng)閾。用YJC-A型誘發(fā)電位儀測定用藥前和用藥及針刺后(隔5天測1次)BAEP反應(yīng)閾。用短聲刺激,由聲刺激器輸入波寬為0.1 ms方波電脈沖經(jīng)EPL-903型耳機(jī)輸出,10次/s。放大器通頻帶為80 Hz～3 kHz,增益2000,疊加200次。引導(dǎo)電極置顱頂部,參考電極及接地電極分別置于同側(cè)和對(duì)側(cè)乳突部。測定BAEP反應(yīng)閾以IV波剛出現(xiàn)時(shí)的刺激強(qiáng)度dB值為反應(yīng)閾值。

1.3針刺針刺動(dòng)物處于清醒狀態(tài),用固定裝置固定,針刺穴位參照文獻(xiàn)報(bào)道的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物解剖學(xué)與人體穴位相應(yīng)部位^[1],取雙側(cè)"聽宮"、"翳風(fēng)"和"腎俞"穴,用電針刺激法(用G 6805-1型針刺治療儀,青島華聲儀器廠產(chǎn)),連續(xù)輸出,9次/s;刺激強(qiáng)度以針刺周圍組織顫動(dòng),動(dòng)物能忍受為宜,持續(xù)刺激15 min,每天8時(shí)進(jìn)行針刺,連續(xù)針刺20天。

1.4組織化學(xué)檢測停止用藥和針刺后1天,測定耳蝸血管紋SDH。SDH顯示采用硝基藍(lán)四氮鹽法,染色程序改變?yōu)檫m合于耳蝸組織顯色。作用液配方^[3]:0.2 mol/L琥珀酸15 ml,0.2 mol/L磷酸鹽緩沖液(pH為7.4)15 ml,0.1%硝基藍(lán)四氮鹽15 ml,上述各液用時(shí)混合即可。染色程序:麻醉動(dòng)物后處死,立即取耳蝸,迅速在蝸尖部鉆孔,并將蝸窗和前庭窗開放,用0 ℃ 60%丙酮液灌流固定,用雙蒸餾水灌洗后,再灌流37 ℃作用液,然后將耳蝸置于37 ℃作用液中溫育1～2 h。將溫育后的耳蝸放于10%磷酸緩沖中性甲醛溶液中固定8 h以上,然后按照耳蝸螺旋韌帶硬鋪片技術(shù)做螺旋韌帶鋪片^[4],光鏡下觀察耳蝸血管紋SDH的變化。標(biāo)本染色程度用721型分光光度計(jì)(上海第三分析儀器廠產(chǎn))測定吸光度。各組動(dòng)物SDH的測定都是在嚴(yán)格控制相同條件下進(jìn)行的。

2結(jié)果

2.1BAEP閾變化GE組和針刺組動(dòng)物在用藥后BAEP反應(yīng)閾分別都發(fā)生不同程度的升高;在用藥前和用藥后20天比較,都有明顯差異。在用藥后20天組間比較,GE組升高明顯,針刺組升高幅度較小,兩組間差異顯著(P<0.05);對(duì)照組動(dòng)物BAEP反應(yīng)閾無明顯改變(見表1)。2.2組織化學(xué)檢測光鏡下觀察正常豚鼠耳蝸螺旋韌帶鋪片血管紋細(xì)胞和毛細(xì)血管壁細(xì)胞的SDH顯色呈深紫藍(lán)色,分布均勻,血管紋細(xì)胞及毛細(xì)血管壁均能明顯辨認(rèn),細(xì)胞膜及血管壁邊界清楚(見副封1,圖1),與文獻(xiàn)報(bào)道一致^[4]。GE組耳聾動(dòng)物耳蝸血管紋細(xì)胞SDH顯色明顯變淡或消失,部分血管紋細(xì)胞膜邊界模糊(見副封1,圖2),表明血管紋細(xì)胞和毛細(xì)血管壁細(xì)胞SDH活性受到抑制,細(xì)胞受到不同程度的損害。針刺組耳聾動(dòng)物血管紋細(xì)胞及毛細(xì)血管壁細(xì)胞SDH顯色亦變淡,但較GE組輕,血管紋細(xì)胞及毛細(xì)血管壁能清楚辨認(rèn)(見副封1,圖3),表明SDH受到輕度抑制,細(xì)胞無明顯損害。標(biāo)本的染色程度用分光光度計(jì)測定,吸收波長為450 μm,各組標(biāo)本的吸光度(±s):對(duì)照組為0.0261±0.00162;GE組為0.0138±0.00313;針刺組為0.0198±0.00286;GE組和針刺組比較,差異具有非常顯著性意義(P<0.01)。

3討論

氨基糖甙類抗生素是第十七屆國際聽力學(xué)大會(huì)明確的18種致聾藥物中最重要的一種^{[5]。因該類抗生素是臨床上常用的藥物,故引起的耳聾患者仍不斷增加,防治其耳毒性仍是一個(gè)重要課題。該類抗生素耳毒性機(jī)制學(xué)說較多,對(duì)內(nèi)耳酶的影響是耳毒性機(jī)制之一。Gratacap比較了該類抗生素對(duì)豚鼠耳蝸血管紋與螺旋器超微結(jié)構(gòu)的損害,發(fā)現(xiàn)毛細(xì)胞的損害主要在溶酶體,而血管紋的損害主要在線粒體[6],SDH是線粒體酶(亦稱呼吸酶)的標(biāo)志酶,是催化檸檬酸循環(huán)中琥珀酸與延胡酸之間的反應(yīng)酶,該酶的活性改變反映了線粒體的功能變化[7]。文獻(xiàn)報(bào)道較多的是氨基糖甙類抗生素對(duì)耳蝸毛細(xì)胞SDH的抑制作用,對(duì)血管紋SDH變化報(bào)道較少。本結(jié)果表明該類抗生素對(duì)血管紋SDH有抑制作用,與文獻(xiàn)報(bào)道一致[2]。血管紋SDH顯色變淡或消失,是由于SDH活性受到抑制,其組織化學(xué)反應(yīng)減弱或中止所致,由此而引起細(xì)胞能量代謝障礙,需要能量的功能活動(dòng)不能正常進(jìn)行而受到損害。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示SDH顯色變化與血管紋細(xì)胞的損害程度呈平行。臨床上針刺治療耳聾的有效程度報(bào)道不同,一般認(rèn)為對(duì)輕度及早期耳毒性抗生素引起的耳聾治療效果較好[8,9]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明針刺有預(yù)防GE耳毒性的作用。針刺防治耳聾的機(jī)制是一個(gè)非常復(fù)雜的問題,目前所知甚少。針刺除能提高大腦聽覺中樞的興奮性外,不能排除對(duì)內(nèi)耳病理過程的康復(fù)作用[10]。文獻(xiàn)報(bào)道針刺有保護(hù)耳蝸酸性磷酸酶、ATP酶和SDH的活性已表明存在這種康復(fù)功能[1,2]}。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明電針能減輕GE的耳毒性作用;亦提示電針減輕GE耳毒性與對(duì)耳蝸血管紋細(xì)胞SDH的保護(hù)作用有關(guān)。由于電針保護(hù)了SDH活性,維持了線粒體的能量代謝功能,保證了細(xì)胞的需能功能,降低GE對(duì)血管紋細(xì)胞的損害,使血管紋的正常功能得以維持。我們以前實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明電針對(duì)耳蝸毛細(xì)胞的SDH有保護(hù)作用^[2],能降低GE對(duì)耳蝸毛細(xì)胞的損害作用。這些實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示保護(hù)耳蝸SDH的活性,可能是針刺能降低GE耳毒性的機(jī)制之一。

4參考文獻(xiàn)

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(吸光度由聶恒環(huán)老師協(xié)助測定,特此致謝)

(修回日期2000-06-16,齊淑蘭發(fā)稿)